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प्राथमिक डिसमेनोरिया वाले चूहों में तरल क्रोमैटोग्राफी-टेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग करके कच्चे और संसाधित साइपेरी राइजोमा नमूनों का विश्लेषण

Published: December 23, 2022 doi: 10.3791/64691
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

Summary

यहां, प्राथमिक डिसमेनोरिया वाले चूहों में अल्ट्रा-हाई परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-हाई-रिज़ॉल्यूशन टेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (यूपीएलसी-एमएस / एमएस) का उपयोग करके कच्चे और संसाधित साइपरी राइजोमा (सीआर) नमूनों का तुलनात्मक विश्लेषण प्रस्तुत किया जाता है। मेटाबोलाइट्स और नमूना घटकों के रक्त स्तर में परिवर्तन की जांच सिरका (सीआरवी) के साथ संसाधित सीआर और सीआर के साथ इलाज किए गए चूहों के बीच की गई थी।

Abstract

साइपेरी राइजोमा (सीआर) का व्यापक रूप से स्त्री रोग में उपयोग किया जाता है और चीन में महिलाओं की बीमारियों के इलाज के लिए एक सामान्य दवा है। चूंकि सिरका के साथ प्रसंस्करण के बाद सीआर के एनाल्जेसिक प्रभाव को बढ़ाया जाता है, सिरका (सीआरवी) के साथ संसाधित सीआर आमतौर पर चिकित्सकीय रूप से उपयोग किया जाता है। हालांकि, जिस तंत्र द्वारा एनाल्जेसिक प्रभाव को सिरका प्रसंस्करण द्वारा बढ़ाया जाता है, वह स्पष्ट नहीं है। इस अध्ययन में, अल्ट्रा-हाई प्रेशर लिक्विड क्रोमैटोग्राफीटेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (यूपीएलसी-एमएस /एमएस) तकनीक का उपयोग एक्सोजेनस घटकों और मेटाबोलाइट्स के रक्त स्तर में परिवर्तन की जांच करने के लिए किया गया था। परिणामों से इन चूहों के रक्त में 15 घटकों और दो मेटाबोलाइट्स के अलग-अलग स्तर का पता चला। उनमें से, सीआरवी समूह में (-)-माइर्टेनोल और [(1आर, 2 एस, 3 आर, 4 आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामेथिलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड का स्तर सीआर समूह की तुलना में काफी अधिक था। सीआरवी ने प्रोइन्फ्लेमेटरी, प्लेटलेट एकत्रीकरण और वाहिकासंकीर्णन गतिविधियों के साथ 2-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स और 4-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन के स्तर को कम किया और एराकिडोनिक एसिड और लिनोलिक एसिड चयापचय और असंतृप्त फैटी एसिड के जैवसंश्लेषण को संशोधित करके एनाल्जेसिक प्रभाव प्रदान किया। इस अध्ययन से पता चला है कि सिरका प्रसंस्करण सीआर के एनाल्जेसिक प्रभाव को बढ़ाता है और सीआरवी की कार्रवाई के तंत्र की हमारी समझ में योगदान देता है।

Introduction

प्राथमिक डिसमेनोरिया (पीडी) नैदानिक स्त्री रोग में सबसे प्रचलित स्थिति है। यह प्रजनन प्रणाली में श्रोणि विकृति के बिना मासिक धर्म से पहले या दौरान पीठ दर्द, सूजन, पेट दर्द या असुविधा की विशेषताहै। इसके प्रसार पर एक रिपोर्ट से पता चला है कि 85.7% छात्र पीडी2 से पीड़ित हैं। कम खुराक वाले मौखिक गर्भ निरोधक मानक चिकित्सा हैं, लेकिन उनके प्रतिकूल दुष्प्रभाव, जैसे कि गहरी नस घनास्त्रता, ने बढ़ते ध्यान को आकर्षितकिया है। मौखिक गर्भनिरोधक उपयोगकर्ताओं के बीच गहरी नस घनास्त्रता का प्रसार प्रति 1,000 महिलाओं में >1 है, और जोखिम पहले 6-12 महीनों के दौरान और 40वर्ष से अधिक उम्र के उपयोगकर्ताओं में सबसे अधिक है।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) में लंबे समय तक उपयोग किया जाता है, साइपरी राइजोमा (सीआर) साइपरेसी परिवार के साइपरस रोटुंडस एल के सूखे राइजोम से लिया गया है। सीआर मासिक धर्म विकारों को नियंत्रित करता है और अवसाद और दर्द से राहतदेता है। सीआर का व्यापक रूप से स्त्री रोग में उपयोग किया जाता है और महिलाओं की बीमारियों के इलाज के लिए एक सामान्य दवा मानाजाता है। सिरका (सीआरवी) के साथ संसाधित सीआर आमतौर पर चिकित्सकीय रूप से उपयोग किया जाता है। सीआर की तुलना में, सीआरवी मासिक धर्म और दर्द से राहत के बढ़े हुए विनियमन को दर्शाता है। आधुनिक अध्ययनों से पता चला है कि सीआर साइक्लोऑक्सीजिनेज -2 (सीओएक्स -2) और प्रोस्टाग्लैंडिंस (पीजी) के बाद के संश्लेषण को रोकता है, इस प्रकार एक विरोधी भड़काऊ प्रभाव प्राप्त करता है। इस बीच, सीआर साइड इफेक्ट्स7 के बिना एक एनाल्जेसिक प्रभाव प्रदर्शित करता है, जिससे सीआर डिसमेनोरिया रोगियों के लिए एक अच्छा विकल्प बन जाता है। हालांकि, मासिक धर्म के विनियमन और सीआरवी द्वारा दर्द से राहत के प्रावधान में अंतर्निहित तंत्र स्पष्ट नहीं है। सीआर अनुसंधान ने मुख्य रूप से अपने सक्रिय रासायनिक घटकों और फार्माकोलॉजिकल गतिविधियों में परिवर्तन पर ध्यान केंद्रित किया है, जैसे कि इसके विरोधी भड़काऊ, एंटीडिप्रेसेंट और एनाल्जेसिक प्रभाव 8,9,10,11,12।

यद्यपि टीसीएम के तत्व जटिल हैं, वे रक्त में अवशोषित होते हैंऔर प्रभावी होने के लिए एक विशिष्ट रक्त एकाग्रता तक पहुंचना चाहिए। रक्त में घटक निर्धारण की रणनीति का उपयोग करके टीसीएम के सक्रिय अवयवों की जांच के दायरे को सीमित किया जा सकता है। विट्रो में रासायनिक घटकों का अध्ययन करने में अंधापन से बचा जा सकता है, और व्यक्तिगत घटकोंका अध्ययन करने में एकतरफापन से बचा जा सकता है। रक्त में सीआर और सीआरवी की रचनाओं की तुलना करके, संसाधित सीआर के सक्रिय अवयवों में परिवर्तन का प्रभावी ढंग से और जल्दी से पता लगाया जा सकता है। दवा प्रभावकारिता वह प्रक्रिया है जिसके द्वारा एक दवा शरीर को प्रभावित करती है। शरीर की चयापचय प्रतिक्रिया के कारण दवा घटकों में परिवर्तन, जो दवा के क्रिया तंत्र से संबंधित हो सकता है, मेटाबोनोमिक्स के साथ निर्धारित किया जा सकता है। मेटाबोनोमिक्स का उद्देश्य समग्र और गतिशील चयापचय प्रतिक्रियाओं को मापना है, जो पारंपरिक चीनी चिकित्सा15 की समग्र प्रभावकारिता को निर्धारित करने के अनुरूप है। इसके अलावा, मेटाबोलाइट्स जीन अभिव्यक्ति का अंतिम उत्पाद हैं, जो फेनोटाइप16 से सबसे निकटता से संबंधित है। तरल क्रोमैटोग्राफी-उच्च-रिज़ॉल्यूशन टेंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस / एमएस) -आधारित अलक्षित मेटाबोलॉमिक्स को उच्च थ्रूपुट, उच्च संवेदनशीलता और उच्च रिज़ॉल्यूशन की विशेषता है और इसका उपयोग कई अलग-अलग छोटे आणविकघटकों को मापने के लिए किया जा सकता है 17,18 . यह विधि एक साथ रक्त में अवशोषित अंतर्जात मेटाबोलाइट्स और बहिर्जात घटकों को निर्धारित कर सकती है। मेटाबोनॉमिक्स का व्यापक रूप से टीसीएम19, ड्रग टॉक्सिकोलॉजी20, स्वास्थ्य प्रबंधन21, स्पोर्ट्स 22, फूड23 और अन्य क्षेत्रों पर अध्ययन में उपयोग किया गया है।

इस अध्ययन में, रक्त में अवशोषित बहिर्जात घटकों और अंतर्जात मेटाबोलाइट्स में अंतर को सीआरवी के एनाल्जेसिक प्रभावों के तंत्र को प्रकट करने के लिए एलसी-एमएस / एमएस-आधारित अलक्षित मेटाबोलॉमिक्स का उपयोग करके सीआर-उपचारित और सीआरवी-उपचारित डिसमेनोरिया मॉडल चूहों के बीच मापा गया था।

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Protocol

सभी पशु-संबंधित प्रयोगों को टीसीएम के चोंगकिंग संस्थान की प्रयोग आचार समिति से अनुमोदन के साथ आयोजित किया गया था। चौबीस मादा स्प्राग डॉवले चूहों (एसडी) जो 8-10 सप्ताह के थे और जिनका वजन 200 ग्राम ± 20 ग्राम था, इस प्रयोग में इस्तेमाल किया गया था।

1. निष्कर्षण की तैयारी

  1. गणना
    1. सीआर या सीआरवी अर्क को छह स्प्राग-डॉवले चूहों (10 ग्राम / 1 ग्राम / एमएल की सीआर या सीआरवी अर्क एकाग्रता का उपयोग करें (अर्क का 1 एमएल 1 ग्राम जड़ी बूटियों से प्राप्त होता है)।
      नोट: सीआर की खुराक 6-10 ग्राम है। इस अध्ययन में, खुराक के रूप में 10 ग्राम की अधिकतम खुराक का उपयोग किया गया था। चूंकि एक वयस्क व्यक्ति का औसत वजन 60 किलोग्राम है, वयस्क खुराक 0.1667 ग्राम / वजन रूपांतरण एल्गोरिथ्म24 के अनुसार, जैसा कि मनुष्यों और चूहों के बीच खुराक रूपांतरण गुणांक 6.3 है, चूहों के लिए खुराक 1.05 ग्राम / चूहों के लिए दवा की खुराक 10 गुना बढ़ाकर 10.5 ग्राम / किलोग्राम कर दी गई थी। गणना और वास्तविक प्रयोग की सुविधा के लिए खुराक 10 ग्राम / किग्रा के रूप में निर्धारित किया गया था। उदाहरण के लिए, गणना से, यदि कुल 36 ग्राम सीआर या सीआरवी की आवश्यकता होती है, तो चीनी हर्बल दवा को कम से कम दो बार तैयार किया जाना चाहिए। इस प्रकार, सीआर के 200 ग्राम की आवश्यकता थी - सीआर के 100 ग्राम को सीआर के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और सीआर के 100 ग्राम को सीआरवी में संसाधित किया गया था।
    2. समीकरण (1) का उपयोग करके प्रति चूहे लागू किए जाने वाले सीआर या सीआरवी की मात्रा की गणना करें:
      V = 10 g/(kg=day) × 200 g/(1 g/mL) = 2 mL (1)
  2. CRV का प्रसंस्करण
    1. 100 ग्राम सीआर और 20 ग्राम सिरका (>5.5 ग्राम एसिटिक एसिड / 100 एमएल) को अच्छी तरह से मिलाएं और 12 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
      नोट: यह सुनिश्चित करने के लिए कि सीआर के इंटीरियर को 12 घंटे के बाद सिरका से नम किया गया था, सीआर और सिरका को मिलाया गया था, अच्छी तरह से हिलाया गया था, और फिर आंतरिक भाग को नम होने तक फिर से हिलाया गया था।
    2. मिश्रण को लोहे के पैन में 10 मिनट के लिए 110-120 डिग्री सेल्सियस पर भूनें। फिर, मिश्रण को बाहर निकालें, और इसे कमरे के तापमान पर ठंडा होने दें।
      नोट: सीआर को झुलसने से रोकने के लिए, गर्म करते समय लगातार हिलाना आवश्यक है। यदि संसाधित सीआरवी बहुत गीला है, तो इसे 60 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया जा सकता है। जब सीआर की सतह सेपिया होती है, तो हलचल-फ्राइंग को रोका जा सकता है।
  3. कुल
    1. सीआर अर्क
      1. सीआर में 10 बार (सीआर की मात्रा) शुद्ध पानी जोड़ें, और 2 घंटे के लिए भिगोदें। सुनिश्चित करें कि भिगोते समय औषधीय सामग्री तरल स्तर से नीचे हो।
        नोट: निष्कर्षण से पहले सीआर को केवल आधे में काटने की आवश्यकता है। भिगोने का उद्देश्य सक्रिय घटकों को अधिक प्रभावी ढंग से निकालना है। भिगोने की प्रक्रिया आवश्यक है।
      2. पानी और दवा के मिश्रण को उच्च गर्मी पर उबाल लें, और इसे 20 मिनट के लिए कम गर्मी पर उबलने के लिए रखें। फ़िल्टर कपड़े (100 जाल) के साथ फ़िल्टर करें, और छानना एकत्र करें।
        नोट: काढ़ा करते समय, उबलने से पहले एक उच्च गर्मी का उपयोग किया गया था, और उबलने को बनाए रखने के लिए कम गर्मी का उपयोग किया गया था।
      3. चरण 1.3.1.2 को एक बार दोहराएँ, और फिल्ट्रेट को संयोजित करें।
      4. रोटरी बाष्पीकरणकर्ता के साथ अर्क को 1 ग्राम / एमएल पर केंद्रित करें (मूल दवा के आधार पर, एकाग्रता तापमान 60 डिग्री सेल्सियस से नीचे होना चाहिए)।
        नोट: सीआर में सक्रिय घटक अस्थिर हैं, इसलिए एकाग्रता तापमान 60 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं होना चाहिए।
    2. CRV निकाला
      1. सीआर निष्कर्षण विधि के लिए समान चरणों (1.3.1.1-1.3.1.3) का पालन करें।
    3. परीक्षण के लिए सीआर निकाला
      1. पिपेट 500 μL CR अर्क और 500 μL मेथनॉल को 1.5 mL माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में बदल देता है, और मिश्रण करने के लिए 30 सेकंड के लिए भंवर होता है।
        नोट: मेथनॉल और पानी का मिश्रण सक्रिय घटकों को बेहतर ढंग से निकालता है। अर्क को परीक्षण के लिए सीधे फ़िल्टर नहीं किया जाना चाहिए।
      2. सेंट्रीफ्यूज प्रत्येक नमूना 15 मिनट के लिए 1,6502 × ग्राम 4 डिग्री सेल्सियस पर। सुपरनैटेंट को फ़िल्टर करें, और फिर इसे परीक्षण के लिए नमूना शीशी में स्थानांतरित करें।
        नोट: मेथनॉल और अर्क के मिश्रण के उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरने वाले को निस्पंदन के बिना निर्धारण के लिए सीधे नमूना बोतल में स्थानांतरित किया जा सकता है। सेंट्रीफ्यूजेशन प्रक्रिया द्वारा उत्पन्न गर्मी के कारण, क्रायोजेनिक सेंट्रीफ्यूज का उपयोग करना बेहतर होता है।
    4. परीक्षण के लिए CRV निकाला
      1. परीक्षण के लिए सीआरवी अर्क तैयार करने के लिए चरण 1.3.3.1-1.3.3.2 निष्पादित करें।

2. जानवर

  1. गणना
    1. 50 मिलीग्राम एस्ट्राडियोल बेंजोएट लें, और इसे 1 मिलीग्राम / एमएल समाधान तैयार करने के लिए 50 एमएल जैतून के तेल में जोड़ें। 50 मिलीग्राम ऑक्सीटोसिन लें, और इसे 1 मिलीग्राम / एमएल समाधान तैयार करने के लिए सामान्य खारा के 50 एमएल में जोड़ें।
      नोट: एस्ट्राडियोल बेंजोएट और ऑक्सीटोसिन के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन की खुराक 10 मिलीग्राम / एस्ट्राडियोल बेंजोएट जैतून के तेल में घुल जाता है, और ऑक्सीटोसिन सामान्य खारा में घुल जाता है। एस्ट्राडियोल बेंजोएट जैतून के तेल में घुलना आसान नहीं है और विघटन में तेजी लाने के लिए अल्ट्रासाउंड के साथ इलाज किया जा सकता है। एस्ट्राडियोल बेंजोएट और ऑक्सीटोसिन समाधान दोनों को दैनिक रूप से तैयार किया जाना चाहिए।
    2. प्रति चूहे लागू किए जाने वाले एस्ट्राडियोल बेंजोएट समाधान की मात्रा की गणना करें (यानी, वी = 10 मिलीग्राम / [किग्रा दिन] × 200 ग्राम / [1 ग्राम / एमएल] = 2 एमएल)। प्रति चूहे लागू किए जाने वाले ऑक्सीटोसिन घोल की मात्रा की गणना करें (यानी, वी = 10 मिलीग्राम / [किग्रा दिन] × 200 ग्राम / [1 ग्राम / एमएल] = 2 एमएल)।
  2. पशु समूहीकरण और प्रशासन
    नोट: प्रशासन के लिए दस दिन25,26 सौंपे गए थे। उपचार के दौरान, चूहों के पास मानक चाउ और पानी तक अप्रतिबंधित पहुंच थी। ऑक्सीटोसिन प्रशासन के 30 मिनट के भीतर, प्रत्येक चूहे की लेखन गतिविधि को ट्रैक किया गया था। पीडी चूहा मॉडल सफलतापूर्वक विकसित किया गया था, जैसा कि मॉडल चूहों की घुमावदार प्रतिक्रियाओं से स्पष्ट है, जिसमें गर्भाशय संकुचन, एक अंग रोटेशन, हिंद अंग विस्तार, एक खोखला ट्रंक और पेट संकुचन26 शामिल थे।
    1. 24 मादा स्प्राग-डॉवले चूहों (एसडी चूहे, 8-10 सप्ताह की उम्र, 200 ग्राम ± 20 ग्राम) को यादृच्छिक-नियंत्रण, मॉडल, सीआर और सीआरवी पर चार समूहों में असाइन करें और उन्हें 7 दिनों के लिए खिलाएं।
    2. पशु प्रशासन
      1. इंट्रापरिटोनियल रूप से मॉडल, सीआर और सीआरवी समूहों में चूहों को हर दिन 2 एमएल एस्ट्राडियोल बेंजोएट समाधान के साथ इंजेक्ट किया जाता है। इंट्रापरिटोनियल रूप से चूहों को नियंत्रण समूह में 2 एमएल सामान्य खारा के साथ इंजेक्ट किया जाता है।
      2. दिन 8 से, चरण 2.2.2.1 को पूरा करें। फिर, सीआरवी समूह में चूहों को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से 2 एमएल सीआरवी अर्क, सीआर समूह में चूहों को 2 एमएल सीआर अर्क और नियंत्रण और मॉडल समूहों में चूहों को 2 एमएल सामान्य खारा दें।
      3. दिन 10 पर, चरण 2.2.2.2 को पूरा करें। फिर, इंट्रापरिटोनियल रूप से मॉडल, सीआर और सीआरवी समूहों में चूहों को 2 एमएल ऑक्सीटोसिन समाधान के साथ इंजेक्ट करते हैं और नियंत्रण समूह में चूहों को 2 एमएल सामान्य खारा के साथ इंजेक्ट करते हैं।
    3. ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन के 30 मिनट के भीतर चूहों के लेखन समय को रिकॉर्ड करें।
  3. नमूना संग्रह
    1. पेट की महाधमनी रक्त के नमूने एकत्र करें, गर्भाशय को तेजी से और पूरी तरह से उत्पादित करें, और गर्भाशय की दीवार का पालन करने वाले संयोजी ऊतक और वसा को सावधानीपूर्वक अलग करें।
      नोट: अंतिम खुराक के बाद 1 घंटे के भीतर रक्त एकत्र किया गया था।
    2. गर्भाशय के ऊतकों को तरल नाइट्रोजन में संरक्षित और स्थानांतरित करने के लिए माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूबों का उपयोग करें। ऊतक के नमूने -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    3. 4,125 × ग्राम पर 10 मिनट के लिए रक्त के नमूनों को सेंट्रीफ्यूज करें। सीरम युक्त सुपरनैटेंट को हटा दें, और 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 16,502 × ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें। सीरम को सेंट्रीफ्यूज करें, और फिर इसे भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर ट्यूब में रखें।
      नोट: रक्त के नमूनों को पुन: प्रसंस्करण के लिए 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाना चाहिए।
  4. नमूना प्रसंस्करण
    1. सीरम के नमूने
      1. एक माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 400 μL मेथनॉल और 200 μL सीरम डालें, और मिश्रण करने के लिए 30 सेकंड के लिए भंवर डालें। प्रत्येक नमूने को 15 मिनट के लिए 16,502 × ग्राम पर 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज करें। संग्रह और निस्पंदन के बाद सुपरनैटेंट के साथ नमूना बोतलों को भरें। परीक्षण के लिए गुणवत्ता नियंत्रण नमूने तैयार करने के लिए प्रत्येक नमूने से सभी सुपरनैटेंट को एक ही मात्रा के साथ मिलाएं।
    2. गर्भाशय ऊतक के नमूने
      1. निचले खंड से 100 मिलीग्राम गर्भाशय के ऊतक लें और इसे सामान्य खारा की नौ गुना मात्रा के साथ पीस लें। होमोजेनेट को 4,125 × ग्राम पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और सुपरनैटेंट एकत्र करें। सुपरनैटेंट को परीक्षण के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर रेफ्रिजरेटर में रखें या -80 डिग्री सेल्सियस पर यदि उसी दिन परीक्षण नहीं किया जाना है।
      2. 2 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में सामान्य खारा, ऊतक और स्टील की गेंदों को रखें, माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब को 3-5 सेकंड के लिए तरल नाइट्रोजन में डालें, और फिर ऊतक को पीसने के लिए ऊतक ग्राइंडर में डालें।
  5. नमूना परीक्षण
    1. चूहे के नमूनों के गर्भाशय के ऊतकों में पीजीएफ2 और पीजीई 2 सामग्री को मापने के लिए एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) का उपयोग करें।
      नोट: चूहे पीजीई2 एलिसा किट का उपयोग पीजीई2 सामग्री को मापने के लिए किया गया था, और चूहे पीजीएफ2 × एलिसा किट का उपयोग पीजीएफ2 डिग्री स्तर को मापने के लिए किया गया था। विस्तृत चरण निर्माता के निर्देशों में पाया जा सकता है। किट का विवरण सामग्री तालिका में दिया गया है।
    2. यूपीएलसी-एमएस /एमएस का उपयोग करके सीरम नमूना, सीआर अर्क और सीआरवी अर्क का आकलन करें।
      1. यूपीएलसी के लिए, सी 18 कॉलम (2.6 μm, 2.1 मिमी x 100 मिमी) और मोबाइल चरण ए के साथ एक द्विआधारी ढाल विधि का उपयोग करें जिसमें 0.1% फॉर्मिक एसिड और मोबाइल चरण बी एसिटोनिट्राइल युक्त हो। क्षालन प्रवणता को निम्नानुसार सेट करें: 0 मिनट से 1 मिनट तक, 15% बी; 1 मिनट से 8.5 मिनट तक, 15% से 85% बी; 8.5 मिनट से 11.5 मिनट तक, 85% बी; 11.5 मिनट से 11.6 मिनट तक, 99% से 1% बी; और 11.6 मिनट से 15 मिनट तक, 15% बी प्रवाह दर को 0.35 एमएल / मिनट और इंजेक्शन की मात्रा को 2 μL पर सेट करें।
      2. एमएस के लिए, तापमान को 600 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें, पर्दे गैस (सीयूआर) प्रवाह दर को 0.17 एमपीए पर सेट करें, और शीथ और सहायक गैस प्रवाह दर दोनों को 0.38 एमपीए पर सेट करें। सकारात्मक आयन मोड और नकारात्मक आयन मोड के आयन स्प्रे वोल्टेज को क्रमशः 5.5 केवी और -4.5 केवी पर सेट करें, डिक्लस्टरिंग पोटेंशियल (डीपी) वोल्टेज को 80 वी या -80 वी, टकराव ऊर्जा (सीई) को 40 ईवी या -25 ईवी तक, और टक्कर ऊर्जा सुपरपोजिशन (सीईएस) को 35 ईवी ± 15 ईवी तक सेट करें।
      3. यूपीएलसी-एमएस /एमएस का उपयोग करके निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए परीक्षण करें। 50-1,000 मीटर / जेड की द्रव्यमान सीमा के लिए एमएस निष्पादित करें।
      4. डिटेक्शन मोड के सूचना-निर्भर अधिग्रहण, एकाधिक द्रव्यमान दोष फ़िल्टर और गतिशील पृष्ठभूमि कटौती के संयोजन के साथ मिलान वर्कस्टेशन प्रोग्राम का उपयोग करके यूपीएलसी-एमएस / एमएस परिणाम प्राप्त करें। पारंपरिक दृष्टिकोण को सत्यापित करने के लिए यूपीएलसी-एमएस / एमएस उपकरण की पुनरावृत्ति और स्थिरता का परीक्षण करने के लिए पूल किए गए सीरम के गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों का उपयोग करें। अनुसंधान नमूनों से पहले, गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों को लगातार चार रन के लिए इंजेक्ट करें, और फिर उन्हें हर पांच सीरम नमूनों के बाद इंजेक्ट करें।

3. डेटा प्रोसेसिंग

  1. डेटा तैयार करना
    1. कच्चे डेटा को mzXML स्वरूप में कनवर्ट करने के लिए रूपांतरण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें. प्रत्येक नमूने के कुल आयन धारा (टीआईसी) डेटा को सामान्य करें।
      नोट: एक्ससीएमएस पर निर्मित एक आंतरिक आर-आधारित एप्लिकेशन (www.lims2.com) का उपयोग एकीकरण, संरेखण, निष्कर्षण और पीक डिटेक्शन27 के लिए जानकारी का विश्लेषण करने के लिए किया गया था।
    2. एक मालिकाना एमएस2 डेटाबेस (www.lims2.com) का उपयोग करके मेटाबोलाइट एनोटेशन करें। एनोटेशन सीमा को 0.328 पर सेट करें।
      नोट: प्रत्येक समूह में अंतर्जात मेटाबोलाइट्स की पहचान की गई थी।
  2. प्रमुख घटक विश्लेषण और ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग भेदभाव विश्लेषण
    1. प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) और मॉडलिंग करने के लिए विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें। विश्लेषण सॉफ्टवेयर में मेटाबोलाइट्स के मानकीकृत डेटा आयात करें। फिर, विश्लेषण मॉडल बनाने के लिए ऑटोफिट का उपयोग करें। अंत में, पीसीए के स्कोर स्कैटर प्लॉट को प्राप्त करने के लिए स्कोर का उपयोग करें।
      नोट: प्रत्येक समूह का क्लस्टरिंग पीसीए के स्कोर स्कैटर प्लॉट के साथ प्राप्त किया गया था। पीसीए एक असुरक्षित विश्लेषण मोड है जो मुख्य रूप से हस्तक्षेप के बिना आयाम में कमी के माध्यम से नमूने को समूहीकृत करता है।
    2. ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग भेदभाव विश्लेषण (OPLS-DA) करने के लिए विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें।
      1. विश्लेषण सॉफ्टवेयर में सीआर और सीआरवी समूहों में मेटाबोलाइट्स पर मानकीकृत डेटा आयात करें।
      2. CR समूह से डेटा को बनाए गए CR समूह में आयात करें, और CRV समूह से डेटा को बनाए गए CRV समूह में आयात करें.
        नोट: OPLS-DA एक पर्यवेक्षित विश्लेषण मोड है, और नमूने का समूहीकरण आवश्यक है।
      3. फिर, विश्लेषण मॉडल बनाने के लिए ऑटोफिट का उपयोग करें, और ओपीएलएस-डीए के स्कोर स्कैटर प्लॉट प्राप्त करने के लिए स्कोर का उपयोग करें। अंत में, ओपीएलएस-डीए में प्रक्षेपण (वीआईपी) मूल्य में चर महत्व प्राप्त करने के लिए वीआईपी का उपयोग करें।
        नोट: सीआर और सीआरवी समूहों में मेटाबोलाइट्स के प्रक्षेपण (वीआईपी) मूल्यों में परिवर्तनीय महत्व ओपीएलएस-डीए के माध्यम से प्राप्त किया गया था।
  3. संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स की पहचान
    1. चरण 3.2.2.3 में 1 से अधिक वीआईपी मानों के साथ मेटाबोलाइट्स को स्क्रीन करें।
    2. मेटाबोलाइट्स के पी मान की गणना करने के लिए सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें जो छात्र के टी-टेस्ट द्वारा चरण 3.3.1 में स्क्रीन किए गए थे।
      नोट: सीआर और सीआरवी समूहों में संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स में महत्वपूर्ण अंतर एक छात्र के टी-टेस्ट द्वारा निर्धारित किए गए थे। संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स वे थे जिनके पास छात्र का टी-टेस्ट पी-वैल्यू 0.05 < और 1 से अधिक प्रक्षेपण (वीआईपी) में एक परिवर्तनीय महत्व था। प्रतिनिधित्व एक ज्वालामुखीय भूखंड का उपयोग करके पूरा किया गया था।
  4. अंतर मेटाबोलाइट्स की पहचान
    1. चरण 3.3 में संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स को स्क्रीन करें। इन विभेदक मेटाबोलाइट्स की पहचान करने के लिए चरण 3.1.2 के परिणामों का उपयोग करें।
      नोट: संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स की एक छोटी संख्या की पहचान की गई थी, और वे उम्मीदवार अंतर मेटाबोलाइट्स बन गए।
    2. केईजीजी डेटाबेस में मिलान किए जाने वाले अंतर मेटाबोलाइट्स को स्क्रीन करें। हीटमैप खींचकर सीआर और सीआरवी समूहों में अंतर मेटाबोलाइट्स में परिवर्तन दिखाएं।
      नोट: उम्मीदवार अंतर मेटाबोलाइट्स की एक छोटी संख्या का मिलान किया गया था, और वे अंतर मेटाबोलाइट्स बन गए।
  5. संभावित चयापचय मार्गों की जांच
    1. मेटाबोएनालिस्ट (www.metaboanalyst.ca) डेटाबेस में विभिन्न मेटाबोलाइट्स अपलोड करें।
    2. संभावित चयापचय मार्गों को प्राप्त करने के लिए पाथवे विश्लेषण का उपयोग करें।
      नोट: सीआर और सीआरवी समूहों में संभावित चयापचय मार्ग प्राप्त किए गए थे। पी मान और प्रभाव मूल्य महत्वपूर्ण मार्गों के चयन में दो बहुत महत्वपूर्ण संकेतक थे। पी मान प्रभाव मूल्य से अधिक महत्वपूर्ण था। महत्व को 0.05 < पी मान द्वारा परिभाषित किया गया था; बड़े प्रभाव मूल्य बेहतर सहसंबंधों से जुड़े थे।
    3. केईजीजी (http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html) डेटाबेस में विभिन्न मेटाबोलाइट्स अपलोड करके संभावित चयापचय मार्गों का विश्लेषण करें।
      नोट: चयापचय मार्ग और पीडी के कार्य के बीच संबंध पर भी विचार किया जाना चाहिए। महत्वपूर्ण चयापचय मार्ग प्राप्त किए गए थे।
  6. रक्त में अवशोषित घटकों की पहचान
    1. इन-हाउस एमएस2 डेटाबेस (www.lims2.com), ह्यूमन मेटाबोलोम डेटाबेस (एचएमडीबी), और मासबैंक और केम्सपिडर डेटाबेस का उपयोग करके सीआर और सीआरवी अर्क में रासायनिक घटकों की पहचान करें।
    2. सीआर और सीआरवी समूहों में रक्त में अवशोषित घटकों का निर्धारण करें, और सीआर और सीआरवी समूहों के बीच घटकों की तुलना करें।
      नोट: रक्त में अवशोषित घटकों को सीआर या सीआरवी समूहों में पता लगाया जाना चाहिए लेकिन नियंत्रण समूह में इसका पता नहीं लगाया जा सकता है।
  7. सांख्यिकीय विश्लेषण
    1. अनौपचारिक विश्लेषण (यूवीए) और बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विधियों का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें, जिसमें विचरण (एनोवा) और छात्र के टी-टेस्ट का विश्लेषण शामिल है।
      नोट: प्रयोगात्मक जानकारी मानक विचलन (±एसडी) के औसत ± रूप में सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग करके प्रस्तुत की गई थी। पी < 0.01 को एक अत्यधिक महत्वपूर्ण अंतर माना जाता था, और पी < 0.05 ने एक महत्वपूर्ण अंतर28 का प्रतिनिधित्व किया।

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Representative Results

डिसमेनोरिया मॉडल प्रयोग का विश्लेषण
नियंत्रण समूह में 30 मिनट के भीतर कोई रिटिंग प्रतिक्रिया नहीं थी क्योंकि इन चूहों को दर्द पैदा करने के लिए ऑक्सीटोसिन और एस्ट्राडियोल बेंजोएट के साथ इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन नहीं दिया गया था। मॉडल, सीआर और सीआरवी समूहों में चूहों ने ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन के बाद पर्याप्त रिटिंग प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन किया। ये परिणाम डिसमेनोरिया को प्रेरित करने के लिए एस्ट्राडियोल बेंजोएट और ऑक्सीटोसिन संयोजन की प्रभावकारिता को प्रदर्शित करते हैं। मॉडल और नियंत्रण समूहों के बीच पीजीएफ2, पीजीई2, और पीजीएफ2 / पीजीई2 स्तरों में अंतर महत्वपूर्ण थे (पी < 0.001, पी < 0.05), मॉडल की प्रभावकारिता का प्रदर्शन करते हुए (चित्रा 1)।

Figure 1
चित्रा 1: पीजीएफ2गर्भाशय के ऊतकों में α और पीजीई2 सामग्री और प्रत्येक समूह में लेखन संख्या। (ए) पीजीएफ2 प्रत्येक समूह में गर्भाशय के ऊतकों में सामग्री α। (बी) प्रत्येक समूह में गर्भाशय ऊतक में पीजीई2 सामग्री। (सी) पीजीएफ2प्रत्येक समूह में गर्भाशय केऊतकों में α / पीजीई 2 सामग्री। (D) प्रत्येक समूह में लेखन संख्या। कॉलम चार समूहों (प्रति समूह छह चूहों) से एसईएम ± माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। * P < 0.05 या ** P < 0.01 मॉडल समूह की तुलना में एक महत्वपूर्ण अंतर का प्रतिनिधित्व करते हैं, और त्रिभुजP < 0.05 या त्रिभुजP < 0.01 CR समूह की तुलना में एक महत्वपूर्ण अंतर का प्रतिनिधित्व करते हैं। मॉडल, सीआर और सीआरवी समूहों में चूहों ने ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन के बाद पर्याप्त रिटिंग प्रतिक्रिया प्रदर्शित की। संक्षिप्तीकरण: पीजी = प्रोस्टाग्लैंडीन; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

सीआरवी और सीआर समूहों में पीजीएफ2 और पीजीएफ2 / पीजीई2 की सांद्रता कम हो गई थी, और यह कमी सीआरवी समूह में अधिक चिह्नित थी। सीआरवी और सीआर समूहोंके बीच पीजीएफ 2 और पीजीएफ 2 + / पीजीई 2 की सांद्रता में महत्वपूर्ण (पी < 0.001 और पी< 0.05) अंतर भी थे। मॉडल समूह की तुलना में, पीजीई2 एकाग्रता सीआरवी और सीआर समूहों (पी < 0.001) में काफी अधिक थी, सीआरवी समूह में स्तर सबसे अधिक बढ़ रहा था।

गुणवत्ता नियंत्रण
गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों में बीपीसी क्रोमैटोग्राफिक चोटियों और सिग्नल तीव्रता के अवधारण समय के बीच एक अच्छा पत्राचार देखा गया, जो उपकरण स्थिरता के उच्च स्तर और उल्लेखनीय रूप से सुसंगत डेटा गुणवत्ता (पूरक फ़ाइल 1-पूरक चित्रा 1 और पूरक चित्रा 2) का प्रदर्शन करता है। इसके अलावा, सभी गुणवत्ता नियंत्रण नमूने ±2 मानक विचलन (चित्रा 2 ए, बी) के भीतर थे, और गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों के बीच सहसंबंध 0.7 (चित्रा 2 सी, डी) से अधिक था। इन परिणामों से पता चलता है कि प्रक्रिया विश्वसनीय थी और परिणाम विश्वसनीय थे।

Figure 2
चित्रा 2: गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों का पीसीए-एक्स एक आयामी वितरण। (ए) सकारात्मक मोड, (बी) नकारात्मक मोड; (सी) सकारात्मक मोड और (डी) नकारात्मक मोड में गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों का सहसंबंध विश्लेषण। सभी गुणवत्ता नियंत्रण नमूने ±2 मानक विचलन के भीतर थे, और गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों के बीच सहसंबंध 0.7 से अधिक थे। इन परिणामों ने सुझाव दिया कि प्रक्रिया विश्वसनीय थी और जानकारी विश्वसनीय थी। संक्षेप: पीसी = प्रमुख घटक; पीसीए = प्रमुख घटक विश्लेषण; गुणवत्ता नियंत्रण; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

प्रमुख घटक विश्लेषण
जैसा कि चित्रा 3 में दिखाया गया है, एब्सिसा पीसी (1) ने पहले प्रमुख घटकों के स्कोर का संकेत दिया, जबकि समन्वय पीसी (2) ने दूसरे प्रमुख घटकों के स्कोर का संकेत दिया। चित्र में, हरा वृत्त नियंत्रण समूह को इंगित करता है, लाल वृत्त मॉडल समूह का प्रतिनिधित्व करता है, नीला वृत्त सीआर समूह को इंगित करता है, सफेद वृत्त सीआरवी समूह को दर्शाता है, और गुलाबी वृत्त गुणवत्ता नियंत्रण समूह को इंगित करता है।

Figure 3
चित्रा 3: पीसीए का स्कोर स्कैटर प्लॉट। (ए) सकारात्मक मोड और (बी) नकारात्मक मोड। गुणवत्ता नियंत्रण नमूने ओवरलैप होते हैं, जो इंगित करता है कि उपकरण बहुत स्थिर था। प्रत्येक समूह को अपने क्षेत्र में वितरित किया जाता है, जिसमें केवल सीआर समूह और सीआरवी समूह कभी-कभी पथ पार करते हैं। संक्षेप: पीसी = प्रमुख घटक; पीसीए = प्रमुख घटक विश्लेषण; क्यूसी = गुणवत्ता नियंत्रण; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पीसीए विश्लेषण परिणामों से पता चला है कि सीआर और मॉडल समूहों के समूहों को सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड दोनों में काफी अलग किया गया था। क्लस्टर को सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में सीआरवी और मॉडल समूहों के बीच काफी अलग किया गया था। गुणवत्ता नियंत्रण, मॉडल और नियंत्रण समूहों को अन्य उपचार समूहों (सीआर, सीआरवी) से अलग किया गया था। सीआर और सीआरवी समूह कभी-कभी सकारात्मक आयन मोड में ओवरलैप होते हैं। नकारात्मक आयन मोड में, प्रत्येक समूह को काफी अलग किया गया था।

ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग विधि भेदभाव विश्लेषण
ओपीएलएस-डीए का उपयोग चयापचय मतभेदों की जांच के लिए किया गया था। ओपीएलएस-डीए स्कैटर प्लॉट से पता चला कि सभी नमूने 95% आत्मविश्वास अंतराल (होटलिंग के टी-स्क्वायर दीर्घवृत्त) के भीतर थे। चित्रा 4 ए, सी दर्शाता है कि सीआर और सीआरवी समूह अलग हो गए थे। मॉडल ओवरफिटिंग का परीक्षण क्रमपरिवर्तन परीक्षण (एन = 200) का उपयोग करके किया गया था, और मॉडल के सांख्यिकीय महत्व का आकलन किया गया था। चित्रा 4 बी, डी में, निर्देशांक आर 2 वाईया क्यू 2मान के मूल्य को दर्शाता है, और एब्सिसा प्रतिस्थापन प्रतिधारण को इंगित करता है। आर2वाई को हरे बिंदु द्वारा दर्शाया गया है, क्यू2 को नीले वर्ग बिंदु द्वारा दर्शाया गया है, और दो डैश ्ड लाइनें उनकी संबंधित प्रतिगमन रेखाओं का प्रतिनिधित्व करती हैं। सकारात्मक और नकारात्मक मोड में, आर2वाई मान क्रमशः 0.8 और 0.84 थे, और क्यू2 मान क्रमशः -0.59 और -0.57 थे। यह मॉडल की उच्च विश्वसनीयता और ओवरफिटिंग की अनुपस्थिति को दर्शाता है।

Figure 4
चित्रा 4: सीआर समूह बनाम सीआरवी समूह के लिए ओपीएलएस-डीए मॉडल। स्कोर स्कैटर प्लॉट (ए) सकारात्मक मोड और (सी) नकारात्मक मोड में। सीआर समूह बनाम सीआरवी समूह के लिए ओपीएलएस-डीए मॉडल का क्रमपरिवर्तन परीक्षण (बी) सकारात्मक मोड और (डी) नकारात्मक मोड में। R2Y क्रमशः सकारात्मक और नकारात्मक मोड में 0.8 और 0.84 था, और Q2 क्रमशः -0.59 और -0.57 था। यह मॉडल की उच्च विश्वसनीयता और ओवरफिटिंग व्यवहार की अनुपस्थिति को दर्शाता है। संक्षेप: ओपीएलएस-डीए = ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग भेदभाव विश्लेषण; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

अनौपचारिक सांख्यिकीय विश्लेषण
चयापचय विविधताओं की पहचान करने के लिए अनौपचारिक सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए थे। वीआईपी > 1 और पी < 0.05, 339 और 394 संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स की मानक स्क्रीनिंग के तहत क्रमशः सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में पाए गए थे। एक ज्वालामुखी प्लॉट चित्रा 5 में दिखाया गया है, जिसमें प्रत्येक बिंदु एक अलग मेटाबोलाइट से मेल खाता है। निर्देशांक छात्र के टी-टेस्ट के पी मान को दर्शाता है, और एब्सिसा समूह में प्रत्येक अणु के स्तर में कई परिवर्तनों को दर्शाता है। स्कैटर आकार ओपीएलएस-डीए मॉडल के वीआईपी मूल्य का प्रतिनिधित्व करता है; स्कैटर के आकार के साथ वीआईपी मूल्य बढ़ जाता है। लाल बिंदु वृद्धि का संकेत देते हैं, नीले बिंदु कमी का संकेत देते हैं, और ग्रे कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दर्शाता है।

द्वितीयक मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग करके उम्मीदवार अंतर मेटाबोलाइट्स का गुणात्मक विश्लेषण किया गया था। सकारात्मक मोड (पूरक फ़ाइल 1-पूरक तालिका 1) में 63 मेटाबोलाइट्स और नकारात्मक मोड में 30 मेटाबोलाइट्स (पूरक फ़ाइल 1-पूरक तालिका 2) में महत्वपूर्ण परिवर्तन देखे गए। विभेदक मेटाबोलाइट्स को केईजीजी और एचडीएमबी डेटाबेस का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। सटीक रूप से मिलान किए गए यौगिकों को अंतर मेटाबोलाइट्स के रूप में पहचाना गया था, और इन्हें तालिका 3 और तालिका 4 में सूचीबद्ध किया गया है।

Figure 5
चित्र 5: सीआर समूह बनाम सीआरवी समूह के लिए ज्वालामुखी प्लॉट। (ए) सकारात्मक मोड और (बी) नकारात्मक मोड। प्रतिनिधित्व किए गए ज्वालामुखी ग्राफ में, प्रत्येक बिंदु एक अलग मेटाबोलाइट से मेल खाता है। निर्देशांक छात्र के टी-टेस्ट के पी मान को दर्शाता है, और एब्सिसा समूह में प्रत्येक पदार्थ में कई परिवर्तनों को दर्शाता है। स्कैटर आकार OPLS-DA मॉडल के वीआईपी मान का प्रतिनिधित्व करता है। स्कैटर के आकार के साथ वीआईपी मूल्य बढ़ जाता है। लाल बिंदु वृद्धि का संकेत देते हैं, नीले बिंदु कमी का संकेत देते हैं, और ग्रे कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दर्शाता है। संक्षेप: ओपीएलएस-डीए = ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग भेदभाव विश्लेषण; वीआईपी = प्रक्षेपण में परिवर्तनीय महत्व; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

मेटाबोलाइट तुलना
सीआर और सीआरवी समूहों के बीच अंतर मेटाबोलाइट्स के मात्रात्मक मूल्यों के यूक्लिडियन दूरी मैट्रिक्स की गणना की गई थी, और अंतर मेटाबोलाइट्स को एक व्यापक सहसंबंध दृष्टिकोण का उपयोग करके क्लस्टर किया गया था।

एब्सिसा विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों का प्रतिनिधित्व करता है, जबकि निर्देशांक चित्रा 6 में सापेक्ष स्तर का प्रतिनिधित्व करता है। रंग पैच का प्लेसमेंट इंगित करता है कि प्रत्येक मेटाबोलाइट को दूसरों के सापेक्ष कैसे व्यक्त किया जाता है। सीआर समूह की तुलना में सकारात्मक आयन मोड में, सीआरवी समूह में चार अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में वृद्धि हुई, जबकि 11 अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में कमी आई। सीआर समूह की तुलना में नकारात्मक आयन मोड में, सीआरवी समूह में चार अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में वृद्धि हुई, और 7 अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में कमी आई।

Figure 6
चित्रा 6: सीआरवी समूह बनाम सीआर समूह के लिए हीटमैप विश्लेषण। (ए) सकारात्मक मोड और (बी) नकारात्मक मोड। एब्सिसा विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों का प्रतिनिधित्व करता है, और निर्देशांक सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तरों का प्रतिनिधित्व करता है। रंग पैच का प्लेसमेंट इंगित करता है कि प्रत्येक मेटाबोलाइट को दूसरों के सापेक्ष कैसे व्यक्त किया जाता है। संक्षेप: सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

सीआर समूह की तुलना में, सीआरवी समूह में वृद्धि करने वाले मेटाबोलाइट्स स्फिंगोसिन 1-फॉस्फेट, नोबिलेटिन, ग्लाइसेरोफॉस्फोकोलिन, लाइसोपीसी (18: 1 (9 जेड)), 2-हाइड्रॉक्सी-6-पेंटाडेसिलबेंजोइक एसिड, 9,10-एपॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, 13 एस-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिएस्ट्रोन, जबकि जो कम हुए वे थे स्फिंगोसिन 1-फॉस्फेट, नोबिलेटिन, ग्लिकोकोसिलेटिन, डाइब्यूटाइल फेथलेट, रेटिनोलिक एसिड, 2-हाइड्रॉक्सीओक्टैडिक एसिड, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडीनोइक एसिड, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडिनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिस्ट्रोन, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टेनोइक एसिड, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टैडिएनोइक एसिड, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टैडिएनोइक एसिड, 2-हाइड्रॉक्सीओक्टैडिएनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिएस्ट्रोन, जो कम हो गए थे, वे थे स्फिंगोसिन 1-फॉस्फेट, नोबिलेटिन, ग्लिसरोफॉस्फोकोलाइन, लाइसोपीसी (18: 1 (9 जेड)), 2-हाइड्रोक्सी-6-पेंटाडेसिलबेंजोइक एसिड, 9,10-एपॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, 13 एस-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिएस्ट्रोन, जबकि जो कम हुए वे थे स्फिंगोसिन 1-फॉस्फेट, नोबिलेटिन, ग्लिसरोफॉस्फोकोलाइन, लाइसोपीसी (18: 1 (9 जेड)), 2-हाइड्रॉक्सी-6-पेंटाडेसिलबेंजोइक एसिड, 9,10-एपॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, 13 एस-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडाइनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सीएस्ट्रोन, 21-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडीनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिएस्ट्रोन, 2-हाइड्रॉक्सीओक्टेनोइक एसिड, 2-हाइड्रॉक्सीओक्टाडेसिडिनोइक एसिड, और 2-मेथॉक्सीएक्सिएस्ट्रोन, 2-हाइड्र स्टीयरिक एसिड, डोकोसाहेक्साएनोइक एसिड, फेनिलटाइलग्लाइसिन, एल-फेनिलएलनिन, एस्ट्रोन ग्लूकोरोनाइड और साइट्रिक एसिड (चित्रा 7)।

Figure 7
चित्रा 7: सीआरवी और सीआर समूहों में संभावित मेटाबोलाइट्स के सापेक्ष स्तर के रुझान। (ए) सकारात्मक मोड और (बी) नकारात्मक मोड। सकारात्मक मोड में, सीआर समूह की तुलना में, सीआरवी समूह में चार अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में वृद्धि हुई, और 11 के स्तर में कमी आई। नकारात्मक मोड में, सीआरवी समूह में चार अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में वृद्धि हुई, और सात अंतर मेटाबोलाइट्स के स्तर में कमी आई। कॉलम चार समूहों (प्रति समूह छह चूहों) से एसईएम ± माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। * पी < 0.05, ** पी < 0.01, या *** पी < 0.01 सीआरवी और सीआर समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का प्रतिनिधित्व करते हैं। संक्षेप: सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

केईजीजी मार्ग विश्लेषण
विभेदक मेटाबोलाइट्स को एनोटेट किया गया था, और केईजीजी मार्गों का विश्लेषण किया गया था। परिणामों से पता चला कि अंतर मेटाबोलाइट्स क्रमशः सकारात्मक और नकारात्मक मोड में नौ मार्गों से जुड़े थे (तालिका 1 और तालिका 2)। चित्रा 8 में, चयापचय मार्गों को बबल चार्ट में एक बुलबुले द्वारा दर्शाया जाता है, जिसमें अधिक महत्वपूर्ण पैमाने पर अधिक प्रभाव कारक का संकेत मिलता है। टोपोलॉजी विश्लेषण में कारकों को प्रभावित करने वाले पथ का आकार बबल चार्ट के एब्सिसा और बबल आकार द्वारा दर्शाया जाता है। बुलबुला चार्ट और बुलबुला रंग का समन्वय संवर्धन विश्लेषण के पी मान को इंगित करता है (नकारात्मक प्राकृतिक लघुगणक, यानी, −ln (p))। संवर्धन की डिग्री अधिक महत्वपूर्ण है, पी मान छोटा है, समन्वय मूल्य अधिक प्रमुख है, और रंग गहरा है। पी मान और प्रभाव मूल्य महत्वपूर्ण मार्गों के चयन में दो बहुत महत्वपूर्ण संकेतक हैं। आम तौर पर, पी मान प्रभाव मूल्य से अधिक महत्वपूर्ण है।

Figure 8
चित्रा 8: सीआरवी समूह बनाम सीआर समूह के लिए पाथवे विश्लेषण। (ए) सकारात्मक मोड और (बी) नकारात्मक मोड। चयापचय मार्गों को बुलबुला चार्ट में एक बुलबुले द्वारा दर्शाया जाता है। बुलबुला चार्ट का एब्सिसा और बुलबुला आकार टोपोलॉजी विश्लेषण में पथ-प्रभावित कारकों के आकार को इंगित करता है। बुलबुला चार्ट का निर्देशांक और बुलबुला रंग संवर्धन विश्लेषण के पी मान को इंगित करता है। प्रमुख चयापचय मार्गों में असंतृप्त फैटी एसिड और लिनोलिक एसिड चयापचय का जैवसंश्लेषण शामिल है। संक्षेप: सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 3 और तालिका 4 महत्वपूर्ण अंतर-फेनिलएलनिन चयापचय और लिनोलिक एसिड चयापचय के साथ-साथ असंतृप्त फैटी एसिड, फेनिलएलनिन, टायरोसिन और ट्रिप्टोफैन के जैवसंश्लेषण के साथ चयापचय मार्ग दिखाते हैं। यद्यपि चयापचय मार्गों में स्टेरॉयड हार्मोन बायोसिंथेसिस, स्फिंगोलिपिड और एराकिडोनिक एसिड चयापचय शामिल थे, लेकिन कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे, जो डिसमेनोरिया से संबंधित थे। परिणामों से पता चला है कि लिनोलिक एसिड चयापचय और असंतृप्त फैटी एसिड का जैवसंश्लेषण सीआरवी की बढ़ी हुई प्रभावकारिता से जुड़े महत्वपूर्ण चयापचय मार्ग थे।

रक्त में अवशोषित घटक
सीआरवी और सीआरवी समूहों में चूहे के सीरम में सीआरवी और सीआर अर्क से चयापचय के पंद्रह घटक और दो उत्पादों का पता लगाया गया था (तालिका 5)। सभी 17 घटक सकारात्मक आयन मोड में पाए गए।

छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग करके दो समूहों के रक्त के नमूनों में सापेक्ष घटक स्तर की तुलना की गई थी। चित्रा 9 में एब्सिसा विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों को प्रदर्शित करता है; निर्देशांक द्रव्यमान स्पेक्ट्रम के प्रतिक्रिया मूल्य का प्रतिनिधित्व करता है। महत्वपूर्ण अंतर के साथ दो घटक थे। विश्लेषण से पता चला है कि सीआर समूह की तुलना में सीआरवी समूह में इन दो घटकों का स्तर ऊंचा था, जबकि 15 तत्वों के स्तर में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं दिखा।

Figure 9
चित्रा 9: सीआरवी समूह बनाम सीआर समूह के लिए रक्त में अवशोषित घटक। सीआर और सीआरवी समूहों में चूहे के सीरम में सीआरवी और सीआर अर्क से चयापचय के 15 घटक और दो उत्पाद थे। विश्लेषण से पता चला है कि सीआर समूह की तुलना में सीआरवी समूह में दो घटकों के रक्त स्तर में वृद्धि हुई थी, जबकि 15 घटकों के रक्त स्तर में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं दिखा। उनमें से, सीआरवी समूह में (-)-मर्टेनॉल और [(1आर, 2एस, 3आर, 4आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामेथिलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड का स्तर सीआर समूह की तुलना में काफी अधिक था। * पी < 0.05 या ** पी < 0.01 सीआरवी समूह और सीआर समूह के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का प्रतिनिधित्व करते हैं। संक्षेप: सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 1: सकारात्मक मोड में चयापचय अंतर। संक्षिप्तरूप: केईजीजी = जीन और जीनोम का क्योटो विश्वकोश; वीआईपी = प्रक्षेपण में परिवर्तनीय महत्व; आरटी = प्रतिधारण समय। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 2: नकारात्मक मोड में मेटाबोलिक अंतर। संक्षिप्तरूप: केईजीजी = जीन और जीनोम का क्योटो विश्वकोश; वीआईपी = प्रक्षेपण में परिवर्तनीय महत्व; आरटी = प्रतिधारण समय। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 3: सकारात्मक मोड में मेटाबोलिक मार्ग विश्लेषण। संक्षिप्त नाम: केईजीजी = जीन और जीनोम का क्योटो विश्वकोश। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 4 नकारात्मक मोड में मेटाबोलिक मार्ग विश्लेषण। संक्षिप्त नाम: केईजीजी = जीन और जीनोम का क्योटो विश्वकोश। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 5: चूहे के सीरम में प्रोटोटाइप सामग्री और मेटाबोलाइट्स की पहचान। नोट: एम 1 और एम 2 मेटाबोलाइट्स हैं; अन्य घटक प्रोटोटाइप सामग्री हैं। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 1: नग्न चूहों के रक्त में अवशोषित घटकों के बीपीसी आरेख और एमएस2 क्रोमैटोग्राम। सकारात्मक और नकारात्मक मोड में सभी गुणवत्ता नियंत्रण नमूनों के बीपीसी आरेख; चूहों के रक्त में अवशोषित 17 घटकों का एमएस2 क्रोमैटोग्राम: डी-कैम्पेन, (-)-मर्टेनॉल, एथिलपैराबेन, कैलामेनिन, α-साइपरोन, (+)-नूटकाटोन, (1आर, 2एस, 3 आर, 4 आर) -3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामिथाइलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-यल]एसिटिक एसिड, 4-(2-(2.2.1)-बाइकसाइक्लोहेप्टिलमेथिल) बेंजोइक एसिड,10,10-10-पेरॉक्सीकैलेटिन डी, टेरेसाइक्लिक एसिड, (1,2-2-10, 10,10,10,10,10-10,10-10,10,10-10,10-10,20,10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10-2-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10-पेरॉक्सीकैलेटिन डी, टेरेरेसाइक्लिक एसिड, (1.2.1)-10-10-10-10-10-10-पेरॉक्सीकैलेटिन डी, टेरेरेसाइक्लिक एसिड, (1,2-2-10,2-10,10,10-10,10,10,10-10,10,10,10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10-पेरॉक्सीकैलोन, (1आर, 2एस, 3 आर, 4,7,7-टेट्रामिथाइलबायसाइक्लिन[2.2.1]हेपटी-2-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10-10,10,10-10,10,20,2000-10,10,2000-10, सुजियोनिल एसीटेट, 3-एसिटाइल-13-डीऑक्सीफोमेनोम, आइसोक्यूमेनोल, लिगुसाइपेरोनॉल, प्रोक्यूमाडियोल। द्वितीयक मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पहचाने गए अंतर मेटाबोलाइट्स, साथ ही सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में एचडीएमबी और केईजीजी डेटाबेस भी शामिल हैं। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

टीसीएम की विस्तृत विविधता और विभिन्न प्रकृति के कारण, ये जड़ी-बूटियां कभी-कभी नैदानिक अभ्यास में काम नहीं करती हैं, और यह टीसीएम के अनुचित प्रसंस्करण और काढ़ा के कारण हो सकता है। टीसीएम के तंत्र समकालीन विज्ञान और प्रौद्योगिकीके उपयोग के साथ अधिक स्पष्ट हो रहे हैं। इस अध्ययन से पता चलता है कि सीआर और सीआरवी दोनों के पीडी मॉडल चूहों में चिकित्सीय प्रभाव हैं और सीआरवी का चिकित्सीय प्रभाव अधिक महत्वपूर्ण है। सीआरवी की कार्रवाई का तंत्र इस तथ्य से संबंधित हो सकता है कि सिरका प्रसंस्करण सीआर के घटकों को प्रभावित कर सकता है जो रक्त में अवशोषित होते हैं और लिनोलिक एसिड चयापचय और असंतृप्त फैटी एसिड के जैवसंश्लेषण से जुड़े हो सकते हैं। चित्रा 10 दर्द से राहत में सीआरवी की कार्रवाई के संभावित मार्गों को दर्शाता है।

Figure 10
चित्रा 10: सीआरवी के बढ़े हुए एनाल्जेसिक प्रभाव के तंत्र। परिणामों से पता चला कि रक्त में 15 घटक और दो मेटाबोलाइट्स पाए गए। उनमें से, सीआरवी समूह में (-)-मर्टेनॉल और [(1आर, 2 एस, 3 आर, 4 आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामेथिलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड का स्तर सीआर समूह की तुलना में काफी अधिक था। सीआरवी एआरए से बने 2-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स और 4-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन के स्तर को कम कर सकता है और एराकिडोनिक एसिड चयापचय के मॉड्यूलेशन, असंतृप्त फैटी एसिड के जैवसंश्लेषण और लिनोलिक एसिड चयापचय के माध्यम से एनाल्जेसिक प्रभाव प्राप्त कर सकता है। संक्षेप: एआरए = एराकिडोनिक एसिड; सीओएक्स = साइक्लोऑक्सीजिनेज; एलए = लिनोलिक एसिड; पीयूएफए = पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड; जीएलए = γ-लिनोलेनिक एसिड; डीजीएलए = डिहोमो-γ-लिनोलेनिक; पीडी = प्राथमिक डिसमेनोरिया; पीजी = प्रोस्टाग्लैंडीन; एलटी = ल्यूकोट्रिएन; टीएक्स = थ्रोम्बोक्सेन; एसडीए = स्टीयरिडोनिक एसिड; ईटीए = इकोसैटेट्राएनोइक एसिड; ईपीए = इकोसापेंटेनोइक एसिड; सीआर = साइपेरी राइजोम; सीआरवी = सिरका के साथ संसाधित सीआर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

प्रयोग के दौरान सावधानियां
चूंकि सीआर के प्रभावी घटक का तेल अस्थिर है, सीआर निकालने का समय 20 मिनट से अधिक नहीं होना चाहिए, और जब यह उबलता है, तो इसे एकाग्रता के दौरान 60 डिग्री सेल्सियस से अधिक तापमान के साथ कम गर्मी पर होना चाहिए। प्रभावी सामग्री के सफल निष्कर्षण को सुनिश्चित करने के लिए, जड़ी बूटियों को काढ़े से पहले कम से कम 2 घंटे के लिए पानी में भिगोया जाना चाहिए ताकि भिगोने का काम पूरा होने पर जड़ी-बूटियां गीली हों। सीआर प्रसंस्करण के दौरान, सिरका को जड़ी बूटियों के साथ अच्छी तरह से मिलाया जाना चाहिए ताकि सिरका पूरी तरह से उनमें प्रवेश कर सके। यदि सिरका की मात्रा जड़ी बूटियों को अच्छी तरह से गीला करने के लिए बहुत कम है, तो सिरका को पतला करने के लिए थोड़ी मात्रा में पानी मिलाया जा सकता है, और फिर सिरका को जड़ी बूटियों के साथ पूरी तरह से मिलाया जा सकता है। जब मिश्रण पूरा हो जाता है, तो जड़ी बूटी सभी सिरका को अवशोषित कर लेगी। चूंकि सिरका में एसिटिक एसिड होता है, इसलिए रासायनिक प्रतिक्रिया से बचने के लिए मिश्रण को लोहे के संपर्क में नहीं आना चाहिए।

चूहे के प्रयोग में, एस्ट्राडियोल बेंजोएट का पहला इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन 10 वें दिन दिया जाता है, फिर सीआर या सीआरवी के अर्क का इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन दिया जाता है, और अंत में, ऑक्सीटोसिन का इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन प्रशासित किया जाता है। ऑक्सीटोसिन के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन के बाद, जानवर को 30 मिनट के लिए देखा जाता है, और रक्त तुरंत लिया जाता है। आमतौर पर, इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन13 के बाद रक्त एकाग्रता 1 घंटे के भीतर एक चरम पर पहुंच जाती है, जो रक्त लेने का सबसे अच्छा समय है।

एमएस द्वारा अर्क और सीरम नमूने का निर्धारण करते समय, उन्हें एक ही बैच में निर्धारित किया जाना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि विभिन्न नमूनों में एक ही घटक का अवधारण समय सुसंगत है। इस प्रयोग में, घटकों की पहचान एक कठिन बिंदु था। यद्यपि अंतर्जात मेटाबोलाइट्स के लिए अपेक्षाकृत परिपक्व डेटाबेस का उपयोग किया जा सकता है, रक्त में अवशोषित घटकों की पहचान करने के लिए कोई मिलान डेटाबेस नहीं था, इसलिए पहचान में अधिक सावधानी बरतनी चाहिए।

सीआर और सीआरवी समूहों के बीच रक्त में अवशोषित घटकों में अंतर
सीआर के सक्रिय घटक को निर्धारित करने के लिए, इस प्रयोग ने डिसमेनोरिया मॉडल चूहों में रक्त में अवशोषित घटकों की जांच की। इस प्रयोग में, यह पाया गया कि रक्त में 15 घटक और दो मेटाबोलाइट्स सीआर और सीआरवी समूहों के बीच भिन्न थे। उनमें से, सीआरवी समूह में (-)-मर्टेनॉल और [(1आर, 2 एस, 3 आर, 4 आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामिथाइलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड का स्तर सीआर समूह की तुलना में काफी अधिक था, लेकिन अन्य घटकों का स्तर काफी भिन्न नहीं था। (-)-मर्टेनॉल और [(1आर, 2एस, 3आर, 4आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामिथाइलबिसाइक्लो[2.2.1] हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड टेरपेनोइड्स हैं और इन्हें सीआरवी का प्रभावी घटक माना जाता है।

लिगुसाइपेरोनॉल और प्रोक्यूरेकुमेडियोल क्रमशः α-साइपरोन और आइसोक्यूमेनोल के ऑक्सीकरण द्वारा निर्मित होते हैं, और α-साइपरोन में एक मजबूत एनाल्जेसिक प्रभाव होता है। कार्रवाई का प्रस्तावित तंत्र एनएफ-केबी सिग्नलिंग31 के नकारात्मक विनियमन के माध्यम से एलपीएस-प्रेरित सीओएक्स -2 अभिव्यक्ति और पीजीई2 संश्लेषण को कम कर सकता है। (+)-नूटकाटोन सीओएक्स -2 गतिविधि32,33 को भी रोकता है। डिसमेनोरिया3 के इलाज में इसोकुरक्यूमेनोल करक्यूमा राइजोमा का मुख्य घटक है, और इसके मेटाबोलाइट प्रोक्यूमाडियोल का एनाल्जेसिक प्रभाव हो सकता है। सीआर समूह की तुलना में, सीआरवी समूह ने (-)-मर्टेनॉल के काफी उच्च स्तर दिखाए, जिसमें एनाल्जेसिक प्रभाव34 है। कार्रवाई का संभावित तंत्र यह हो सकता है कि सीओएक्स -235 की अभिव्यक्ति में परिवर्तन विरोधी भड़काऊ साइटोकिन (आईएल -10, आईएफएन -γ) के स्तर को बढ़ाता है और प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स (टीएनएफ -α, आईएल -1) के स्तरको कम करता है। सिरका के साथ प्रसंस्करण रक्त में सक्रिय अवयवों के स्तर में सुधार करता है, यही कारण है कि सिरका के साथ उत्पादित उत्पाद अधिक प्रभावी होते हैं।

सीआर और सीआरवी समूहों के बीच चयापचय मार्गों में अंतर
पाथवे विश्लेषण ने सीआर और सीआरवी समूहों के बीच काफी अलग चयापचय मार्ग दिखाए, जिसमें फेनिलएलनिन चयापचय, असंतृप्त फैटी एसिड, फेनिलएलनिन, टायरोसिन और ट्रिप्टोफैन बायोसिंथेसिस और लिनोलिक एसिड चयापचय का जैवसंश्लेषण शामिल है। हालांकि, फेनिलएलनिन चयापचय और फेनिलएलनिन, टायरोसिन और ट्रिप्टोफैन जैवसंश्लेषण के चयापचय मार्ग पीडी से संबंधित नहीं हैं। इन परिणामों से पता चलता है कि सीआरवी की बढ़ी हुई प्रभावकारिता से जुड़े चयापचय मार्ग लिनोलिक एसिड चयापचय और असंतृप्त फैटी एसिड के जैवसंश्लेषण हैं।

असंतृप्त फैटी एसिड में दो प्रकार शामिल हैं: ओमेगा -3 और ओमेगा -637। मध्यस्थों के तीन अग्रदूत, जिनमें ईकोसापेंटेनोइक एसिड (20: 5 : 3; ईपीए), डोकोसाहेक्साएनोइक एसिड (22: 5 : 3; डीएचए), और एराकिडोनिक एसिड (20: 5 : 6; एआरए), असंतृप्त फैटी एसिड मार्ग37,38 के जैवसंश्लेषण में शामिल हैं। ईपीए और एआरए चयापचय दोनों सीओएक्स की कार्रवाई के तहत प्रोस्टाग्लैंडिंस और ल्यूकोट्रिएन का उत्पादन करते हैं। एआरए 2-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स का उत्पादन करता है, जिसमें पीजीएफ2α, पीजीई2, पीजीआई2, और थ्रोम्बोक्सेन (टीएक्सए2, टीएक्सबी2), और 4-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन शामिल हैं, जिसमें ल्यूकोट्रिएन ए4 (एलटीए4) ल्यूकोट्रिएन बी4 (एलटीबी4), ल्यूकोट्रिएन सी4 (एलटीसी4), और ल्यूकोट्रिएन डी4 (लिमिटेड4) शामिल हैं। 3-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स में प्रोस्टाग्लैंडीन ई3 (पीजीई3), प्रोस्टासाइक्लिन आई3 (पीजीआई3), और थ्रोम्बोक्सेन ए2 (टीएक्सए3), और 5-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन शामिल हैं ल्यूकोट्रिएन ए5 (एलटीए5), ल्यूकोट्रिएन बी5 (एलटीबी5), ल्यूकोट्रिएन सी5 (एलटीसी5), और ल्यूकोट्रिएन डी5 (लिमिटेड5), जो बड़े पैमाने पर ईपीए द्वारा उत्पादित होते हैं।

ईपीए की परिवर्तन प्रक्रिया एआरए के समान है और समानएंजाइमों 39 द्वारा मध्यस्थता की जाती है। 2-श्रृंखला प्रोस्टेनोइड्स और 4-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन में मुख्य रूप से प्रो-भड़काऊ, प्लेटलेट एकत्रीकरण और वाहिकासंकीर्णन प्रभाव होते हैं। इसके विपरीत, 3-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स और 5-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटीप्लेटलेट और वासोडिलेटरी प्रभावदिखाते हैं। टीएक्सए2 और टीएक्सबी2 एआरए से उत्पन्न होते हैं, जिससे रक्त वाहिकाएं संकीर्ण हो जाती हैं। ईपीए-व्युत्पन्न पीजीआई3, पीजीई3, और टीएक्सए3 केवल वासोडिलेटर्स38,40 के रूप में कार्य करते हैं। ईपीए और एआरए सीओएक्स एंजाइम द्वारा पीजी में रूपांतरण के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं। जब झिल्ली ईपीए / एए अनुपात में वृद्धि होती है, तो ईकोसैनोइड्स पीजीआई2 और टीएक्सए2, जो एकत्रीकरण को बढ़ावा देते हैं, को टीएक्सए 3और पीजीआई 3 में परिवर्तित किया जा सकता है, जो एंटी-एग्रीगेशन को बढ़ावा देते हैं, जिसके परिणामस्वरूप विरोधी भड़काऊ और विरोधी एग्रीगेटरी प्रभाव40 होते हैं। इसके अतिरिक्त, ईपीए, डीएचए और लिनोलिक एसिड का संयुक्त उपयोग (सी 18: 2 : 6; एलआईएन) गोजातीय एंडोमेट्रियम और ट्रोफोब्लास्ट 41,42 मेंपीजीएफ2 α और पीजीई 2 रिलीज को कम कर सकता है।

पीडी संभवतः पीजी और ल्यूकोट्रिएन 43,44,45, विशेष रूप से पीजी 46 के उत्पादन के कारण होता है। इस बीच, वैसोप्रेसिन, β-एंडोर्फिन, एस्ट्रोजेन, प्रोजेस्टेरोन, न्यूरोट्रांसमीटर, आईएल, ईटी -1 और एनओ में असंतुलन भी डिसमेनोरिया47 से संबंधित हो सकता है। एलिसा परिणामों के अनुसार, सीआरवी समूह में पीजीएफ2 और पीजीएफ2 / पीजीई2 स्तर कम हो गए, जबकि पीजीई2 स्तर सीआर समूह के सापेक्ष बढ़ गया। इसके अतिरिक्त, ल्यूकोट्रिएन बी4 (सी02165) और प्रोस्टाग्लैंडीन जे2 (सी05957) सीआरवी समूह में कम थे। यह इंगित करता है कि, सीआरवी समूह में, एआरए से बने 2-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स के निम्न स्तर थे, जिसमें पीजीएफ2 भी शामिल था, जो डिसमेनोरिया के लिए सबसे महत्वपूर्ण कारक है। उच्च सांद्रता पर पीजीई2 के साथ थेरेपी रक्त वाहिकाओं को पतला करती है, और पीजीई2 कम सांद्रता48 पर वाहिकासंकीर्णन का कारण बनता है। इसलिए, गर्भाशय वासोडिलेशन के साथ आराम से होता है, और डिसमेनोरिया से राहत मिलती है।

चूंकि मानव शरीर पर्याप्त मात्रा में सी 18 असंतृप्त फैटी एसिड को संश्लेषित नहीं कर सकता है, लिनोलिक एसिड और α-लिनोलेनिक एसिड, जो सी 18 असंतृप्त फैटी एसिड का एकमात्र स्रोत हैं,बहुत महत्वपूर्ण हैं। लिनोलिक एसिड और α-लिनोलेनिक एसिड क्रमशः ओमेगा -6 और ओमेगा -3 असंतृप्त फैटी एसिड चयापचय का स्रोत हैं। विशेष रूप से, प्रोस्टाग्लैंडीन संश्लेषण का अग्रदूत एआरए है, और एआरए को लिनोलिक एसिड49 से संश्लेषित किया जाता है। लिनोलिक एसिड एक अग्रदूत है, और मेटाबोलाइट्स की एक श्रृंखला को इससे संश्लेषित किया जाता है, जिसमें एआरए, प्रोस्टाग्लैंडिंस (पीजीएफ2α, पीजीई2), प्रोस्टासाइक्लिन (पीजीआई2), और थ्रोम्बोक्सेन (टीएक्सए2)50 शामिल हैं। लिनोलिक एसिड सीआरवी के बढ़े हुए एनाल्जेसिक प्रभाव से निकटता से संबंधित है। इसके अलावा, स्टेरॉयड हार्मोन बायोसिंथेसिस का चयापचय मार्ग प्रोजेस्टेरोन51,52,53 और स्फिंगोसिन -1-फॉस्फेट (सी06124) का उत्पादन कर सकता है, जो स्फिंगोलिपिड चयापचय के चयापचय मार्ग द्वारा निर्मित होते हैं, सीओएक्स -2 को प्रेरित करते हैं, और टीएनएफ54,55,56,57 के माध्यम से पीजीई2 का उत्पादन करते हैं। ये पीडी से भी संबंधित हो सकते हैं।

प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं हैं। केवल घटकों के सापेक्ष स्तरों की तुलना की गई थी, और मानक नमूने का उपयोग जड़ी बूटी में घटकों और रक्त में अवशोषित लोगों को निर्धारित करने के लिए नहीं किया गया था। जानवरों के प्रयोगों में चूहों के मल और मूत्र एकत्र नहीं किए गए थे, जिसके परिणामस्वरूप विवो में सीआर के कम मेटाबोलाइट्स की खोज हुई। सत्यापन प्रयोगों को मेटाबोनोमिक्स विश्लेषण द्वारा खोजे गए तंत्र की पुष्टि करनी चाहिए।

इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली रणनीति और प्रोटोकॉल ने विट्रो में रासायनिक घटकों के अध्ययन और विवो में व्यक्तिगत घटकों के एकतरफा अध्ययन में अंधापन से बचा। इसलिए, यह तंत्र अन्वेषण के लिए बहुत उपयुक्त था। रणनीति बहुत समय और काम बचा सकती है और चिकित्सीय प्रभावकारिता के लिए महत्वपूर्ण घटकों और तंत्र की सटीक पहचान कर सकती है।

इस अध्ययन में, यह पाया गया कि रक्त में 15 घटक और दो मेटाबोलाइट थे। उनमें से, सीआर समूह की तुलना में सीआरवी समूह में (-)-माइर्टेनोल और [(1आर, 2 एस, 3 आर, 4 आर)-3-हाइड्रॉक्सी-1,4,7,7-टेट्रामिथाइलबिसाइक्लो[2.2.1]हेपटी-2-वाईएल] एसिटिक एसिड के स्तर में काफी वृद्धि हुई थी, यह दर्शाते हुए कि सिरका के साथ प्रसंस्करण रक्त में सक्रिय अवयवों के स्तर को बढ़ा सकता है। सिरका के साथ सीआर संसाधित होने के बाद, प्रो-भड़काऊ, प्लेटलेट एकत्रीकरण और वाहिकासंकीर्णन गुणों के साथ 2-श्रृंखला प्रोस्टानोइड्स और 4-श्रृंखला ल्यूकोट्रिएन के स्तर में कमी आई, जिसमें पीजीएफ2, ल्यूकोट्रिएन बी4 और प्रोस्टाग्लैंडीन जे2 शामिल हैं। यह वह तंत्र हो सकता है जिसके द्वारा सीआरवी एक बढ़े हुए एनाल्जेसिक प्रभाव को प्रदर्शित करता है।

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Disclosures

लेखक घोषणा करते हैं कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित नहीं हैं।

Acknowledgments

इस काम को चोंगकिंग नगरपालिका स्वास्थ्य और परिवार नियोजन आयोग चीनी चिकित्सा विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना (परियोजना संख्या: ZY201802297), चोंगकिंग प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन की सामान्य परियोजना (परियोजना संख्या: cstc2019jcyj-msxmX065), चोंगकिंग आधुनिक पर्वत क्षेत्र विशेषता उच्च दक्षता कृषि प्रौद्योगिकी प्रणाली नवाचार टीम बिल्डिंग प्लान 2022 [10], और चोंगकिंग नगरपालिका स्वास्थ्य आयोग चीनी मटेरिया की प्रमुख अनुशासन निर्माण परियोजना द्वारा समर्थित किया गया था। मेडिका प्रोसेसिंग।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetonitrile  Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20 Beckman Coulter, Inc. MRZ15K047
Estradiol benzoate Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd C10042616
formic acid Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 177799
LC 30A system Shimadzu, Kyoto, Japan 228-45162-46
Olive oil Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd H25A11P111909
Oxytocin synthetic Zhejiang peptide biology Co., Ltd  2019092001
Rat PGF2α ELISA kit Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd 202101
Rat PGFE2 ELISA kit Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd EDL202006217
SPF Sprague-Dawley rats Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria 1510002987
Triple TOF 4600 system SCIEX, Framingham, MA, USA BK20641402
water Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 152720

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References

  1. Yu, W. Y., et al. Acupuncture for primary dysmenorrhea: A potential mechanism from an anti-inflammatory perspective. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 1907009 (2021).
  2. Rafique, N., Al-Sheikh, M. H. Prevalence of primary dysmenorrhea and its relationship with body mass index. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 44 (9), 1773-1778 (2018).
  3. Tong, H., et al. Bioactive constituents and the molecular mechanism of Curcumae Rhizoma in the treatment of primary dysmenorrhea based on network pharmacology and molecular docking. Phytomedicine. 86, 153558 (2021).
  4. Ferries-Rowe, E., Corey, E., Archer, J. S. Primary dysmenorrhea: Diagnosis and therapy. Obstetrics & Gynecology. 136 (5), 1047-1058 (2020).
  5. Lu, J., et al. The association study of chemical compositions and their pharmacological effects of Cyperi Rhizoma (Xiangfu), a potential traditional Chinese medicine for treating depression. Journal of Ethnopharmacology. 287, 114962 (2021).
  6. Lu, J., et al. Quality status analysis and intrinsic connection research of growing place, morphological characteristics, and quality of Chinese medicine: Cyperi Rhizoma (Xiangfu) as a case study. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2022, 8309832 (2022).
  7. Taheri, Y., et al. Cyperus spp.: A review on phytochemical composition, biological activity, and health-promoting effects. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 4014867 (2021).
  8. El-Wakil, E. A., Morsi, E. A., Abel-Hady, H. Phytochemical screening, antimicrobial evaluation and GC-MS analysis of Cyperus rotundus. World Journal Of Pharmacy And Pharmaceutical Sciences. 8 (9), 129-139 (2019).
  9. Rocha, F. G., et al. Preclinical study of the topical anti-inflammatory activity of Cyperus rotundus L. extract (Cyperaceae) in models of skin inflammation. Journal of Ethnopharmacology. 254, 112709 (2020).
  10. Hao, G., Tang, M., Wei, Y., Che, F., Qian, L. Determination of antidepressant activity of Cyperus rotundus L extract in rats. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 16 (4), 867-871 (2017).
  11. Kakarla, L., et al. Free radical scavenging, α-glucosidase inhibitory and anti-inflammatory constituents from Indian sedges, Cyperus scariosus R.Br and Cyperus rotundus L. Pharmacognosy Magazine. 12 (47), 488-496 (2016).
  12. Shakerin, Z., et al. Effects of Cyperus rotundus extract on spatial memory impairment and neuronal differentiation in rat model of Alzheimer's disease. Advanced Biomedical Research. 9 (1), 17-24 (2020).
  13. Li, J., et al. Pharmacokinetics of caffeic acid, ferulic acid, formononetin, cryptotanshinone, and tanshinone IIA after oral Administration of naoxintong capsule in rat by HPLC-MS/MS. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2017, 9057238 (2017).
  14. Zhang, A., et al. Metabolomics: Towards understanding traditional Chinese medicine. Planta Medica. 76 (17), 2026-2035 (2010).
  15. Li, L., Ma, S., Wang, D., Chen, L., Wang, X. Plasma metabolomics analysis of endogenous and exogenous metabolites in the rat after administration of Lonicerae Japonicae Flos. Biomedical Chromatography. 34 (3), 4773 (2020).
  16. Guijas, C., Montenegro-Burke, J. R., Warth, B., Spilker, M. E., Siuzdak, G. Metabolomics activity screening for identifying metabolites that modulate phenotype. Nature Biotechnology. 36 (4), 316-320 (2018).
  17. Hu, L., et al. Functional metabolomics decipher biochemical functions and associated mechanisms underlie small-molecule metabolism. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 417-433 (2020).
  18. Cui, L., Lu, H., Lee, Y. Challenges and emergent solutions for LC-MS/MS based untargeted metabolomics in diseases. Mass Spectrometry Reviews. 37 (6), 772-792 (2018).
  19. Liu, F., et al. Metabonomics study on the hepatoprotective effect of Panax notoginseng leaf saponins using UPLC/Q-TOF-MS analysis. The American Journal of Chinese Medicine. 47 (3), 559-575 (2019).
  20. Zhao, L., Hartung, T. Metabonomics and toxicology. Methods in Molecular Biology. 1277, 209-231 (2015).
  21. Martin, F. J., Montoliu, I., Kussmann, M. Metabonomics of ageing - Towards understanding metabolism of a long and healthy life. Mechanisms of Ageing and Development. 165, 171-179 (2017).
  22. Heaney, L. M., Deighton, K., Suzuki, T. Non-targeted metabolomics in sport and exercise science. Journal of Sports Sciences. 37 (9), 959-967 (2019).
  23. Yang, Y., et al. Metabonomics profiling of marinated meat in soy sauce during processing. Journal of the Science of Food and Agriculture. 98 (4), 1325-1331 (2018).
  24. Xu, S. Y. Methodology of Pharmacological Experiment. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2002).
  25. Ma, B., et al. An integrated study of metabolomics and transcriptomics to reveal the anti-primary dysmenorrhea mechanism of Akebiae Fructus. Journal of Ethnopharmacology. 270, 113763 (2021).
  26. Li, X., et al. Regulation of mild moxibustion on uterine vascular and prostaglandin contents in primary dysmenorrhea rat model. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 9949642 (2021).
  27. Smith, C. A., Want, E. J., O'Maille, G., Abagyan, R., Siuzdak, G. XCMS: Processing mass spectrometry data for metabolite profiling using nonlinear peak alignment, matching, and identification. Analytical Chemistry. 73 (3), 779-787 (2006).
  28. Wang, D., et al. UPLC-MS/MS-based rat serum metabolomics reveals the detoxification mechanism of Psoraleae Fructus during salt processing. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021, 5597233 (2021).
  29. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801 (2019).
  30. Xie, H., et al. Raw and vinegar processed Curcuma wenyujin regulates hepatic fibrosis via bloking TGF-β/Smad signaling pathways and up-regulation of MMP-2/TIMP-1 ratio. Journal of Ethnopharmacology. 246, 111768 (2020).
  31. Jung, S. H., et al. α-Cyperone, isolated from the rhizomes of Cyperus rotundus, inhibits LPS-induced COX-2 expression and PGE2 production through the negative regulation of NFkappaB signalling in RAW 264.7 cells. Journal of Ethnopharmacology. 147 (1), 208-214 (2013).
  32. Dantas, L. B. R., et al. Nootkatone inhibits acute and chronic inflammatory responses in mice. Molecules. 25 (9), 2181 (2020).
  33. Xu, Y., et al. Nootkatone protects cartilage against degeneration in mice by inhibiting NF- κB signaling pathway. International Immunopharmacology. 100, 108119 (2021).
  34. Heimfarth, L., et al. Characterization of β-cyclodextrin/myrtenol complex and its protective effect against nociceptive behavior and cognitive impairment in a chronic musculoskeletal pain model. Carbohydrate Polymers. 244, 116448 (2020).
  35. Viana, A., et al. (-)-Myrtenol accelerates healing of acetic acid-induced gastric ulcers in rats and in human gastric adenocarcinoma cells. European Journal of Pharmacology. 854, 139-148 (2019).
  36. Bejeshk, M. A., et al. Anti-inflammatory and anti-remodeling effects of myrtenol in the lungs of asthmatic rats: Histopathological and biochemical findings. Allergologia et Immunopathologica. 47 (2), 185-193 (2019).
  37. Christie, W. W., Harwood, J. L. Oxidation of polyunsaturated fatty acids to produce lipid mediators. Essays in Biochemistry. 64 (3), 401-421 (2020).
  38. Wiktorowska-Owczarek, A., Berezinska, M., Nowak, J. Z. PUFAs: Structures, metabolism and functions. Advances in Clinical and Experimental. 24 (6), 931-941 (2015).
  39. Araujo, P., et al. The effect of omega-3 and omega-6 polyunsaturated fatty acids on the production of cyclooxygenase and lipoxygenase metabolites by human umbilical vein endothelial cells. Nutrients. 11 (5), 966 (2019).
  40. Shahidi, F., Ambigaipalan, P. Omega-3 polyunsaturated fatty acids and their health benefits. Annual Review of Food Science and Technology. 9, 345-381 (2018).
  41. Meier, S., Ledgard, A. M., Sato, T. A., Peterson, A. J., Mitchell , M. D. Polyunsaturated fatty acids differentially alter PGF(2α) and PGE2 release from bovine trophoblast and endometrial tissues during short-term culture. Animal Reproduction Science. 111 (2), 353-360 (2009).
  42. Cheng, Z., et al. Altering n-3 to n-6 polyunsaturated fatty acid ratios affects prostaglandin production by ovine uterine endometrium. Animal Reproduction Science. 143 (1-4), 38-47 (2013).
  43. Sultan, C., Gaspari, L., Paris, F. Adolescent dysmenorrhea. Endocrine Development. 22, 171-180 (2012).
  44. Zeev, H. M. D., Craig, L. M. D., Suzanne, R. M. D., Rosalind, V. M. D., Jeffrey, D. M. D. Urinary leukotriene (LT) E4 in adolescents with dysmenorrhea: A pilot study. Journal of Adolescent Health. 27 (3), 151-154 (2000).
  45. Fajrin, I., Alam, G., Usman, A. N. Prostaglandin level of primary dysmenorrhea pain sufferers. Enfermería Clínica. 30, 5-9 (2020).
  46. Iacovides, S., Avidon, I., Baker, F. C. What we know about primary dysmenorrhea today: a critical review. Human Reproduction Update. 21 (6), 762-778 (2015).
  47. Barcikowska, Z., Rajkowska-Labon, E., Grzybowska, M. E., Hansdorfer-Korzon, R., Zorena , K. Inflammatory markers in dysmenorrhea and therapeutic options. International Journal of Environmental Research and Public Health. 17 (4), 1191 (2020).
  48. Wang, T., et al. Arachidonic acid metabolism and kidney inflammation. International Journal of Molecular Science. 20 (15), 3683 (2019).
  49. Szczuko, M., et al. The role of arachidonic and linoleic acid derivatives in pathological pregnancies and the human reproduction process. International Journal of Molecular Sciences. 21 (24), 9628 (2020).
  50. Serrano-Mollar, A., Closa, D. Arachidonic acid signaling in pathogenesis of allergy: Therapeutic implications. Current Drug Targets-Inflammation and Allergy. 4 (2), 151-155 (2005).
  51. Toit, R. L., Storbeck, K. H., Cartwright, M., Cabral, A., Africander, D. Progestins used in endocrine therapy and the implications for the biosynthesis and metabolism of endogenous steroid hormones. Molecular and Cellular Endocrinology. 441, 31-45 (2017).
  52. Ghayee, H. K., Auchus, R. J. Basic concepts and recent developments in human steroid hormone biosynthesis. Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 8 (4), 289-300 (2007).
  53. Liang, J. J., Rasmusson, A. M. Overview of the molecular steps in steroidogenesis of the GABAergic neurosteroids allopregnanolone and pregnanolone. Chronic Stress. 2, 2470547018818555 (2018).
  54. Pettus, B. J., et al. The sphingosine kinase 1/sphingosine-1-phosphate pathway mediates COX-2 induction and PGE2 production in response to TNF-α. The FASEB Journal. 17 (11), 1411-1421 (2003).
  55. Zeidan, Y. H., et al. Acid ceramidase but not acid sphingomyelinase is required for tumor necrosis factor-α-induced PGE2 production. Journal of Biological Chemistry. 281 (34), 24695-24703 (2006).
  56. Kawamori, T., et al. Role for sphingosine kinase 1 in colon carcinogenesis. The FASEB Journal. 23 (2), 405-414 (2009).
  57. Hannun, Y. A., Obeid, L. M. Sphingolipids and their metabolism in physiology and disease. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (3), 175-191 (2018).

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Chen, Y., Li, N., Wang, D., Fan, J., Chu, R., Li, S. Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea. J. Vis. Exp. (190), e64691, doi:10.3791/64691 (2022).

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