Un dispositivo de microfluidos con los patrones de Surco para el estudio del comportamiento celular

A. microfabricación del dispositivo de microfluidos

1. De 4 pulgadas de obleas de Si se trata con plasma de oxígeno reactivo (5 min a 30 W, Harrick Científico, NY).
2. Fotosensible negativa (SU-8 2015, Microchem, MA) es spin-revestido a 900 rpm durante 1 minuto en una oblea de silicio.
3. La oblea es suave al horno a 95 ° C durante 6 minutos en una placa calefactora y se expone a luz ultravioleta (200W) durante 4 minutos a través de una película que contiene la máscara de microcanales.
4. La oblea es posterior al horno a 95 ° C durante 6 minutos y se desarrolla con SU-8 desarrollador fotosensible.
5. La oblea fotosensible con dibujos que contienen microcanales se coloca en un plato de Petri.
6. Moldes de poli (dimetilsiloxano) (PDMS) (Sylgard 184) son fabricados por la mezcla de elastómero de silicona y agente de curado (10:1).
7. La mezcla de PDMS se vierte sobre el molde maestro Si y se coloca en un desecador de vacío para eliminar las burbujas.
8. PDMS se cura a 70 ° C durante 1 a 2 horas.
9. Moldes PDMS luego se desprendió del molde maestro Si.

B. Montaje del dispositivo

1. 40 micras de espesor superior canales fluidos y 40 micras de espesor inferior microgrooved canales (25, 50, 75 y 100 μ m de ancho) se obtienen a partir de dos moldes diferentes master Si.
2. Canal de entrada y salida del dispositivo de fluidos se perforan.
3. Canales fluidos y canales de microsurco están irreversiblemente unidos por el plasma de oxígeno reactivo (5 min a 30 W, Harrick Científico, NY).
4. Matriz extracelular (MEC) (es decir, la fibronectina) está recubierto en el interior del dispositivo de microfluidos durante 1 hora en la incubadora (37 ° C).

C. siembra de células y la instalación experimental

1. NIH-3T3 fibroblastos de ratón se cultivaron en un frasco de cultivo de tejidos utilizando los medios de comunicación Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) que contiene 10% de suero fetal bovino (FBS).
2. Las células se trypsinized y disociado.
3. Las células disociadas se cargan en los canales de microsurco en la densidad celular de 3 × 10 ⁶ células / ml (Figura 1).
   
   
   Figura 1
   
   
4. 2 ml de medio, 100 mM H ₂ O _2, y el ensayo de la apoptosis (20 l Annexin V y yoduro de propidio 40 l, Invitrogen, CA) se infunden en un canal utilizando una bomba de jeringa (1 l / min).
5. Las células son monitoreados en tiempo real mediante el uso de un microscopio invertido (Nikon TE 2000).

Las células fueron inmovilizados y modelado en sustratos microgrooved en un dispositivo de microfluidos. El proceso de la apoptosis de las células expuestas al peróxido de hidrógeno se observó en tiempo real y se analizaron mediante el uso de anexina V y yoduro de propidio. Así, este dispositivo de microfluidos que contienen canales de microsurco podría ser útil para la detección de drogas de alto rendimiento.