Summary
Denne studien beskriver en optimalisert protokoll for å etablere primære fibroblaster fra keloidvev som effektivt og jevnt kan gi rene og levedyktige fibroblaster.
Abstract
Fibroblaster, den viktigste celletypen i keloidvev, spiller en viktig rolle i dannelsen og utviklingen av keloider. Isoleringen og kulturen av primære fibroblaster avledet fra keloidvev er grunnlaget for videre studier av keloiders biologiske funksjon og molekylære mekanismer, samt nye terapeutiske strategier for behandling av dem. Den tradisjonelle metoden for å oppnå primære fibroblaster har begrensninger, for eksempel dårlig cellulær tilstand, blanding med andre typer celler og følsomhet for forurensning. Dette papiret beskriver en optimalisert og lett reproduserbar protokoll som kan redusere forekomsten av mulige problemer ved oppnåelse av fibroblaster. I denne protokollen kan fibroblaster observeres 5 dager etter isolasjon og nå nesten 80% sammenløp etter 10 dager med kultur. Deretter blir fibroblastene passert og verifisert ved hjelp av PDGFRα og vimentinantistoffer for immunfluorescensanalyser og CD90-antistoffer for flowcytometri. Avslutningsvis kan fibroblaster fra keloidvev lett anskaffes gjennom denne protokollen, noe som kan gi en rikelig og stabil kilde til celler i laboratoriet for keloidforskning.
Introduction
Keloid, en fibroproliferativ sykdom, manifesterer seg som kontinuerlig vekst av plakk som ofte invaderer den omkringliggende normale huden uten selvbegrensning og forårsaker ulike grader av kløe, smerte og kosmetiske og psykologiske byrder for pasienter1. Fibroblaster, de primære cellene involvert i keloider, spiller en viktig rolle i dannelsen og utviklingen av denne sykdommen gjennom overdreven spredning, overflødig ekstracellulær matriksproduksjon og uorganiserte kollagener 2,3. Imidlertid er den underliggende patogenesen fortsatt uklar, og en effektiv terapeutisk metode for keloid mangler fortsatt; Derfor er det et presserende behov for videre forskning 4,5.
Siden det ikke er noen ideell dyremodell for keloidforskning in vivo 6,7, kan bygging av en in vitro-modell ved å anskaffe primære fibroblaster fra keloidvev tilby gjennomførbarhet og pålitelighet for keloidforskning 2,6. Primære celler er de som er avledet direkte fra levende vev, og det er generelt anerkjent at disse cellene kan ligne mer på den fysiologiske tilstanden og genetiske bakgrunnen til flere individer sammenlignet med cellelinjer 8,9. Dyrking av primære celler gir et kraftig middel for å studere vekst og metabolisme av celler, så vel som andre cellefenotyper.
For tiden er det to metoder for å anskaffe primære fibroblaster: enzymfordøyelse og eksplantekultur. Imidlertid har flere hindringer blitt identifisert for å oppnå primære fibroblaster, for eksempel risikoen for forurensning av forskjellige bakterier eller sopp, blanding med andre typer celler som ikke lett fjernes, den lange perioden av kultursyklusen, de påfølgende endringene i celleegenskapene sammenlignet med de opprinnelige cellene, og så videre9. Derfor er utvikling av en gjennomførbar og effektiv prosess for å oppnå primære fibroblaster grunnlaget for videre studier og applikasjoner. Denne studien beskriver en optimalisert protokoll for å trekke ut primære fibroblaster fra keloidvev som effektivt og jevnt kan gi rene og levedyktige fibroblaster.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne studien ble godkjent av det institusjonelle gjennomgangsstyret på Dermatology Hospital, Southern Medical University (2020081). Informert pasientsamtykke ble innhentet før vev ble samlet inn fra individene.
1. Forberedelse
MERK: Følgende prosedyrer skal utføres i et sterilt miljø under et biologisk sikkerhetsskap.
- Forbered komplett kulturmedium ved å tilsette 10% føtal bovint serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin-amfotericin B-løsning (PSA) til høyglukose Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM).
- Forbered fosfatbufret saltoppløsning (PBS) med PSA ved å tilsette 1% PSA til 1x PBS. Forbered PBS med FBS ved å legge til 1% FBS til 1x PBS.
- Forbered flere steriliserte sakser, tang og skalpeller ved autoklavering.
2. Innhenting av fjernet vev
- Få vev fra keloidpasienter gjennom kirurgi. Samle de friske keloidvevene i en steril pakkepose eller sterilt sentrifugerør, og overfør dem til et biologisk sikkerhetsskap i laboratoriet så snart som mulig.
MERK: I denne protokollen var størrelsen på det ervervede keloidvevet omtrent ~ 20 x 20 x 10 mm3, og størrelsen kan variere avhengig av operasjonen.
3. Isolasjon
- Ta ut keloidvevet ved hjelp av steril pinsett, og legg det i et 50 ml sterilt sentrifugerør inneholdende 10-25 ml PBS med 1% PSA i 10 minutter. Forbered deretter en 6-brønnsplate, og tilsett 4 ml PBS supplert med 1% PSA til hver brønn. Ta ut vevet ved hjelp av sterilisert pinsett, og vask det to ganger med PBS supplert med 1% PSA. Bruk steril tang, overfør vevet sekvensielt fra en brønn til den neste.
- Fjern fett- ogepidermislagene ved hjelp av kirurgisk saks eller en kirurgisk skalpell, og la dermislaget være uberørt. Trim og dissekere dermislaget i 3-5 mm2 stykker med saks, overfør disse stykkene med steril tang til neste brønn, og vask dem i PBS med 1% PSA-løsning igjen.
4. Kultur
- Legg dermisvevbitene i petriskåler ved hjelp av steriliserte tang; Sørg for at antall brikker er mellom 10 og 30 og avstanden mellom hver del er >5 mm. Legg petriskålene opp ned i en 5% CO2 -inkubator ved 37 ° C i 30-60 min til vevstykkene tørker litt og hold deg til petriskålen. Deretter legger du til DMEM supplert med 10% FBS og 1% PSA, og legg petriskålene forsiktig i en 5% CO2 -inkubator ved 37 ° C.
MERK: Fibroblaster er en morfologisk og funksjonelt heterogen cellepopulasjon. Tatt i betraktning denne kompleksiteten, bør isolasjons- og kulturtrinnene utføres med forsiktighet; Velg de keloid dermale vevsbitene jevnt, og bland disse bitene godt før du legger dem i petriskålen. - Etter 3 dager, erstatt halvparten av supernatanten med et komplett kulturmedium. Endre kulturmediet hver 2-3 dag. Observer fibroblastene under et mikroskop ved 40x forstørrelse hver dag.
MERK: Alle trinnene skal utføres forsiktig. Ikke flytt petriskålen i 2 dager etter isolering, da vevstykkene tar tid å feste seg til petriskålene. - Når fibroblastene som vokser rundt vevstykkene når ca. 90% sammenløp, fjern vevstykkene og kulturmediet. Vask fibroblastene med steril 1x PBS, og tilsett 2 ml steril 1x trypsin-EDTA-oppløsning til platene. Inkuber cellene i omtrent ~3-5 min ved 37 °C i en fuktet 5% CO2 -inkubator. Trykk forsiktig på kulturfatet, og observer det under et mikroskop. Når flertallet av cellene løsner fra platen, tilsett 2 ml komplett medium for å avslutte fordøyelsesprosessen.
- Overfør cellesuspensjonen til et 15 ml sterilt sentrifugerør, og sentrifuger røret ved 300 × g i 3 minutter ved romtemperatur. Kast supernatanten forsiktig, og resuspender cellepelleten i fullstendig medium. Frø fibroblastene i en 9 cm cellekulturskål, og inkuber ved 37 ° C i en fuktet 5% CO2 -inkubator.
5. Vedlikehold og bevaring
- Omtrent 3-4 dager senere, når fibroblastene har vokst til 80% konfluens, gjenta trinn 4,2-4,4, og pass fibroblastene i forholdet 1:3. Bruk de passerte fibroblastene til videre eksperimenter.
MERK: Fibroblastkulturen bør stoppes etter 10 passasjer, fordi cellene kan begynne å vise endrede egenskaper sammenlignet med de opprinnelige cellene. - Kryokonservere de passerte cellene i P1-P3 i flytende nitrogen for videre bruk.
- Gjenta trinn 4.2–4.3. Overfør cellesuspensjonen til et 15 ml sterilt sentrifugerør, og sentrifuger røret i 3 minutter ved 300 × g. Kast supernatanten forsiktig, resuspender cellepelleten i 1 ml cellefrysemedium inneholdende 90 % FBS og 10 % DMSO, og overfør suspensjonen til cellekryorør.
- Flytt cellene inn i en frossen boks, og legg deretter den frosne boksen i en fryser på -80 °C. Etter 1 dag, overfør cellene til flytende nitrogen for langvarig bevaring.
6. Identifisering av fibroblaster ved immunfluorescensfarging
- Plasser runde dekkslips i en 24-brønns plate, og dyrk de passerte fibroblastene i en konsentrasjon på 1 × 104 celler / brønn. Når fibroblastene når 60% sammenløp, fjern kulturmediet. Tilsett 1 ml 4% paraformaldehyd for å fikse fibroblastene i 20 minutter ved romtemperatur, og vask 3x med PBS i 1 min hver gang.
MERK: Telle antall celler ved hjelp av en hemocytometer lysbilde under et mikroskop eller en automatisk celleteller. - Fjern PBS, inkuber med 0,5% Triton X-100 i 20 minutter for permeabilisering av cellemembraner, og vask deretter 3x med PBS i 1 min hver gang. Tilsett PBS med 0,5% bovint serumalbumin, og suge i 30 minutter. Fjern den deretter og tilsett PDGFR-α/vimentin-antistoffet fortynnet i antistofffortynningsmiddel ved 1:1 000. Inkuber over natten ved 4 °C.
- Neste dag, fjern det primære antistoffet, vask cellene 3x med PBS i 3 minutter, og tilsett det sekundære antistoffet Alexa Fluor-555 geit antikanin IgG fortynnet med antistofffortynningsmiddel ved 1:200 for å suge i 1 time.
- Fjern det sekundære antistoffet, og vask cellene 3x med PBS. Ta ut de runde dekslene med tang, legg dem på glassglass og tilsett 50 μL 5 μg / ml 4',6-diamidino-2-fenylindol (DAPI) løsning for å flekke cellekjernene. Hold prøvene i en våt, mørk boks, og observer dem under et laserkonfokalfluorescensmikroskop.
MERK: Legg til en negativ kontrollgruppe uten et primært antistoff, men med et sekundært antistoff for å utelukke uspesifikk farging.
7. Identifisering av fibroblaster ved flowcytometri
- Samle cellepelleten i et 1,5 ml sterilt sentrifugerør, og resuspender med 50 μL PBS inneholdende 1% FBS. Inkuber med anti-CD90 i 30 minutter i mørket, og legg til en anti-IgG isotypekontroll til kontrollgruppen. Deretter tilsettes 200 μL PBS inneholdende 1% FBS, og sentrifuger røret i 10 minutter ved 300 × g ved 4 °C.
- Fjern supernatanten, og tilsett 200 μL PBS som inneholder 1% FBS. Suspender og filtrer suspensjonen gjennom en cellesil (70 mesh). Tilsett en 5 μg/ml stamløsning av DAPI ved 1:100 til filtratet, og oppnå deretter resultatene ved flowcytometri. Sett fremoverspredningen (FSC) som abscissa og sidespredningen (SSC) som ordinaten, og sirkle rundt hovedcellepopulasjonen. Velg cellepopulasjonen, og sett phycoerythrin som abscissa og tellingen som ordinat for analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tidslinjen for protokollen er oppsummert i figur 1A. Noen representative bilder av isolasjonsprosessen er vist i figur 2; epidermis og fettlag ble forsiktig fjernet, og dermislaget ble separert i små fragmenter på 3-4 mm2, som ble inokulert i petriskålene.
Som vist i figur 3A ble det observert flere fibroblastutvekster av vevstykkene under mikroskopet 5 dager etter behandling. Som vist i figur 3B viste fibroblastene høye proliferasjonshastigheter og nådde et høyt konfluensnivå etter 10 dager. Disse fibroblastene hadde langstrakte, spindellignende cellelegemer og ble justert i bunter når de nådde et høyt konfluensnivå. Ved å følge denne protokollen ble fibroblastene passert og utvidet til ønsket mengde innen 2-3 uker.
For å verifisere fibroblastenes identitet og renhet ble det benyttet en immunfluorescensfargeanalyse for å påvise fibroblastspesifikke markører PDGFRα10 og vimentin. Som forventet viser figur 4A og figur 4C at alle fibroblastene var positivt farget av PDGFRα/vimentinantistoffet, med rød immunfluorescens og blå immunfluorescens i cellekjernen. Som vist i figur 4C viste flowcytometrianalysen også CD90-positivitet i nesten alle fibroblastene.
Figur 1: Oversikt over prosedyren for keloid fibroblastisolasjon og dyrkning. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Representative bilder av isolasjon og kultur av fibroblaster fra keloidvev . (A) Vask vevet. (B) Fjern epidermis og fettlag. (C) Dissekere dermis i 3-4 mm3 stykker, og vask med PBS igjen. (D) Legg vevfragmentene i en petriskål. (E) Sett petriskålene opp ned i 5% CO2 -inkubatoren ved 37 ° C i 30-60 minutter for å la vevsbitene tørke litt og hold deg til petriskålen. (F) Tilsett komplett kulturmedium i petriskålen og kultur i denCO2-holdige celleinkubatoren. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Representative bilder av fibroblastutvekster fra keloidvevstykkene. (A) Fibroblastutvekster fra vevsstykkene i ~ 5 dager. (B) Fibroblastene nådde et høyt nivå av samløp i ~ 10 dager. Skalastenger = 200 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Identifisering av høyt rensede fibroblaster ved immunfluorescensfarging og flowcytometri. (A) Immunfluorescensfarging av fibroblaster med anti-PDGFRα. (B) Negativ kontrollgruppe uten primært antistoff for PDGFRα. (C) Immunfluorescensfarging av fibroblastene av anti-vimentin. (D) Negativ kontrollgruppe uten primært antistoff for vimentin. (E) Flowcytometrianalyse av fibroblastene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Innhenting av primære fibroblaster fra keloidvev er et kritisk grunnlag for videre forskning. Hittil har det vært to metoder for å anskaffe primære fibroblaster: enzymfordøyelse og eksplantekultur11,12,13,14. Imidlertid har begge tradisjonelle metoder begrensninger, for eksempel følsomhet for forurensning, blanding med andre typer celler, en lang kulturperiode og en lav suksessrate15,16. Denne studien har beskrevet en optimalisert metode og gitt klare instruksjoner for å løse disse eksisterende utfordringene og øke sjansen for suksess for isolasjon og kultur av keloidfibroblaster.
Muligheten for mikrobiell forurensning er et av de største problemene ved å skaffe primære fibroblaster. Alt utstyr og løsninger må steriliseres, og standard aseptiske teknikker må implementeres under alle trinnene i protokollen. Protokollen inneholder påminnelser om å forbli aseptiske for å redusere risikoen for kontaminering. Det første kritiske trinnet er isolasjonsprosessen; Målet med å suge vevet i PBS supplert med 1% PSA og vaske flere ganger er å fjerne eksisterende mikrober og gjenværende blodflekker. For å forhindre mulig overføring av forurensning, bør en ekstra saks og tang utarbeides; Disse instrumentene kan erstattes av ubrukte i neste operasjon. Videre tilsettes PSA til kulturmediet for å forhindre utvekst av mikrober. Periodisk testing for mykoplasma under isolering og påfølgende kultur av keloid fibroblaster bør inkorporeres i protokollen. Gjennom disse prosessene kan muligheten for mikrobiell forurensning reduseres betydelig.
Den andre utfordringen er å blande seg med andre typer celler, for eksempel keratinocytter. Denne celletypen har også en intens proliferativ evne, noe som gjør det vanskelig å fjerne. Renheten av fibroblaster er svært avhengig av isolasjonsprosessen; Epidermis og fettlag bør fjernes helt for å unngå blanding med andre celler. PDGFR-α er en fibroblastspesifikk markør som uttrykkes i membranen og cytoplasma av fibroblaster10,17,18. CD90 og vimentin er også spesifikke mesenkymale markører som er spesifikt uttrykt i membranene til fibroblaster 19,20,21. Immunfluorescensfargeanalysen i dette arbeidet viste at alle cellene positivt uttrykte PDGFR-α og vimentin. Flowcytometrianalysen viste også direkte CD90-positivitet i nesten alle fibroblastene og større CD90-positivitet sammenlignet med isotypekontrollen, og bekreftet dermed at vi oppnådde fibroblaster med relativt høy renhet ved bruk av denne protokollen.
De avgjørende anbefalte trinnene for å fremme utveksten og forbedre fibroblastens proliferative effektivitet er som følger. Først bør vevstykkene kuttes i passende størrelser på 3-5 mm2, da mindre vevstykker er mer sannsynlig å flyte under bevegelsen av petriskålen, og cellene vil ikke lett vokse ut større biter. For det andre bør den første mediumendringen være etter den tredje dagen, da vevstykkene tar tid å feste seg til petriskålene. Å flytte petriskålene for tidlig har en tendens til å forstyrre vevet og redusere muligheten for fibroblastutvekst. For det tredje bør alle trinnene i denne protokollen utføres forsiktig; Feil håndtering vil føre til unødvendig bevegelse av vevstykkene og svekke celleutveksten.
Fibroblaster er en morfologisk og funksjonelt heterogen cellepopulasjon som kan deles inn i flere underpopulasjoner. En begrensning ved denne studien er at vi kan få generelle fibroblaster fra hele keloidvevet, men ikke de forskjellige subpopulasjonene av fibroblaster. Vi prøver å finne bedre metoder for å løse dette problemet i fremtiden.
Som demonstrert i våre tidligere studier av RNA-seq, er det mange forskjeller mellom keloid fibroblaster og normale fibroblaster. Keloid fibroblaster produserer mer kollagen I og kollagen III. I tillegg uttrykker keloidfibroblaster spesifikke markører som blant annet POSTN. Etter passering opprettholder fibroblastene fortsatt disse egenskapene, noe som viser at primære fibroblaster også kan vise noen funksjoner som finnes hos keloidpasienter.
Avslutningsvis gir denne studien en optimalisert metode og gir klare instruksjoner for å løse eksisterende vanskeligheter med keloidfibroblastekstraksjon, for eksempel mikrobiell forurensning, blanding med andre celletyper og den lange kulturperioden, og for å øke sjansen for suksess. Det nåværende arbeidet gir en enkel og reproduserbar metode for isolering og dyrking av keloid primære fibroblaster, som vil gi en rik ressurs for fremtidige studier og forskning eller kan fryses i flytende nitrogen for bankvirksomhet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Det er ingen interessekonflikter å oppgi.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (tilskuddsnummer 81903189 og 82073418) og Science and Technology Foundation of Guangzhou (tilskuddsnummer 202102020025).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | CFT002015 | |
| 15 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | 8076 | |
| 4% polyformaldehyde | Beyotime Biotechnology | P0099 | Cell fixation |
| 50 mL sterile centrifuge tube | JETBIOFIL | 8081 | Put keloid tissue |
| Alexa Fluor-555 goat anti-rabbit IgG | Abcam | Alexa Fluor 555 | second antibody for immunofluorescence staining assay |
| Anti human CD90 | BioLegend | B301002 | Identify the purity of fibroblasts |
| Antibody diluent | Beyotime Biotechnology | P0262 | |
| Biological safety cabinet | Thermo Scientific | 1300 series A2 | Isolation and culture cells |
| Bovine serum albumin | aladdin | B265993 | Blocking for immunofluorescence staining assay |
| Carbon dioxide incubator | ESCO | CCL-170B-8 | Using for culturing cells |
| Cell cryotubes | Corning | 43513 | Store the cells in low temperature |
| centrifugal machine | Thermo Fisher | ST 16R | Discard supernatant |
| DAPI | Beyotime Biotechnology | C1006 | Stain the cellular nucleus |
| DMSO | MP Biomedicals | 196055 | Using for preserving cells |
| Dulbecco's modified eagle medium | Gibco | C11995500BT | Culture medium solution |
| Fetal bovine serum | BI | 04-001-1A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCelesta | Observing the identity of cells |
| frozen box | Thermo Scientific | 5100-0050 | |
| Inverted microscope | Nikon | ECLIPSE Ts2 | |
| Laser confocal microscope | Nikon | AIR-HD25 | Observing the immunofluorescence staining assay |
| PDGFR-α antibody | CST | 3174T | First antibody for immunofluorescence staining assay |
| Penicillin-streptomycin-Am solution | Solarbio | P1410 | Add in culture medium solution to avoid contamination |
| petri dish | JETBIOFIL | 7556 | Culture fibroblasts |
| Phosphate buffered saline solution | Gibco | C10010500BT | Culture medium solution |
| Rabbit (DAIE) mAB IgG XR (R) Isotuge Control (PE) | Cell Signaling Technology | 5742S | As a control for flow cytometry |
| Round coverslip | Biosharp | 801007 | Cell culture |
| Triton X 100 | Solarbio | T8200 | Punch holes in the cell membrane |
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200072 | Used for passaging cells |
| Vimentin antibody | Abcam | ab8978 | First antibody for immunofluorescence staining assay |
References
- Zhu, Y. Q., et al. Genome-wide analysis of Chinese keloid patients identifies novel causative genes. Annals Of Translational Medicine. 10 (16), 883 (2022).
- Feng, F., et al. Biomechanical regulatory factors and therapeutic targets in keloid fibrosis. Frontiers in Pharmacology. 13, 906212 (2022).
- Cohen, A. J., Nikbakht, N., Uitto, J. Keloid disorder: Genetic basis, gene expression profiles, and immunological modulation of the fibrotic processes in the skin. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , (2022).
- Wang, W., et al. Current advances in the selection of adjuvant radiotherapy regimens for keloid. Frontiers in Medicine. 9, 1043840 (2022).
- Ghadiri, S. J., Kloczko, E., Flohr, C. Topical treatments in the management of keloids and hypertrophic scars: A critically appraised topic. British Journal of Dermatology. 187 (6), 855-856 (2022).
- Neves, L. M. G., Wilgus, T. A., Bayat, A. In vitro, ex vivo, and in vivo approaches for investigation of skin scarring: Human and animal models. Advances in Wound Care. 12 (2), 97-116 (2023).
- Supp, D. M. Animal models for studies of keloid scarring. Advances in Wound Care. 8 (2), 77-89 (2019).
- Künzel, S. R., et al. Ultrasonic-augmented primary adult fibroblast isolation. Journal of Visualized Experiments. (149), e59858 (2019).
- He, Y., et al. An improved explants culture method: Sustainable isolation of keloid fibroblasts with primary characteristics. Journal of Cosmetic Dermatology. 21 (12), 7131-7139 (2022).
- Philippeos, C., et al. Spatial and single-cell transcriptional profiling identifies functionally distinct human dermal fibroblast subpopulations. Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 811-825 (2018).
- Li, L., et al. Hydrogen sulfide suppresses skin fibroblast proliferation via oxidative stress alleviation and necroptosis inhibition. Medicine and Cellular Longevity. 2022, 7434733 (2022).
- Zhou, B. Y., et al. Nintedanib inhibits keloid fibroblast functions by blocking the phosphorylation of multiple kinases and enhancing receptor internalization. Acta Pharmacologica Sinica. 41 (9), 1234-1245 (2020).
- Wang, X. M., Liu, X. M., Wang, Y., Chen, Z. Y. Activating transcription factor 3 (ATF3) regulates cell growth, apoptosis, invasion and collagen synthesis in keloid fibroblast through transforming growth factor beta (TGF-beta)/SMAD signaling pathway. Bioengineered. 12 (1), 117-126 (2021).
- Sato, C., et al. Conditioned medium obtained from amnion-derived mesenchymal stem cell culture prevents activation of keloid fibroblasts. Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (2), 390-398 (2018).
- Li, J., et al. Long-term explant culture: An improved method for consistently harvesting homogeneous populations of keloid fibroblasts. Bioengineered. 13 (1), 1565-1574 (2022).
- Wang, Q., et al. Altered glucose metabolism and cell function in keloid fibroblasts under hypoxia. Redox Biology. 38, 101815 (2021).
- Fan, C., et al. Single-cell transcriptome integration analysis reveals the correlation between mesenchymal stromal cells and fibroblasts. Frontiers in Genetics. 13, 798331 (2022).
- Yao, L., et al. Temporal control of PDGFRα regulates the fibroblast-to-myofibroblast transition in wound healing. Cell Reports. 40 (7), 111192 (2022).
- Domdey, M., et al. Consecutive dosing of UVB irradiation induces loss of ABCB5 expression and activation of EMT and fibrosis proteins in limbal epithelial cells similar to pterygium epithelium. Stem Cell Research. 40, 102936 (2022).
- Lin, Z., et al. Renal tubular epithelial cell necroptosis promotes tubulointerstitial fibrosis in patients with chronic kidney disease. FASEB Journal. 36 (12), e22625 (2022).
- Korosec, A., et al. Lineage identity and location within the dermis determine the function of papillary and reticular fibroblasts in human skin. Journal of Investigative Dermatology. 139 (2), 342-351 (2019).
