Un dispositif microfluidique avec des modèles Groove pour étudier le comportement cellulaire

Nous décrivons un protocole pour la fabrication de dispositifs microfluidiques qui peut permettre la capture cellulaire et de culture. Dans cette approche microstructures motifs tels que des rainures dans les canaux microfluidiques sont utilisés pour créer les régions à faible contrainte de cisaillement dans lequel la cellule peut quai.

Je m’appelle Jiang, je suis un boursier de Harvard et du MIT, de la santé, des sciences et de la technologie. Donc, mon expertise dans ce laboratoire, je peux simplement générer un nouveau dispositif de prédiction pour étudier le comportement cellulaire. Je peux générer un dispositif de gradient très nouveau ainsi que je peux également générer une intégration à mon dispositif de prédiction.

Le dispositif TC peut manipuler avec précision l’interaction cellulaire et l’interaction cellulaire ainsi que le contact du facteur solaire de la cellule. Ainsi, en utilisant le système TC, je peux étudier pour comprendre la biologie cellulaire de base ainsi que pour appliquer une partie de la biologie du développement ainsi que de la bio-ingénierie des cellules souches. Je m’appelle Amir Manchi et je suis professeur étudiant de premier cycle au laboratoire Haan à Harvard, division des sciences et de la technologie de la santé du MIT.

Et j’ai travaillé sur des dispositifs microfluidiques et nous avons essayé, comme preuve de principe, de montrer que les dispositifs microfluidiques sont d’excellents dispositifs potentiels pour la culture de cellules et faire différentes études telles que des études de toxicité et nous avons également essayé d’étudier et d’optimiser la caractérisation des fluides à l’intérieur de ces dispositifs en fonction des débits, géométrie et d’autres types de paramètres. À l’heure actuelle, nous commençons par la salle de microfabrication, et ce que nous allons faire, c’est essayer de fabriquer des dispositifs microfluidiques afin de faire en sorte que les dispositifs microfoliques se produisent, nous avons besoin de modèles de plaquettes de silicium et nous avons besoin de moules PDMS par-dessus. Ce polymère PDMS est en fait un mélange de deux choses différentes.

Il s’agit d’un mélange de base d’élastomère de silicium et d’agent de courant d’élastomère de silicium. La façon dont nous mélangeons ces deux éléments est que nous les mélangeons dans un rapport de 10 pour un, donc 10 de base et un d’agent de durcissement. Maintenant, je veux environ 20 grammes de ma base ici.

J’ai également besoin de deux grammes de l’agent de durcissement et l’agent de durcissement est beaucoup moins dense. Ça va venir beaucoup plus vite et je dois faire un peu attention. Il fait donc environ 22 maintenant et je veux mélanger la base et l’agent de durcissement ensemble.

Je vais donc utiliser pipe pour le faire. Je vais essayer de le mélanger autant que possible très bien ensemble. Je veux verser ce polymère PDMS sur les plaquettes de silicium qui ont en fait un motif sur elles et la plaquette de silicium aide à donner un motif aux moules PDMS.

Vous pouvez en fait remarquer que j’ai deux plaquettes de silicium ici et la raison en est que l’une d’entre elles est pour la couche supérieure de notre dispositif micro fillic et l’autre est pour la couche inférieure. Nous avons besoin de deux couches dans les dispositifs micro-fluidiques parce que nous essayons d’avoir un canal à l’intérieur et toute l’histoire derrière les dispositifs microfluidiques est que nous voulons avoir un écoulement à l’intérieur de ces canaux. Je dois donc verser ce mélange sur les deux plaquettes de silicium car j’ai beaucoup de bulles à l’intérieur de ce mélange.

Je veux enlever ces bulles et ce que nous faisons, c’est que nous utilisons le vide pour éliminer ces bulles. Nous sommes de retour dans la zone principale du laboratoire et comme je vous l’ai déjà dit, à l’intérieur du mélange PDMS, il y a beaucoup de bulles et nous voulons l’enlever et je vais placer les mélanges sur les plaquettes de silicium à l’intérieur de la chambre à vide. Je vais fermer la chambre et je vais ouvrir le vide, après cela, nous allons prendre les moules PDMS à l’intérieur d’un four pendant la nuit afin de les rendre plus solides.

D’accord, nous sommes maintenant en laboratoire et nous voulons assembler ces dispositifs microfoliques. Ce que nous allons faire, c’est prendre les moules PDMS, qui ont été à l’intérieur de l’incubateur pendant la nuit et ils se sont formés, ils ont formé les motifs qui ont été sur les plaquettes de silicium et je vais utiliser deux modèles différents. Sur le côté gauche, vous pouvez voir le micro-canal, qui sera la couche supérieure et celui de droite, vous pouvez voir des motifs de lignes vertes qui seront la couche inférieure.

Et c’est-à-dire que cela formera les rainures à l’intérieur du micro-appareil. Je commence par couper ces gels afin de pouvoir avoir la couche supérieure afin qu’elle se détache facilement de la plaquette de silicium. Et ce que je ferai, c’est que je le transférerai dans ces plats de Petra face vers le haut afin que les motifs soient orientés vers le haut.

Et je vais essayer la même chose pour les rainures, qui étaient les motifs de lignes vertes. Ceux-ci vont donc former la couche inférieure. Donc, une fois le gel coupé, je vais le transférer dans la boîte Petra et afin d’éviter la poussière sur les motifs, je vais les coller.

L’étape suivante consiste à perforer les extrémités des canaux afin de permettre aux cellules et aux médias d’entrer et de sortir. Ce que je vais faire, c’est que, parce que j’ai une grande surface ici et que je ne peux pas voir les motifs moi-même, je vais l’utiliser pour pouvoir voir les canaux et je vais perforer les deux extrémités. Je vais donc percer un gros coup de poing ici pour qu’il puisse avoir une commande de réserve et de l’autre côté, je vais percer un petit trou afin de pouvoir utiliser des tubes de polyéthanol de l’autre côté.

Nous sommes maintenant dans la salle de microfabrication et la prochaine étape consiste à fixer les deux surfaces différentes que nous avons. Pour ce faire, vous utilisez cette machine qui s’appelle un nettoyeur de plasma et le processus s’appelle le traitement au plasma. Ce qui se passe à l’intérieur de cette chambre, c’est que nous allons avoir un environnement plasmatique et lors de l’interaction de surface du plasma, ce qui va se passer, c’est que le plasma va en fait briser l’équilibre de surface faible et le remplacer par des groupes chimiques hautement réactifs.

Donc, ce qui va se passer maintenant, c’est que je vais retirer les bandes qu’il a mises ici afin d’éviter la poussière et je vais mettre ces moules à l’intérieur de la chambre. Je vais fermer cette porte jusqu’au bout, mettre d’abord l’alimentation, puis pomper et ensuite nous sommes prêts à partir. Nous le récupérerons dans cinq à 10 minutes.

Maintenant, je veux l’éteindre, alors j’éteins la pompe et l’alimentation et j’ouvre la chambre. En fait, il y a une pression négative ici, vous pourriez donc entendre le son. C’est ce que, à cause de la pression négative, alors je sors lentement mes moules.

Comme nous avons les deux surfaces du motif vers le haut, je vais prendre la couche inférieure, la placer dans ma main gauche et je vais prendre la couche supérieure, l’inverser et la placer sur mes rainures, puis pousser les couches l’une sur l’autre. La force d’adhérence et la permanence sont les avantages de l’utilisation de cette machine de traitement au plasma. Et ce que vous voyez ici en ce moment, c’est que vous pouvez voir le canal sur la couche supérieure et vous pouvez voir les motifs rainurés sur la couche inférieure et c’est prêt à passer à l’étape suivante.

Et puis apportez ici cette salle de culture, cette nourriture de culture et ensuite ce plat à porte ouverte. Ensuite, nous pouvons simplement charger la fibronectine, retirer les 60 microlitres de fibroïne, puis charger dans l’appareil. Et puis pour générer un certain flux à l’intérieur de l’appareil pour induire un petit revêtement qui vibre à l’intérieur du canal, nous pouvons simplement aspirer doucement la sortie.

Après cela, nous pouvons simplement placer sur cet appareil sur l’incubateur et c’est une heure Après une heure de refroidissement de l’intérieur vibrant de l’incubateur. Nous sortons simplement l’échantillon de l’incubateur, puis nous utilisons simplement cinq rouilles, trois, trois fibres de rouille. Nous envoyons simplement la fusion et la désombre, puis nous mettons le média, puis nous utilisons également le compteur de cellules à l’aide du compteur de cellules.

Nous avons généralement le million de cellules de la ville d’abord assis à l’intérieur de l’appareil. Donc, après la dissociation, nous pouvons juste pousser quelques fois le shampooing, puis retirer la suspension de vente, puis charger l’intérieur du canal pour mieux charger la cellule à l’intérieur du canal. Vous pouvez simplement couler doucement à l’aide de l’aspiration.

La somme des fluides et de la suspension de surface qui s’aspire à travers la cellule de sortie est généralement automatiquement, vous savez, l’ensemencement du canal sélectif, le canal global. Après cela, nous pouvons simplement démonter, mettre l’incubateur pendant une heure, c’est jusqu’à ce que la cellule se propage complètement à l’intérieur du canal. Et puis nous pouvons simplement infuser l’annexion de cinq et l’iodure d’hélice ainsi que le peroxyde d’hydro.

Et puis étudiez votre test d’hypothèse de temps. Nous pouvons simplement prendre l’échantillon à l’intérieur d’un aliment de culture tissulaire, puis nous pouvons simplement faire la solution deux moulins DM DMM milieu ainsi que 20 microlitres d’annexe, cinq 40 microlitres d’iode prop, 100 milli de peroxyde d’hydrogène. Ensuite, prenez le média de deux mètres avec l’annexe cinq, l’iodure d’aluminium, l’hydro perside, puis mettez la seringue après.

Mettre les deux milieux du moulin et annexer cinq prop iodure, hydro à côté. Nous pouvons simplement mettre la solution à l’intérieur des plafonds, puis retirer la bulle, puis connecter l’ours C. Celui-ci est étanche au gaz Hamilton murs chauds de moulin.

Celui-ci est composé de trois ours. Celui-ci est les plafonds jetables. Celui-ci est une aiguille de calibre 27.

Celui-ci est un tube en poly PE 20. Après avoir chargé la solution à l’intérieur d’une seringue, vous pouvez simplement coupler le temps plein et pousser à fond et pousser à fond et puis parfois un pourboire, taper une seringue, puis retirer la bulle et également tirer la solution. Donc, une fois de plus, poussez complètement, retirez la bulle, puis programmez à nouveau doucement.

Prenez donc la solution pour un repas, puis nous pourrons changer la vanne. Poussez, poussez la solution à travers la vanne à trois voies et la complètement dans le tube. Donc, enfin la solution, sortez par l’extrémité de notre tube, puis nous pouvons simplement connecter le tube dans le micro appareil et commencer à infuser un micro par minute.