Summary
Denne undersøgelse beskriver en optimeret protokol til etablering af primære fibroblaster fra keloidvæv, der effektivt og støt kan tilvejebringe rene og levedygtige fibroblaster.
Abstract
Fibroblaster, den vigtigste celletype i keloidvæv, spiller en væsentlig rolle i dannelsen og udviklingen af keloider. Isolering og dyrkning af primære fibroblaster afledt af keloidvæv er grundlaget for yderligere undersøgelser af keloidernes biologiske funktion og molekylære mekanismer samt nye terapeutiske strategier til behandling af dem. Den traditionelle metode til opnåelse af primære fibroblaster har begrænsninger, såsom dårlig cellulær tilstand, blanding med andre typer celler og modtagelighed for forurening. Dette papir beskriver en optimeret og let reproducerbar protokol, der kan reducere forekomsten af mulige problemer ved opnåelse af fibroblaster. I denne protokol kan fibroblaster observeres 5 dage efter isolering og nå næsten 80% sammenløb efter 10 dages kultur. Derefter passeres fibroblasterne og verificeres ved anvendelse af PDGFRα- og vimentinantistoffer til immunofluorescensassays og CD90-antistoffer til flowcytometri. Afslutningsvis kan fibroblaster fra keloidvæv let erhverves gennem denne protokol, som kan give en rigelig og stabil kilde til celler i laboratoriet til keloidforskning.
Introduction
Keloid, en fibroproliferativ sygdom, manifesterer sig som den kontinuerlige vækst af plaques, der ofte invaderer den omgivende normale hud uden selvbegrænsning og forårsager forskellige grader af kløe, smerte og kosmetiske og psykologiske byrder for patienter1. Fibroblaster, de primære celler involveret i keloider, spiller en væsentlig rolle i dannelsen og udviklingen af denne sygdom gennem overdreven spredning, overflødig ekstracellulær matrixproduktion og uorganiserede kollagener 2,3. Den underliggende patogenese forbliver imidlertid uklar, og der mangler stadig en effektiv terapeutisk metode til keloid; Der er derfor et presserende behov for yderligere forskning 4,5.
Da der ikke er nogen ideel dyremodel for keloidforskning in vivo 6,7, kan opbygning af en in vitro-model ved at erhverve primære fibroblaster fra keloidvæv tilbyde gennemførlighed og pålidelighed for keloidforskning 2,6. Primære celler er dem, der stammer direkte fra levende væv, og det er almindeligt anerkendt, at disse celler mere kan ligne den fysiologiske tilstand og genetiske baggrund hos flere individer sammenlignet med cellelinjer 8,9. Dyrkning af primære celler giver et stærkt middel til at studere vækst og metabolisme af celler såvel som andre cellefænotyper.
På nuværende tidspunkt er der to metoder til erhvervelse af primære fibroblaster: enzymfordøjelse og explantkultur. Imidlertid er der identificeret flere hindringer for opnåelse af primære fibroblaster, såsom risikoen for forurening med forskellige bakterier eller svampe, blanding med andre typer celler, der ikke let fjernes, den lange periode af dyrkningscyklussen, de efterfølgende ændringer i celleegenskaberne sammenlignet med de oprindelige celler osv9. Derfor er udvikling af en gennemførlig og effektiv proces til opnåelse af primære fibroblaster grundlaget for yderligere undersøgelser og applikationer. Denne undersøgelse beskriver en optimeret protokol til ekstraktion af primære fibroblaster fra keloidvæv, der effektivt og støt kan tilvejebringe rene og levedygtige fibroblaster.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne undersøgelse blev godkendt af det institutionelle bedømmelsesudvalg på Dermatology Hospital, Southern Medical University (2020081). Der blev indhentet informeret patientsamtykke, før væv blev indsamlet fra individerne.
1. Forberedelse
BEMÆRK: Følgende procedurer skal udføres i et sterilt miljø under et biologisk sikkerhedsskab.
- Forbered komplet dyrkningsmedium ved at tilsætte 10% føtalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin-amphotericin B-opløsning (PSA) til Dulbeccos modificerede Eagle-medium (DMEM) med høj glukose.
- Forbered fosfatbufret saltopløsning (PBS) med PSA ved at tilsætte 1% PSA i 1x PBS. Forbered PBS med FBS ved at tilføje 1% FBS til 1x PBS.
- Forbered flere steriliserede saks, tang og skalpeller ved autoklavering.
2. Indhentning af fjernet væv
- Få væv fra keloidpatienter gennem kirurgi. De friske keloidvæv samles i en steril pakkepose eller et sterilt centrifugerør, og de overføres hurtigst muligt til et biologisk sikkerhedsskab i laboratoriet.
BEMÆRK: I denne protokol var størrelsen af det erhvervede keloidvæv ca. ~ 20 x 20 x 10 mm3, og størrelsen kan variere afhængigt af operationen.
3. Isolation
- Tag keloidvævet ud med en steril pincet, og læg det i et 50 ml sterilt centrifugerør indeholdende 10-25 ml PBS med 1% PSA i 10 min. Derefter fremstilles en plade med 6 brønde, og der tilsættes 4 ml PBS suppleret med 1% PSA til hver brønd. Tag vævet ud ved hjælp af steriliseret pincet, og vask det to gange med PBS suppleret med 1% PSA. Brug sterile tang til at overføre vævet sekventielt fra den ene brønd til den næste.
- Fjern fedt- og epidermislagene ved hjælp af kirurgisk saks eller en kirurgisk skalpel, og lad dermislaget være uberørt. Trim og disseker dermislaget i 3-5 mm2 stykker med en saks, overfør disse stykker ved hjælp af sterile tang til den næste brønd, og vask dem i PBS med 1% PSA-opløsning igen.
4. Kultur
- Anbring dermisvævsstykkerne i petriskåle ved hjælp af steriliseret tang; Sørg for, at antallet af stykker er mellem 10 og 30, og afstanden mellem hvert stykke er >5 mm. Sæt petriskålene på hovedet i en 5% CO2 inkubator ved 37 °C i 30-60 min til vævsstykkerne tørrer lidt og klistrer til petriskålen. Derefter tilsættes DMEM suppleret med 10% FBS og 1% PSA, og petriskålene anbringes forsigtigt i en 5% CO2 -inkubator ved 37 °C.
BEMÆRK: Fibroblaster er en morfologisk og funktionelt heterogen cellepopulation. I betragtning af denne kompleksitet bør isolations- og kulturtrinnene udføres med omhu; Vælg keloid dermale vævsstykker jævnt, og bland disse stykker godt, før du lægger dem i petriskålen. - Efter 3 dage erstattes halvdelen af supernatanten med et komplet næringssubstrat. Skift kulturmediet hver 2-3 dage. Overhold fibroblasterne under et mikroskop ved 40x forstørrelse hver dag.
BEMÆRK: Alle trin skal udføres forsigtigt. Flyt ikke petriskålen i 2 dage efter isolering, da vævsstykkerne tager tid at klæbe til petriskålene. - Når fibroblasterne, der vokser omkring vævsstykkerne, når ca. 90% sammenløb, skal du fjerne vævsstykkerne og kulturmediet. Vask fibroblasterne med steril 1x PBS, og tilsæt 2 ml steril 1x trypsin-EDTA-opløsning til pladerne. Inkuber cellerne i ca. ~3-5 min ved 37 °C i en befugtet 5% CO2 inkubator. Tryk forsigtigt på kulturskålen, og observer den under et mikroskop. Når størstedelen af cellerne løsner sig fra pladen, tilsættes 2 ml komplet medium for at afslutte fordøjelsesprocessen.
- Overfør cellesuspensionen til et 15 ml sterilt centrifugeglas, og centrifuger glasset ved 300 × g i 3 minutter ved stuetemperatur. Supernatanten kasseres forsigtigt, og cellepelletsen resuspenderes i hele mediet. Frø fibroblasterne i en 9 cm cellekulturskål og inkuber ved 37 ° C i en befugtet 5% CO2 -inkubator.
5. Vedligeholdelse og bevarelse
- Ca. 3-4 dage senere, når fibroblasterne er vokset til 80% sammenløb, gentages trin 4.2-4.4 og passerer fibroblasterne i et forhold på 1: 3. Brug de passerede fibroblaster til yderligere eksperimenter.
BEMÆRK: Fibroblastkulturen skal stoppes efter 10 passager, fordi cellerne kan begynde at vise ændrede egenskaber sammenlignet med de oprindelige celler. - Kryopræserver de gennemborede celler i P1-P3 i flydende nitrogen til videre brug.
- Gentag trin 4.2-4.3. Overfør cellesuspensionen til et 15 ml sterilt centrifugeglas, og centrifuger glasset i 3 minutter ved 300 × g. Supernatanten kasseres forsigtigt, cellepelletsen resuspenderes i 1 ml cellefrysemedium indeholdende 90 % FBS og 10 % DMSO, og suspensionen overføres til cellekryorør.
- Flyt cellerne i en frossen kasse, og læg derefter den frosne kasse i en -80 °C fryser. Efter 1 dag overføres cellerne til flydende nitrogen til langvarig konservering.
6. Identifikation af fibroblaster ved immunofluorescensfarvning
- Anbring runde dæksler i en plade med 24 brønde, og dyrk de gennemsøgte fibroblaster i en koncentration på 1 × 104 celler / brønd. Når fibroblasterne når 60% sammenløb, skal du fjerne kulturmediet. Tilsæt 1 ml 4% paraformaldehyd for at fiksere fibroblasterne i 20 minutter ved stuetemperatur, og vask 3x med PBS i 1 min hver gang.
BEMÆRK: Tæl antallet af celler ved hjælp af et hæmocytometerglas under et mikroskop eller en automatisk celletæller. - Fjern PBS, inkuber med 0,5% Triton X-100 i 20 minutter til permeabilisering af cellemembraner, og vask derefter 3x med PBS i 1 min hver gang. Tilsæt PBS med 0,5% bovin serumalbumin, og blød i 30 minutter. Fjern det derefter, og tilsæt PDGFR-α/vimentin-antistoffet fortyndet i antistoffortyndingsmiddel ved 1:1.000. Der inkuberes natten over ved 4 °C.
- Den næste dag skal du fjerne det primære antistof, vaske cellerne 3x med PBS i 3 minutter og tilføje det sekundære antistof Alexa Fluor-555 ged anti-kanin IgG fortyndet med antistoffortyndingsmiddel kl. 1:200 for at suge i 1 time.
- Fjern det sekundære antistof, og vask cellerne 3x med PBS. Tag de runde dæksedler ud med pincet, læg dem på glasglas, og tilsæt 50 μL 5 μg/ml 4',6-diamidino-2-phenylindol (DAPI) opløsning for at plette cellekernerne. Opbevar prøverne i en våd, mørk kasse, og observer dem under et laserkonfokal fluorescensmikroskop.
BEMÆRK: Tilføj en negativ kontrolgruppe uden et primært antistof, men med et sekundært antistof for at udelukke uspecifik farvning.
7. Identifikation af fibroblaster ved flowcytometri
- Opsaml cellepillen i et 1,5 ml sterilt centrifugerør, og resuspender med 50 μL PBS indeholdende 1% FBS. Inkuber med anti-CD90 i 30 minutter i mørke, og tilføj en anti-IgG isotype kontrol til kontrolgruppen. Derefter tilsættes 200 μL PBS indeholdende 1% FBS, og glasset centrifugeres i 10 minutter ved 300 × g ved 4 °C.
- Supernatanten fjernes, og der tilsættes 200 μl PBS indeholdende 1 % FBS. Resuspender og filtrer suspensionen gennem en cellesi (70 mesh). Der tilsættes en 5 μg/ml stamopløsning af DAPI ved 1:100 til filtratet, og opnå derefter resultaterne ved flowcytometri. Indstil fremadrettet spredning (FSC) som abscissa og sidespredning (SSC) som ordinat, og cirkel hovedcellepopulationen. Vælg cellepopulationen, og indstil phycoerythrin som abscissa og tællingen som ordinat til analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protokollens tidslinje er opsummeret i figur 1A. Nogle repræsentative billeder af isolationsprocessen er vist i figur 2; Epidermis og fedtlagene blev omhyggeligt fjernet, og dermislaget blev adskilt i små fragmenter på 3-4 mm2, som blev inokuleret i petriskålene.
Som vist i figur 3A blev der observeret flere fibroblastudvækst af vævsstykkerne under mikroskopet 5 dage efter behandling. Som vist i figur 3B viste fibroblasterne høje spredningshastigheder og nåede et højt niveau af sammenløb efter 10 dage. Disse fibroblaster havde aflange, spindellignende cellelegemer og blev justeret i bundter, når de nåede et højt niveau af sammenløb. Ved at følge denne protokol blev fibroblasterne passeret og udvidet til den ønskede mængde inden for 2-3 uger.
For at verificere fibroblasternes identitet og renhed blev der anvendt et immunofluorescensfarvningsassay til påvisning af de fibroblastspecifikke markører PDGFRα10 og vimentin. Som forventet viser figur 4A og figur 4C, at alle fibroblasterne var positivt farvet af PDGFRα/vimentin-antistoffet med rød immunfluorescens og blå immunfluorescens i cellekernen. Som vist i figur 4C viste flowcytometrianalysen også CD90-positivitet i næsten alle fibroblasterne.
Figur 1: Oversigt over keloid fibroblast isolation og kultur procedure. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Repræsentative billeder af isolering og kultur af fibroblaster fra keloidvæv . (A) Vask vævet. (B) Fjern epidermis og fedtlag. (C) Disseker dermis i 3-4 mm3 stykker, og vask med PBS igen. (D) Anbring vævsfragmenterne i en petriskål. (E) Sæt petriskålene på hovedet i 5% CO2 -inkubatoren ved 37 ° C i 30-60 minutter for at lade vævsstykkerne tørre lidt og klæbe til petriskålen. (F) Der tilsættes komplet dyrkningsmedium i petriskålen og kultur i den CO2 -holdige celleinkubator. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Repræsentative billeder af fibroblastudvækst fra keloidvævsstykkerne. (A) Fibroblastudvækst fra vævsstykkerne i ~ 5 dage. (B) Fibroblasterne nåede et højt niveau af sammenløb på ~ 10 dage. Skalastænger = 200 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Identifikation af højt oprensede fibroblaster ved immunofluorescensfarvning og flowcytometri. (A) Immunofluorescensfarvning af fibroblaster ved anti-PDGFRα. (B) Negativ kontrolgruppe uden det primære antistof mod PDGFRα. (C) Immunofluorescensfarvning af fibroblasterne ved hjælp af anti-vimentin. (D) Negativ kontrolgruppe uden det primære antistof mod vimentin. (E) Flowcytometrianalyse af fibroblasterne. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Opnåelse af primære fibroblaster fra keloidvæv er et kritisk grundlag for yderligere forskning. Indtil nu har der været to metoder til erhvervelse af primære fibroblaster: enzymfordøjelse og eksplantatkultur11,12,13,14. Begge traditionelle metoder har imidlertid begrænsninger, såsom modtagelighed for forurening, blanding med andre typer celler, en lang dyrkningsperiode og en lav succesrate15,16. Denne undersøgelse har beskrevet en optimeret metode og givet klare instruktioner til at løse disse eksisterende udfordringer og øge chancen for succes for isolering og kultur af keloid fibroblaster.
Muligheden for mikrobiel kontaminering er et af de største problemer med at opnå primære fibroblaster. Alt udstyr og opløsninger skal steriliseres, og standard aseptiske teknikker skal implementeres under alle trin i protokollen. Protokollen indeholder påmindelser om at forblive aseptisk for at reducere risikoen for kontaminering. Det første kritiske skridt er isolationsprocessen; Formålet med at blødgøre vævene i PBS suppleret med 1% PSA og vaske flere gange er at fjerne eksisterende mikrober og resterende blodpletter. For at forhindre mulig overførsel af forurening skal der fremstilles et ekstra par steriliserede saks og tang; Disse instrumenter kan erstattes af ubrugte instrumenter i den næste operation. Desuden tilsættes PSA til dyrkningsmediet for at forhindre udvækst af mikrober. Periodisk testning for mycoplasma under isolering og efterfølgende dyrkning af keloidfibroblasterne bør indarbejdes i protokollen. Gennem disse processer kan muligheden for mikrobiel kontaminering reduceres betydeligt.
Den anden udfordring er at blande med andre typer celler, såsom keratinocytter. Denne celletype har også en intens proliferativ evne, hvilket gør det vanskeligt at fjerne. Renheden af fibroblaster er stærkt afhængig af isolationsprocessen; Epidermis og fedtlagene skal fjernes fuldstændigt for at undgå blanding med andre celler. PDGFR-α er en fibroblastspecifik markør, der udtrykkes i membranen og cytoplasmaet af fibroblaster10,17,18. CD90 og vimentin er også specifikke mesenkymale markører, der specifikt udtrykkes i membranerne i fibroblaster 19,20,21. Immunofluorescensfarvningsanalysen i dette arbejde viste, at alle cellerne positivt udtrykte PDGFR-α og vimentin. Flowcytometrianalysen viste også direkte CD90-positivitet i næsten alle fibroblaster og større CD90-positivitet sammenlignet med isotypekontrollen, hvilket bekræftede, at vi opnåede fibroblaster med relativt høj renhed ved hjælp af denne protokol.
De afgørende anbefalede trin til at fremme udvæksten og forbedre fibroblasternes proliferative effektivitet er som følger. Først skal vævsstykkerne skæres i passende størrelser på 3-5 mm2, da mindre vævsstykker er mere tilbøjelige til at flyde under petriskålens bevægelse, og cellerne vokser ikke let ud af større stykker. For det andet bør den første medieændring være efter den tredje dag, da vævsstykkerne tager tid at klæbe til petriskålene. Flytning af petriskålene for tidligt har tendens til at forstyrre vævene og mindske muligheden for fibroblastudvækst. For det tredje bør alle trin i denne protokol udføres forsigtigt; Forkert håndtering vil medføre unødvendig bevægelse af vævsstykkerne og forringe celleudvæksten.
Fibroblaster er en morfologisk og funktionelt heterogen cellepopulation, der kan opdeles i flere subpopulationer. En begrænsning ved denne undersøgelse er, at vi kan opnå generelle fibroblaster fra hele keloidvævet, men ikke de forskellige subpopulationer af fibroblaster. Vi forsøger at finde bedre metoder til at løse dette problem i fremtiden.
Som påvist i vores tidligere undersøgelser af RNA-seq er der mange forskelle mellem keloidfibroblaster og normale fibroblaster. Keloid fibroblaster producerer mere kollagen I og kollagen III. Derudover udtrykker keloidfibroblaster specifikke markører såsom POSTN, blandt andre. Efter passaging opretholder fibroblasterne stadig disse egenskaber, hvilket beviser, at primære fibroblaster også kan udvise nogle funktioner, der findes hos keloidpatienter.
Afslutningsvis giver denne undersøgelse en optimeret metode og giver klare instruktioner til at løse de eksisterende vanskeligheder ved keloid fibroblastekstraktion, såsom mikrobiel kontaminering, blanding med andre celletyper og den lange dyrkningsperiode og for at øge chancen for succes. Det nuværende arbejde giver en enkel og reproducerbar metode til isolering og dyrkning af keloid primære fibroblaster, som vil give en rig ressource til fremtidige undersøgelser og forskning eller kunne fryses i flydende nitrogen til bankning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Der er ingen interessekonflikter at erklære.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (bevillingsnumre 81903189 og 82073418) og Science and Technology Foundation of Guangzhou (bevillingsnummer 202102020025).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | CFT002015 | |
| 15 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | 8076 | |
| 4% polyformaldehyde | Beyotime Biotechnology | P0099 | Cell fixation |
| 50 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | 8081 | Put keloid tissue |
| Alexa Fluor-555 goat anti-rabbit IgG | Abcam | Alexa Fluor 555 | second antibody for immunofluorescence staining assay |
| Anti human CD90 | BioLegend | B301002 | Identify the purity of fibroblasts |
| Antibody diluent | Beyotime Biotechnology | P0262 | |
| Biological safety cabinet | Thermo Scientific | 1300 series A2 | Isolation and culture cells |
| Bovine serum albumin | aladdin | B265993 | Blocking for immunofluorescence staining assay |
| Carbon dioxide incubator | ESCO | CCL-170B-8 | Using for culturing cells |
| Cell cryotubes | Corning | 43513 | Store the cells in low temperature |
| centrifugal machine | Thermo Fisher | ST 16R | Discard supernatant |
| DAPI | Beyotime Biotechnology | C1006 | Stain the cellular nucleus |
| DMSO | MP Biomedicals | 196055 | Using for preserving cells |
| Dulbecco's modified eagle medium | Gibco | C11995500BT | Culture medium solution |
| Fetal bovine serum | BI | 04-001-1A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCelesta | Observing the identity of cells |
| frozen box | Thermo Scientific | 5100-0050 | |
| Inverted microscope | Nikon | ECLIPSE Ts2 | |
| Laser confocal microscope | Nikon | AIR-HD25 | Observing the immunofluorescence staining assay |
| PDGFR-α antibody | CST | 3174T | First antibody for immunofluorescence staining assay |
| Penicillin-streptomycin-Am solution | Solarbio | P1410 | Add in culture medium solution to avoid contamination |
| petri dish | JETBIOFIL | 7556 | Culture fibroblasts |
| Phosphate buffered saline solution | Gibco | C10010500BT | Culture medium solution |
| Rabbit (DAIE) mAB IgG XR (R) Isotuge Control (PE) | Cell Signaling Technology | 5742S | As a control for flow cytometry |
| Round coverslip | Biosharp | 801007 | Cell culture |
| Triton X 100 | Solarbio | T8200 | Punch holes in the cell membrane |
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200072 | Used for passaging cells |
| Vimentin antibody | Abcam | ab8978 | First antibody for immunofluorescence staining assay |
References
- Zhu, Y. Q., et al. Genome-wide analysis of Chinese keloid patients identifies novel causative genes. Annals Of Translational Medicine. 10 (16), 883 (2022).
- Feng, F., et al. Biomechanical regulatory factors and therapeutic targets in keloid fibrosis. Frontiers in Pharmacology. 13, 906212 (2022).
- Cohen, A. J., Nikbakht, N., Uitto, J. Keloid disorder: Genetic basis, gene expression profiles, and immunological modulation of the fibrotic processes in the skin. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , (2022).
- Wang, W., et al. Current advances in the selection of adjuvant radiotherapy regimens for keloid. Frontiers in Medicine. 9, 1043840 (2022).
- Ghadiri, S. J., Kloczko, E., Flohr, C. Topical treatments in the management of keloids and hypertrophic scars: A critically appraised topic. British Journal of Dermatology. 187 (6), 855-856 (2022).
- Neves, L. M. G., Wilgus, T. A., Bayat, A. In vitro, ex vivo, and in vivo approaches for investigation of skin scarring: Human and animal models. Advances in Wound Care. 12 (2), 97-116 (2023).
- Supp, D. M. Animal models for studies of keloid scarring. Advances in Wound Care. 8 (2), 77-89 (2019).
- Künzel, S. R., et al. Ultrasonic-augmented primary adult fibroblast isolation. Journal of Visualized Experiments. (149), e59858 (2019).
- He, Y., et al. An improved explants culture method: Sustainable isolation of keloid fibroblasts with primary characteristics. Journal of Cosmetic Dermatology. 21 (12), 7131-7139 (2022).
- Philippeos, C., et al. Spatial and single-cell transcriptional profiling identifies functionally distinct human dermal fibroblast subpopulations. Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 811-825 (2018).
- Li, L., et al. Hydrogen sulfide suppresses skin fibroblast proliferation via oxidative stress alleviation and necroptosis inhibition. Medicine and Cellular Longevity. 2022, 7434733 (2022).
- Zhou, B. Y., et al. Nintedanib inhibits keloid fibroblast functions by blocking the phosphorylation of multiple kinases and enhancing receptor internalization. Acta Pharmacologica Sinica. 41 (9), 1234-1245 (2020).
- Wang, X. M., Liu, X. M., Wang, Y., Chen, Z. Y. Activating transcription factor 3 (ATF3) regulates cell growth, apoptosis, invasion and collagen synthesis in keloid fibroblast through transforming growth factor beta (TGF-beta)/SMAD signaling pathway. Bioengineered. 12 (1), 117-126 (2021).
- Sato, C., et al. Conditioned medium obtained from amnion-derived mesenchymal stem cell culture prevents activation of keloid fibroblasts. Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (2), 390-398 (2018).
- Li, J., et al. Long-term explant culture: An improved method for consistently harvesting homogeneous populations of keloid fibroblasts. Bioengineered. 13 (1), 1565-1574 (2022).
- Wang, Q., et al. Altered glucose metabolism and cell function in keloid fibroblasts under hypoxia. Redox Biology. 38, 101815 (2021).
- Fan, C., et al. Single-cell transcriptome integration analysis reveals the correlation between mesenchymal stromal cells and fibroblasts. Frontiers in Genetics. 13, 798331 (2022).
- Yao, L., et al. Temporal control of PDGFRα regulates the fibroblast-to-myofibroblast transition in wound healing. Cell Reports. 40 (7), 111192 (2022).
- Domdey, M., et al. Consecutive dosing of UVB irradiation induces loss of ABCB5 expression and activation of EMT and fibrosis proteins in limbal epithelial cells similar to pterygium epithelium. Stem Cell Research. 40, 102936 (2022).
- Lin, Z., et al. Renal tubular epithelial cell necroptosis promotes tubulointerstitial fibrosis in patients with chronic kidney disease. FASEB Journal. 36 (12), e22625 (2022).
- Korosec, A., et al. Lineage identity and location within the dermis determine the function of papillary and reticular fibroblasts in human skin. Journal of Investigative Dermatology. 139 (2), 342-351 (2019).
