세포 행동 유학을위한 그루브 패턴 Microfluidic 장치

우리는 세포 캡처 및 문화를 활성화할 수 있습니다 microfluidic 장치의 제조를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법에서는 이러한 microfluidic 채널 내에서 홈과 같은 패턴 microstructures는 셀 수있는 부두 내에서 낮은 전단 응력 영역을 작성하는 데 사용됩니다.

제 이름은 지앙(Jiang)이고, 하버드와 MIT 보건, 과학, 기술 분야의 포스터 펠로우입니다. 그래서 이 실험실에서 제가 가진 전문 지식은 세포 행동을 연구하기 위해 새로운 예측 장치를 생성할 수 있습니다. 매우 새로운 그라디언트 장치를 생성할 수 있을 뿐만 아니라 예측 장치에 통합을 생성할 수도 있습니다.

TC 장치는 세포 세포 상호 작용 및 세포 상호 작용뿐만 아니라 세포 태양 인자 접촉을 정밀하게 조작 할 수 있습니다. 그래서 TC 시스템을 사용하여 기본적인 세포 생물학을 이해하고 일부 발달 생물학과 일부 바이오 바이오 줄기 세포 생명 공학을 적용하기 위해 공부할 수 있습니다. 제 이름은 아미르 만치(Amir Manchi)이고, 하버드 MIT 보건 과학 및 기술부의 한 연구실에서 근무하는 학부생 교수입니다.

저는 마이크로 충전 장치에 대해 연구해 왔으며 우리는 미세유체 장치가 세포 배양을 위한 훌륭한 잠재적 장치라는 것을 보여주는 원리의 증명으로 시도하고 독성 연구와 같은 다양한 연구를 수행했으며 또한 유속의 함수로서 이러한 장치 내부의 유체 특성화를 연구하고 최적화하려고 노력했습니다. 기하학 및 다른 종류의 매개 변수. 지금 우리는 미세 가공실에서 시작하고 있으며, 우리가 할 일은 미세 엽 장치를 만들기 위해 미세 유체 장치를 만들려고 노력하는 것입니다. 이 PDMS 폴리머는 실제로 두 가지 다른 물질의 혼합물입니다.

그것은 실리콘 엘라스토머 베이스와 실리콘 엘라스토머 현재 제의 혼합물입니다. 우리가이 두 가지를 혼합하는 방법은 10 대 1 비율로 혼합하는 것이므로 10은 염기이고 하나는 경화제입니다. 이제 여기에 약 20g의 베이스가 필요합니다.

나는 또한 2g의 경화제가 필요하고 경화제는 훨씬 덜 조밀합니다. 훨씬 더 빨리 올 것이고 조금 조심해야 합니다. 그래서 지금은 약 22이고 베이스와 경화제를 함께 혼합하고 싶습니다.

그래서 나는 그것을하기 위해 파이프를 사용할 것입니다. 나는 내가 할 수 있는 한 많이 섞으려고 노력할 것입니다. 이 PDMS 폴리머를 실제로 패턴이 있는 실리콘 웨이퍼 위에 붓고 싶고 실리콘 웨이퍼는 PDMS 몰드에 패턴을 제공하는 데 도움이 됩니다.

실제로 여기에 두 개의 실리콘 웨이퍼가 있다는 것을 알 수 있는데 그 이유는 그 중 하나는 마이크로 필릭 장치의 최상층용이고 다른 하나는 최하층용이기 때문입니다. 우리는 내부에 채널을 가지려고 노력하고 있기 때문에 마이크로 필릭 장치에 두 개의 레이어가 필요하며 마이크로 유체 장치 뒤에 숨겨진 전체 이야기는 해당 채널 내부에 흐름을 원한다는 것입니다. 그래서 이 혼합물 안에 거품이 많기 때문에 이 혼합물을 두 실리콘 웨이퍼 위에 부어야 합니다.

저는 이 거품을 제거하고 싶고 우리가 하는 일은 그 거품을 제거하기 위해 진공을 사용하는 것입니다. 우리는 주 실험실 구역으로 돌아왔고 아까 말씀드렸듯이 PDMS 혼합물 내부에 많은 기포가 있기 때문에 이를 제거하기를 원하고 혼합물을 진공 챔버 내부의 실리콘 웨이퍼 위에 놓을 것입니다. 챔버를 닫고 진공 청소기를 열 것입니다.이 작업이 완료된 후 PDMS 금형을 더 단단하게 만들기 위해 밤새 오븐 안에 넣을 것입니다.

자, 우리는 지금 실험실에 있고 이 마이크로 엽 장치를 조립하고 싶습니다. 우리가 할 일은 하룻밤 동안 인큐베이터 내부에 있던 PDMS 몰드를 가져와서 형성하고 실리콘 웨이퍼에 있던 패턴을 형성하고 두 가지 다른 패턴을 사용하는 것입니다. 왼쪽에는 맨 위 레이어가 될 마이크로 채널이 보이고 오른쪽에는 맨 아래 레이어가 될 녹색 선 패턴을 볼 수 있습니다.

그리고 이것은 마이크로 장치 내부에 홈을 형성합니다. 저는 실리콘 웨이퍼에서 쉽게 분리될 수 있도록 최상층을 가질 수 있도록 이 젤을 절단하는 것으로 시작합니다. 그리고 제가 할 일은 패턴이 위를 향하도록 이 Petra 접시에 뒤집어 넣

그리고 저는 녹색 선 패턴인 그루브에 대해서도 같은 것을 시도할 것입니다. 그래서 이것들은 맨 아래 층을 형성할 것입니다. 그래서 젤이 잘리면 페트라 접시에 옮기고 패턴 위에 먼지가 묻는 것을 방지하기 위해 테이프로 붙일 것입니다.

다음 단계는 세포와 매체가 들어오고 나갈 수 있도록 채널의 끝을 펀칭하는 것입니다. 제가 할 일은 여기에 넓은 표면이 있고 패턴을 직접 볼 수 없기 때문에 채널을 볼 수 있도록 이것을 사용하고 양쪽 끝을 펀칭하는 것입니다. 그래서 저는 여기에 큰 펀치를 날릴 것이므로 예비 명령을 가질 수 있어야 하고 반대쪽에는 작은 구멍을 뚫어 다른 쪽에서 폴리 에탄올 튜브를 사용할 수

우리는 이제 미세 가공실에 있으며 다음 단계는 우리가 가지고 있는 두 개의 서로 다른 표면을 부착하는 것입니다. 이를 위해 플라즈마 클리너라고 하는 이 기계를 사용하고 있으며 이 과정을 플라즈마 처리라고 합니다. 이 챔버 내부에서 일어나는 일은 플라즈마 환경을 갖게 될 것이고 플라즈마 표면 상호 작용에서 일어날 일은 플라즈마가 실제로 약한 표면 균형을 깨고 그것을 반응성이 높은 화학 그룹으로 대체

이제 일어날 일은 먼지를 방지하기 위해 여기에 붙인 테이프를 꺼내고 이 틀을 챔버 안에 넣는 것입니다. 이 문을 끝까지 닫고, 먼저 전원을 공급한 다음 펌프를 공급한 다음 출발할 준비가 되었습니다. 5분에서 10분 안에 픽업해 드리겠습니다.

이제 전원을 끄고 펌프와 전원을 끄고 챔버를 열겠습니다. 실제로 여기에는 음의 압력이 있으므로 소리를들을 수 있습니다. 그것이 음압 때문에 그래서 나는 천천히 곰팡이를 꺼냅니다.

두 패턴 표면이 모두 위를 향하고 있기 때문에 맨 아래 레이어를 가져 와서 왼손에 놓고 맨 위 레이어를 가져 와서 반전시켜 홈 위에 놓은 다음 레이어를 서로 밀어 넣습니다. 접착 강도와 영속성은 이 플라즈마 처리 기계를 사용하는 장점입니다. 지금 보시는 것은 맨 위 레이어에서 채널을 실제로 볼 수 있고 맨 아래 레이어에서 홈이 있는 패턴을 볼 수 있으며 다음 단계로 진행할 준비가 되었다는 것입니다.

그리고 이 문화실, 이 문화 음식을 여기로 가져오고, 접시를 엽니다. 그런 다음 피브로넥틴을 로드하고 60마이크로리터의 피브로인을 꺼낸 다음 장치에 로드할 수 있습니다. 그런 다음 장치 내부에 약간의 흐름을 생성하여 작은 코팅을 유도하고 채널 내부의 진동을 유도하기 위해 배출구를 부드럽게 흡입할 수 있습니다.

그 후이 장치를 인큐베이터에 놓고 1 시간 후 인큐베이터 내부의 진동을 냉각시킬 수 있습니다. 인큐베이터에서 디스 샘플을 꺼낸 다음 5개의 녹, 3개의 섬유 녹을 사용합니다. 우리는 융합을 보내고 음영을 제거한 다음 미디어를 넣은 다음 셀 카운터를 사용하여 셀 카운티도 보냅니다.

우리는 일반적으로 장치 내부에 앉아있는 도시 백만 셀 프리미어입니다. 따라서 해리 후 샴푸를 몇 번 누른 다음 판매 중단을 제거한 다음 채널 내부를 로드하여 채널 내부에 셀을 로드하는 것이 좋습니다. 흡인을 사용하여 부드럽게 흐를 수 있습니다.

출구 셀을 통한 합 매체와 표면 현탁액 흡인은 일반적으로 자동으로 선택적인 글로벌 채널을 시딩합니다. 그 후 인큐베이터를 한 시간 동안 분해하여 넣을 수 있으며 세포가 채널 내부로 완전히 퍼질 때까지입니다. 그런 다음 부속 5와 요오드화 소품, 과산화수소를 주입할 수 있습니다.

그런 다음 시간 가설 분석을 연구하십시오. 우리는 조직 배양 식품 내부의 샘플을 채취 한 다음 용액을 2 밀 DM DMM 매체와 20 마이크로 리터 부속물 5 개, 40 마이크로 리터 소품 요오드, 100 밀리 과산화수소로 만들 수 있습니다. 그리고 나서 부속물 5, 소품 요오드화물, 수력 전기 perside를 가진 2개의 미터 매체를 가지고 가고, 그 후에 주사기를 두십시오.

2개의 선반 매체 및 부속물 5개의 소품 요오드화물, 수력 전기 perside를 두십시오. 용액을 천장 내부에 넣은 다음 거품을 제거한 다음 C 베어를 연결할 수 있습니다. 이것은 가스 밀폐 해밀턴 웜 밀 천장입니다.

이것은 세 마리의 곰입니다. 이것은 일회용 천장 천장입니다. 이것은 27 게이지 바늘입니다.

이것은 PE 20 폴리 튜빙입니다. 주사기 내부에 용액을 넣은 후 몇 시간 동안 가득 채우고 완전히 밀고 밀어 넣은 다음 때로는 팁을 주고 주사기를 두드린 다음 거품을 제거하고 용액을 당길 수도 있습니다. 따라서 한 번 더 완전히 누르고 거품을 제거한 다음 다시 부드럽게 프로그래밍하십시오.

따라서 한 끼 동안 용액을 복용한 다음 밸브를 전환할 수 있습니다. 삼방향 밸브를 통해 용액을 밀어 넣고 튜브에 완전히 밀어 넣습니다. 그래서 마지막으로 해결책은 튜빙 끝을 통해 나온 다음 튜빙을 마이크로 장치에 연결하고 분당 1개의 마이크로를 주입하기 시작할 수 있습니다.