Method Article

تصنيع الأنسجة الصغيرة باستخدام وحدات من الخلايا التي تحتوي على الكولاجين جل

DOI:

10.3791/2177

⸱

December 13th, 2010

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering / Department of Chemical Engineering and Applied Chemistry, University of Toronto, 2Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهي مغلفة خلق الدقيقة أنسجة الكولاجين باستخدام المواد الهلامية اسطوانية ، تسمى وحدات ، والتي تحتوي على الخلايا المدمجة والتي السطح مع الخلايا البطانية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول تصنيع نوع من الأنسجة الصغيرة تسمى الوحدات. نهج الوحدة يولد موحدة ، والأنسجة وقابلة للأوعية دموية. يمكن جعل وحدات من الكولاجين وكذلك غيرها من المواد أو gelable crosslinkable. وهم حوالي 2 ملم وطولها 0.7 ملم وقطرها على تلفيق ولكن تقليص الحجم مع الخلايا المدمجة أو عندما تكون مغلفة وحدات مع الخلايا البطانية. وحدات فردية وصغيرة بما يكفي أن الخلايا المضمنة في حدود انتشار الأوكسجين والمواد المغذية الأخرى ولكن يمكن أن تكون معبأة معا لتكوين وحدات أكبر الأنسجة التي perfusable. هذه الأنسجة هي وحدات في البناء لأنه لا يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ من أنواع مختلفة من الخلايا أو المغلفة على الوحدات قبل أن يتم تعبئتها معا لتكوين أنسجة معقدة. هناك ثلاث خطوات رئيسية لجعل وحدات : (1) تحييد خلايا الكولاجين وتضمينها في ذلك ، (2) التبلور الكولاجين في أنبوب والقطع وحدات و (3) وحدات الطلاء مع الخلايا البطانية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) إعداد الأنابيب

  1. قطع 2-3 أطوال متر من أنابيب البولي ايثيلين (0.76 ملم x معرف 1،22 مم OD).
  2. الصفحات إبرة G1 20 في واحدة من نهاية الأنبوب.
  3. لفائف الأنابيب ووضعها في كيس ختم المحولات الذاتية (7 1 / 2 "× 13"). ينبغي وضع طرفي الأنبوب في نهاية تفض من الحقيبة ، وسجلت في مكان مع الشريط التعقيم الغاز.
  4. كيس ختم والغاز تعقيم.

2) تحي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن ملفقة عدة مختلفة الدقيقة الأنسجة باستخدام الوحدات المدمجة مع أنواع مختلفة من الخلايا 11/01. لقد نجحنا في تضمين العضلية الأولية ، والجزر ، والخلايا الجذعية الدهنية وخلايا انسجة الوسيطة وكذلك خطوط الخلية عدة بما في ذلك HepG2 ، NIH 3T3 واستنساخ خلايا الكبد 9. لقد كنا المغلفة الوحدات مع أنواع عدة من الخلايا البطانية بما في ذلك الخلايا البطانية الأورطي الفئران البشرية والخلايا البطانية الوريد السري والخلايا البطانية الإنسان الاوعية الدموية الدقيقة. كما تم الوحدات المنتج.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
تم توفير التمويل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (EB 001013) ، والعلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث وكندا ، والكندي معاهد أبحاث الصحة. نشكر الدكتور AP McGuigan لخبرتها في مجال التنمية والمساعدة من وحدات.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أنابيب داخلية PE60BD Biosciences427416يمكن استخدام قطر مختلف للأنابيب لتغيير قطر الوحدات الملحية
المخزنة بالفوسفات (PBS)GIBCO ، بواسطة Life Technologies20012-027
Trypsin-EDTAGIBCO ، بواسطة Life Technologies25200-072
كولاجين بوركول الحمضي ، 3 مجم / ملمختبرات Cedarlane5005-B
بيكربونات الصوديومSigma-AldrichS5761
20G إبرةBD Biosciences305175يجب أن يكون قطر الإبرة مشابها لقطر الأنبوب
3 مل حقنةBD Biosciences309585
أنبوب 15 ملBD Biosciences352096
50 مل أنبوبBD Biosciences352070
محولات الحقيبة ذاتية الختم 7 1/2 &# 8221 ؛ س 13 &# 8221 ؛كاردينال هيلث92713
10 مل ماصة مصلية ذات طرف عريضBD Biosciences357504
10 مل ماصة مصليةBD Biosciences357551
5 مل ماصة مصليةBD Biosciences357543

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
  2. Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Collagen Gel ModulesMicro tissue FabricationEndothelial Cell CoatingPolyethylene Tubing CuttingCollagen NeutralizationTissue Engineering ModulesVascularized MicrotissuesModular Tissue ConstructionCell Embedding ProtocolMicrofluidic Chamber Assays

Related Articles