Dissezione del sistema nervoso centrale larvali in Drosophila melanogaster

1. Sezionare 3 ^° larve instar, lasciando collegato al sistema nervoso centrale la cuticola. Mettere in una provetta da 1,5 ml.
2. Fissare in PBS (1x) contenente 2% di formaldeide per 40 minuti con dondolo. ; Usa 250ul per ogni SNC 5-10 sezionato.
3. Rimuovere la formaldeide e brevemente lavare 3 volte con PBS + 0.1% Triton X-100 (PBST). Utilizzare una pipetta Pasteur finemente tirato per evitare la perdita di tessuto.
4. Blocco non specifici siti di legame con le proteine ​​e le membrane delle cellule permeabilize incubando tessuto 1-8 ore in PBST + 5% di BSA, dondolo a 4 ° C.
5. Incubare in anticorpo primario diluito in PBST + 5% di BSA a dondolo a 4 ° C durante la notte. Diluizione degli anticorpi ottimale varia per gli anticorpi diversi.
6. Sciacquare 3x in PBST seguito da due lavaggi 30min a 4 ° C.
7. Incubare in anticorpo secondario diluito in PBST + 5% di BSA per 1-3 ore a dondolo a 4 ° C. Sciacquare 3x in PBST seguito da due lavaggi 30min a 4 ° C. Se il secondario è coniugato con un composto sensibile alla luce, avvolgere il tubo in foglio di alluminio.
8. Sezionare il tessuto ulteriormente (se necessario) e montata sul diapositive.

Questo video mostra come sezionare il sistema nervoso centrale da terzi larve instar Drosophila. Dopo la dissezione, il sistema nervoso centrale possono essere colorati utilizzando un protocollo standard di immunoistochimica. Attualmente, è molto più ancora sconosciuto su come il sistema nervoso adulto è generato e come si memorizza e trasmette informazioni. Studi della Drosophila sviluppo larvale SNC dovrebbe accrescere la nostra conoscenza del cablaggio del sistema nervoso e la funzione.

Larve di Drosophila presentano una serie di comportamenti stereotpyed, come risposta a stimoli ambientali. In che modo questi comportamenti appresi e memorizzati nel sistema nervoso? Gli studi del sistema nervoso durante lo sviluppo larvale contribuirà a rispondere a questa domanda.

A questo stadio dello sviluppo in Drosophila, l'organismo si prepara a subire grandi cambiamenti morfologici che si verificano durante impupamento. Durante questo periodo, il rimodellamento di massa del sistema neuromuscolare si verifica come le transizioni da una striscia organsim larva in una mosca adulta. Sarà interessante per determinare come i neuroni cambiano durante questa fase di sviluppo e se lo stesso tipo di comportamento può essere osservato nei neuroni degli animali superiori.