Summary
Presentert her er en metode for å berike og analysere de flyktige komponentene i teekstrakter ved bruk av løsningsmiddelassistert smakfordampning og løsningsmiddelekstraksjon etterfulgt av gasskromatografi-massespektrometri, som kan brukes på alle typer teprøver.
Abstract
Tearoma er en viktig faktor i tekvaliteten, men det er utfordrende å analysere på grunn av kompleksiteten, den lave konsentrasjonen, mangfoldet og labiliteten til de flyktige komponentene i teekstrakt. Denne studien presenterer en metode for å oppnå og analysere de flyktige komponentene i teekstrakt med luktkonservering ved bruk av løsningsmiddelassistert smakfordampning (SAFE) og løsningsmiddelekstraksjon etterfulgt av gasskromatografi-massespektrometri (GC-MS). SAFE er en høyvakuumdestillasjonsteknikk som kan isolere flyktige forbindelser fra komplekse matmatriser uten ikke-flyktige forstyrrelser. En komplett trinnvis prosedyre for tearomaanalyse presenteres i denne artikkelen, inkludert teinfusjonspreparatet, løsningsmiddelekstraksjon, SAFE-destillasjon, ekstraktkonsentrasjon og analyse av GC-MS. Denne prosedyren ble brukt på to teprøver (grønn te og svart te), og kvalitative så vel som kvantitative resultater på den flyktige sammensetningen av teprøvene ble oppnådd. Denne metoden kan ikke bare brukes til aromaanalyse av ulike typer teprøver, men også for molekylære sensoriske studier på dem.
Introduction
Te er en foretrukket drikk for mange mennesker over hele verden 1,2. Teens aroma er et kvalitetskriterium samt en prisbestemmende faktor for teblader 3,4. Dermed er analysen av aromasammensetningen og innholdet av te av stor betydning for molekylære sensoriske studier og kvalitetskontroll av te. Som et resultat har aromasammensetningsanalyse vært et viktig tema i teforskning de siste årene 5,6,7.
Innholdet av aromakomponenter i te er svært lavt, da de vanligvis bare står for 0,01% -0,05% av tørrvekten til tebladene8. Videre forstyrrer den store mengden ikke-flyktige komponenter i prøvematrisen signifikant analyse ved gasskromatografi 9,10. Derfor er en prøveprepareringsprosedyre avgjørende for å isolere de flyktige forbindelsene i te. Hovedhensynet for isolasjons- og anrikningsmetoden er å minimere matriseinterferensen og samtidig maksimere bevaringen av prøvens opprinnelige luktprofil.
Løsemiddelassistert smaksfordampning (SAFE), opprinnelig utviklet av Engel, Bahr og Schieberle, er en forbedret høyvakuumdestillasjonsteknikk som brukes til å isolere flyktige forbindelser fra komplekse matmatriser11,12. En kompakt glassenhet koblet til en høyvakuumpumpe (under et typisk driftstrykk på 5 x 10-3 Pa) kan effektivt samle flyktige forbindelser fra løsningsmiddelekstrakter, oljeholdige matvarer og vandige prøver.
Denne artikkelen beskrev en metode som kombinerer SAFE-teknikken med løsningsmiddelekstraksjon for å isolere flyktige stoffer fra en svart teinfusjon, etterfulgt av analyse ved bruk av GC-MS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Forberedelse av intern standard og teinfusjon
- Stamløsning: Løs opp 10,0 mg paraxylen-d10 (se materialfortegnelse) i 10,0 ml vannfri etanol for å fremstille en 1000 ppm stamløsning av den interne standarden.
- Arbeidsløsning: Fortynn 1 ml av stamløsningen (trinn 1,1) til 100 ml med rent vann for å forberede en 10 ppm arbeidsløsning av den interne standarden.
MERK: Arbeidsløsningen må utarbeides samme dag som analysen. - Plasser 3 g teblader (både for grønn te og svart te, se materialfortegnelse) i en Erlenmeyer-kolbe, og tilsett 150 ml kokende vann. Dekk kolben med en glasspropp.
- Etter 5 minutter, filtrer raskt ut teinfusjonen gjennom en 300-maske-sil.
- Vask de brukte tebladene to ganger med 30 ml vann, og kombiner vaskeløsningen med teinfusjonen.
- Avkjøl teinfusjonen til romtemperatur raskt i et isvannsbad.
- Tilsett 1,00 ml arbeidsløsning (trinn 1,2) i teinfusjonen, og bland dem godt.
2. Destillasjon av teinfusjonen ved SAFE og væske-væske-ekstraksjon av destillatet
- Forbered SAFE-monteringen ved å følge trinnene nedenfor.
- Monter SAFE-enheten (figur 1), og koble til destillasjonsflasken nederst til venstre (figur 1[3]) og oppsamlingsflasken nederst til høyre (figur 1[4]). Koble til det sirkulerende vannrøret på baksiden av SAFE-glassenheten. Monter kaldfellen (figur 1 [5]), og koble røret til vakuumpumpen (se materialfortegnelse) øverst til høyre i glassenheten.
MERK: Kontroller tilkoblingen til det sirkulerende vannrøret; Forsikre deg om at innløpet kommer inn i toppen og utløpet kommer ut fra bunnen. Bruk avionisert vann til sirkulasjonen for å forhindre at vekten blokkerer det hvite røret i SAFE-monteringen, noe som vil føre til dårlig sirkulasjon av det sirkulerende vannet og til slutt eksplosjon av SAFE-enheten. Destillasjonsbunnen (figur 1[3]) kan røres med en omrøringsstang for å lette fordampningen av prøven. - Sett temperaturen på det sirkulerende vannet til 50 °C og temperaturen på vannbadet for prøvekolben til 40 °C. Lukk vakuumventilen (figur 1[2]).
- Monter SAFE-enheten (figur 1), og koble til destillasjonsflasken nederst til venstre (figur 1[3]) og oppsamlingsflasken nederst til høyre (figur 1[4]). Koble til det sirkulerende vannrøret på baksiden av SAFE-glassenheten. Monter kaldfellen (figur 1 [5]), og koble røret til vakuumpumpen (se materialfortegnelse) øverst til høyre i glassenheten.
- Utfør vakuumpumpens drift.
- Slå på vakuumpumpen.
- Øk hastigheten gradvis til maksimal hastighet på 100%.
MERK: Hvis hastigheten ikke når 100%, må du kontrollere om systemet er lufttett og om det er løsemiddelrester inne i systemet. - Etter å ha nådd et høyt vakuum (helst 10-3 Pa)
MERK: Vakuumet vil bli bedre når flytende nitrogen tilsettes kuldefellen.
- Utfør prøvedestillasjon.
- Start vannsirkulasjonen.
- Tilsett flytende nitrogen i kuldefellen for å dekke utsiden av oppsamlingsflasken.
- Hell teinfusjonen i prøvetrakten øverst til venstre (figur 1[1]), og dekk den deretter med en glasspropp.
- Introduser prøven i destillasjonskolben dråpevis. Kontroller fallhastigheten i prøven slik at vakuumet holdes i riktig område på rundt 10–3 Pa.
MERK: Tilsett flytende nitrogen under prosessen for å sikre at riktig oppsamlingsflaske alltid er nedsenket i flytende nitrogen. Prøv å unngå kondensatdannelse i kuldefellen.
- Slå av vakuumpumpen etter at destillasjonen er fullført.
- Trykk på strømbryteren . Når "STOPP" blinker, trykker du på Enter-tasten for å bekrefte.
- Trekk ut strømledningen når hastigheten på molekylærpumpen synker til "0".
MERK: Start på nytt bare når hastigheten synker til "0".
- Gjenopprett systemet til atmosfærisk trykk.
- Fjern slipepluggen over prøvetakingsflasken.
- Skru av knappen på vakuumventilen sakte for å gjenopprette systemet til atmosfærisk trykk.
- Ta ned oppsamlingsflasken med prøven.
- Fjern flytende nitrogen utenfor oppsamlingsflasken etter at systemet er gjenopprettet til atmosfærisk trykk.
- Skru av oppsamlingsflasken sakte. Ta forsiktig ned oppsamlingsflasken med prøven.
- Lukk det sirkulerende vannet.
- Utfør væske-væske-ekstraksjon av SAFE-destillatet.
- La SAFE-destillatet i flasken varmes opp til romtemperatur.
- Trekk ut SAFE-destillatet tre ganger med 50 ml diklormetan (se materialfortegnelse).
- Kombiner diklormetanlagene. Tørk ekstraktet med vannfritt natriumsulfat (se materialfortegnelsen).
MERK: Det vannfrie natriumsulfatet i løsningsmidlet anses som tørt nok når det ikke lenger er sementert og kan strømme fritt. - Konsentrer ekstraktet til ca. 2 ml ved hjelp av en mild nitrogenstrøm.
- Overfør til et prøvehetteglass på 1-2 ml, og konsentrer videre til 200 μL ved hjelp av en mild nitrogenstrøm.
3. GC-MS analyse og databehandling
- Analyser aromakonsentratene fremstilt i protokollseksjon 2 ved hjelp av et GC-MS-system (figur 2) utstyrt med smeltede kapillærkolonner av silika (se materialfortegnelsen).
- Bruk helium som bæregass med lineær hastighet på 40 cm/s.
- Injiser 3 mikrol av konsentratet i delingsfri injeksjonsmodus.
- Still inn GC-ovnens temperaturprogram: (1) hold ved 40 °C i 5 minutter; (2) øke til 200 °C ved 5 °C/min; (3) øke til 280 °C ved 10 °C/min; (4) hold ved 280 °C i 10 min.
- Bruk masseselektiv detektoren i positiv EI-modus13 med et masseskanningsområde fra 30 m / z til 350 m / z ved 70 eV.
- Deconvolute GC-MS-dataene ved hjelp av Automated Mass Spectral Deconvolution and Identification System (AMDIS, se materialfortegnelsen).
- Match og kvalifiser dataene etter dekonvolusjon ved hjelp av NIST (National Institute of Standards and Technology) 17 massespektrometer søkeprogram3.
- Beregn retensjonsindeksen for forbindelsene14 basert på resultatet av et sett med n-alkaner (C5-C25, se materialtabellen) under de samme GC-betingelsene.
- Identifiser GC-toppene ved hjelp av NIST-massespektrometribiblioteket og retensjonsindeksdatabasen basert på samtidig matching av masse- og retensjonsindeksene.
- Beregn konsentrasjonen av hver flyktige komponent i SAFE-prøven i forhold til den interne standarden ved bruk av toppområdet TIC (total ionekromatografi).
- Gjenta analysen tre ganger, med utgangspunkt i teinfusjonspreparatet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den analytiske prosedyren beskrevet ovenfor er illustrert i denne delen ved hjelp av eksemplet på aromaanalysen av svart te og grønn teprøver.
Et representativt GC-MS-kromatogram er vist i figur 3. Figur 3A viser et sett med n-alkaner, og figur 3B viser profilen til en intern standard. Evalueringsresultatene for ekstraktene fra grønn te og svart te prøver er vist i henholdsvis figur 3C og figur 3D. Ved å analysere de interne standardene kan man detektere en definitiv topp med stabil grunnlinje (figur 3B). GC-kromatogrammet viser de komplette GC-profilene hentet fra infusjonsekstrakter av grønn te og svart te etter total iontelling.
Totalt 104 aromaforbindelser ble identifisert i grønn te og svart te-prøver ved massespektrometrimatching kombinert med retensjonsindeksen. Den relative kvantifiseringen ble beregnet av topparealet av forbindelsen i forhold til den interne standarden. Varmekartet, tegnet i henhold til de kvalitative og kvantitative resultatene, viser aromaforbindelsens innhold i forhold til den interne standarden for grønn te og svart te-prøver (figur 4).
Figur 1: Skjematisk diagram over SAFE-systemet. (1) Prøveflasken for prøvesamlingen. (2) Vakuumventilen; Systemet må holdes lukket før prøvene legges til, og dråpestrømmen i prøven bør justeres på riktig måte. (3) Destillasjonsflasken for prøvedestillasjonen. (4) Oppsamlingsflasken for innsamling av destillert prøve. (5) Kuldefellen for gjenvinning av prøver som ikke samles inn av oppsamlingsflasken, og for å forhindre at løsningsmidlet kommer inn i vakuumpumpen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Skjematisk diagram over GC-MSD-systemet. GC / MS-systemet er utstyrt med (1) en multi-modus injeksjonsport, (2) en strømningskontrollmodul (PCM) som styrer heliumbærerstrømmen, (3) en 60 m x 0,25 m x 0,25 m 5 ms kapillærkolonne og (4) en GC-kolonneovn. Teekstraktene i den injiserte prøven separeres i GC-kolonnen, gjennom hvilken bærergassen strømmer og ovntemperaturen øker. Komponentene ioniseres av en EI-ionkilde og analyseres deretter i en masseanalysator. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Typisk totalionekromatogram fra en vellykket GC-MS-analyse . (A) Kromatogrammet til n-alkanene. Alle n-alkantoppene er tilordnet det tilsvarende karbonnummeret. (B) Kromatogrammet til den interne standarden (paraxylen-d10). (C) Representativ aromaprofil av infusjonen av grønn te. (D) Representativ aromaprofil av svart teinfusjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Varmekart over 104 aromaforbindelser identifisert i prøvene med svart te (BT) og grønn te (GT). Tallet ved siden av fargenotatet på høyre side av varmekartet indikerer innholdet i forbindelsen (i forhold til den interne standarden). Fargedybden indikerer nivået på materieinnholdet; Jo dypere fargen er, desto høyere er det relative innholdet. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne artikkelen beskriver en effektiv metode for å analysere flyktige forbindelser i teinfusjoner ved hjelp av SAFE og GC-MS-analyse.
Teinfusjoner har en kompleks matrise med høyt innhold av ikke-flyktige komponenter. Flere metoder har blitt beskrevet i litteraturen for å isolere de flyktige komponentene fra teinfusjoner. En vanlig metode er samtidig destillasjonsekstraksjon (SDE)15,16. Det er imidlertid ikke egnet for analyse av tearomaer fordi tebladene må kokes med vann for hele destillasjons- / ekstraksjonsprosessen, noe som resulterer i at tekomponentene gjennomgår en kjemisk reaksjon og dermed gir en luktprofil som er svært forskjellig fra den opprinnelige prøven17. SAFE destillerer teinfusjonen ved lav temperatur under høyt vakuum, og minimerer dermed endringer i analyttene og lar den opprinnelige aromasammensetningen bevares.
Fastfasemikroekstraksjon (SPME) er en annen metode som vanligvis brukes til aromaanalyse av te18,19. Dens fordeler ligger i den enkle og løsningsmiddelfrie prosedyren. Selektiviteten til fiberadsorpsjonen av aromakomponentene gjør det imidlertid vanskelig å oppnå en kvantitativ profil som reflekterer prøvens aromaegenskaper, noe som begrenser anvendelsen av denne metoden for tearomaanalyse20.
Høyvakuumoverføringsteknikken (HVT) ble utviklet for å redusere sjansen for at artefakter dannes i aromaanalyser21. Imidlertid har HVT et lavt ekstraksjonsutbytte for stoffer med høyt kokepunkt og sterk polaritet, noe som begrenser bruksområdet.
I motsetning til med de ovennevnte tilpassede metodene, er SAFE-destillatet av en teinfusjon fri for ikke-flyktige komponenter22,23,24. Aromaen i destillatet kan kvantitativt ekstraheres ved hjelp av organiske løsningsmidler, noe som betyr at et ekstrakt med en luktprofil nær den opprinnelige prøven kan oppnås. Engel et al.11 destillerte blandinger av n-alkaner ved bruk av HVT eller SAFE destillasjon for å kontrollere effektiviteten. Destillatutbyttet ved bruk av SAFE-systemet ble funnet å være betydelig høyere enn HVT for hver alkan. I tillegg kan alkaner med kokepunkt under 285 °C gjenvinnes fullstendig av SAFE.
Det må legges stor vekt på de eksperimentelle detaljene for videre vellykkede analyser. (1) Vakuumtrykket under SAFE-destillasjonen kan påvirke gjenvinningen av de flyktige komponentene og må opprettholdes på et høyt nivå, for eksempel ved å bremse prøvetilsetningen. (2) Det er nødvendig å sikre at oppsamlingsflasken senkes ned i flytende nitrogen før systemet går tilbake til atmosfærisk trykk for å unngå at løsemiddelflyktige stoffer kondenseres av kuldefellen øverst til høyre eller kommer inn i vakuumpumpen. (3) Man bør sørge for at sirkulerende vann er slått på først og slått av sist. Det sirkulerende vannet skal bare slås av etter at det flytende nitrogenet er fjernet. Ellers fryser den enheten. (4) Vannbadet bør røres med en magnet for å hjelpe varmeoverføringen.
I denne studien ble SAFE-destillasjon utført før løsningsmiddelekstraksjonen. En reversert prosedyre er også mulig, og dette vil være spesielt fordelaktig hvis et stort volum teinfusjon ekstraheres først og det oppnådde ekstraktet deretter destilleres av SAFE. Utfordringen med infusjonsekstraksjon ved bruk av et organisk løsningsmiddel er mulig dannelse av en emulsjon. I dette tilfellet er det nødvendig med ytterligere trinn for å gjenopprette det organiske laget, for eksempel sentrifugering eller valg av forskjellige løsningsmidler. Etter forsøket må SAFE-glassenheten rengjøres. Etanol eller aceton kan brukes som rengjøringsløsningsmiddel. Delene skal tørkes før bruk.
Oppsummert foreslår denne protokollen en metode for å oppnå et aromakonsentrat med en luktprofil nær den opprinnelige teprøven ved bruk av SAFE-destillasjon etterfulgt av løsningsmiddelekstraksjon. Denne metoden kan brukes på alle typer teprøver, inkludert for eksempel øyeblikkelig tepulver og tekonsentrater, og er godt egnet for molekylære sensoriske studier av te.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Denne forskningen ble støttet av National Natural Science Foundation of China (32002094, 32102444), China Agriculture Research System of MOF og MARA (CARS-19), og innovasjonsprosjektet for Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS-ASTIP-TRI).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alkane mix (C10-C25) | ANPEL | CDAA-M-690035 | |
| Alkane mix (C5-C10) | ANPEL | CDAA-M-690037 | |
| AMDIS | National Institute of Standards and Technology | version 2.72 | Gaithersburg, MD |
| Analytical balance | OHAUS | EX125DH | |
| Anhydrous ethanol | Sinopharm | ||
| Anhydrous sodium sulfate | aladdin | ||
| Black tea | Qianhe Tea | Huangshan, Anhui province, China | |
| Concentrator | Biotage | TurboVap | |
| Data processor | Agilent | MassHunter | |
| Dichloromethane | TEDIA | ||
| GC | Agilent | 7890B | |
| GC column | Agilent | DB-5MS | |
| Green tea | Qianhe Tea | Huangshan, Anhui province, China | |
| MS | Agilent | 5977B | |
| p-Xylene-d10 | Sigma-Aldrich | ||
| SAFE | Glasbläserei Bahr | ||
| Ultra-pure deionized water | Milipore | Milli-Q | |
| Vacuum pump | Edwards | T-Station 85H |
References
- Liang, S., et al. Processing technologies for manufacturing tea beverages: From traditional to advanced hybrid processes. Trends in Food Science & Technology. 118, 431-446 (2021).
- Guo, X. Y., Ho, C. T., Schwab, W., Wan, X. C. Aroma profiles of green tea made with fresh tea leaves plucked in summer). Food Chemistry. 363, 130328 (2021).
- Feng, Z. H., Li, M., Li, Y. F., Wan, X. C., Yang, X. G. Characterization of the orchid-like aroma contributors in selected premium tea leaves. Food Research International. 129, 108841 (2020).
- Hong, X., et al. Characterization of the key aroma compounds in different aroma types of Chinese yellow tea. Foods. 12 (1), 27 (2023).
- Flaig, M., Qi, S. C., Wei, G., Yang, X., Schieberle, P. Characterisation of the key aroma compounds in aLongjinggreen tea infusion (Camellia sinensis) by the sensomics approach and their quantitative changes during processing of the tea leaves. European Food Research and Technology. 246 (12), 2411-2425 (2020).
- Feng, Z., et al. Tea aroma formation from six model manufacturing processes. Food Chemistry. 285, 347-354 (2019).
- Wang, J. -Q., et al. Effects of baking treatment on the sensory quality and physicochemical properties of green tea with different processing methods. Food Chemistry. 380, 132217 (2022).
- Zhai, X., Zhang, L., Granvogl, M., Ho, C. -T., Wan, X. Flavor of tea (Camellia sinensis): A review on odorants and analytical techniques. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. 21 (5), 3867-3909 (2022).
- Chaturvedula, V. S. P., Prakash, I. The aroma, taste, color and bioactive constituents of tea. Journal of Medicinal Plants Research. 5 (11), 2110-2124 (2011).
- Ridgway, K., Lalljie, S. P. D., Smith, R. M. Sample preparation techniques for the determination of trace residues and contaminants in foods. Journal of Chromatography A. 1153 (1-2), 36-53 (2007).
- Engel, W., Bahr, W., Schieberle, P. Solvent assisted flavour evaporation - A new and versatile technique for the careful and direct isolation of aroma compounds from complex food matrices. European Food Research and Technology. 209 (3-4), 237-241 (1999).
- Wang, B., et al. Characterization of aroma compounds of Pu-erh ripen tea using solvent assisted flavor evaporation coupled with gas chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-olfactometry. Food Science and Human Wellness. 11 (3), 618-626 (2022).
- Zou, C., et al. Zijuan tea- based kombucha: Physicochemical, sensorial, and antioxidant profile. Food Chemistry. 363, 130322 (2021).
- Vandendool, H., Kratz, P. D. A generalization of the retention index system including linear temperature programmed gas-liquid partition chromatography. Journal of Chromatography. 11, 463-471 (1963).
- Khvalbota, L., Virba, M., Furdikova, K., Spanik, I. Simultaneous distillation-solvent extraction gas chromatography-mass spectrometry analysis of Tokaj Muscat Yellow wines. Separation Science Plus. 5 (8), 393-406 (2022).
- Ayalew, Y., et al. Volatile organic compounds of anchote tuber and leaf extracted using simultaneous steam distillation and solvent extraction. International Journal of Food Science. 2022, 3265488 (2022).
- Zhu, M., Li, E., He, H. Determination of volatile chemical constitutes in tea by simultaneous distillation extraction, vacuum hydrodistillation and thermal desorption. Chromatographia. 68 (7-8), 603-610 (2008).
- Lau, H., et al. Characterising volatiles in tea (Camellia sinensis). Part I: Comparison of headspace-solid phase microextraction and solvent assisted flavour evaporation. Lwt-Food Science and Technology. 94, 178-189 (2018).
- Li, Z. W., Wang, J. H. Analysis of volatile aroma compounds from five types of Fenghuang Dancong tea using headspace-solid phase microextraction combined with GC-MS and GC-olfactometry. International Food Research Journal. 28 (3), 612-626 (2021).
- Dong, F., et al. Herbivore-induced volatiles from tea (Camellia sinensis) plants and their involvement in intraplant communication and changes in endogenous nonvolatile metabolites. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (24), 13131-13135 (2011).
- Acena, L., Vera, L., Guasch, J., Busto, O., Mestres, M. Comparative study of two extraction techniques to obtain representative aroma extracts for being analysed by gas chromatography-olfactometry: Application to roasted pistachio aroma. Journal of Chromatography A. 1217 (49), 7781-7787 (2010).
- Kumazawa, K., Wada, Y., Masuda, H. Characterization of epoxydecenal isomers as potent odorants in black tea (Dimbula) infusion. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (13), 4795-4801 (2006).
- Wu, H. T., et al. Effects of three different withering treatments on the aroma of white tea. Foods. 11 (16), 2502 (2022).
- Wang, J., et al. Decoding the specific roasty aroma Wuyi rock tea (Camellia sinensis: Dahongpao) by the sensomics approach. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 70 (34), 10571-10583 (2022).
