الآلي التحليل السلوكي لكبير C. ايليجانس السكان استخدام واسعة مجال-من-عرض "تتبع النظام الأساسي"

ملخص

يصف لنا البروتوكولات لاستخدام منصة واسعة المجال لعرض تتبع السلكية (WF-NTP)، الذي يتيح لتوصيف عدد كبير من السكان من ايليجانس كاينورهابديتيسالمظهرية الفائق. يمكن استخدام هذه البروتوكولات لوصف التغييرات السلوكية خفية في سلالات متحولة أو استجابة للعلاج الدوائي بصورة تدرجية عالية.

الملخص

ايليجانس كاينورهابديتيس نموذج حيوان راسخة في مجال البحوث الطبية الحيوية، تستخدم على نطاق واسع في دراسات الشيخوخة وعلم الجينوم الوظيفي. لتقييم الصحة واللياقة البدنية من الحيوانات تحت الدراسة، واحد يعتمد عادة على قراءات حركية، مثل قياس عدد الانحناءات الجسم أو سرعة الحركة. وعادة ما تنطوي هذه القياسات العد اليدوي، مما يجعل صعوبة في الحصول على دلالة إحصائية جيدة، كالوقت والعمل القيود غالباً ما تحد من عدد الحيوانات في كل تجربة إلى 25 أو أقل. منذ عالية القدرة الإحصائية اللازمة الحصول على النتائج استنساخه والحد من النتائج الإيجابية والسلبية الكاذبة عند التحقيق في تأثيرات المظهرية ضعيفة، بذلت جهود مؤخرا وضع بروتوكولات الآلي التي ركزت على زيادة حساسية للكشف عن حركية والتنميط السلوكي متعدد حدودي. بغية تمديد المهلة للكشف إلى المستوى اللازم لالتقاط التغييرات المظهرية الصغيرة التي غالباً ما تكون حاسمة في الدراسات الوراثية واكتشاف الأدوية، يصف لنا هنا تنمية تكنولوجية التي تمكن من دراسة الحيوانات الفردية يصل إلى 5,000 في نفس الوقت، زيادة القوة الإحصائية للقياسات بحوالي 1,000-fold مقارنة مع الاختبارات اليدوية وحوالي معززات مقارنة بالأساليب الأخرى الآلي المتاحة.

المقدمة

حوالي نصف قرن، قدم سيدني برينر ايليجانس كاينورهابديتيس (C. ايليجانس) كنظام نموذجي لدراسة التنمية وعلم الأعصاب، كهذا صغير (1 مم في الطول)، الدودة السلكية شفافة من السهل التلاعب وراثيا والاستمرار في مختبر¹. اليوم، يتم استخدام C. ايليجانس لدراسة طائفة واسعة من العمليات البيولوجية بما في ذلك المبرمج، مما يشير إلى خلية، وطبيعة دورة الخلية، تنظيم الجينات، والايض، والشيخوخة². وعلاوة على ذلك، تعقد الخلايا والأنسجة، أنماط التعبير البروتين والمحافظة على مسارات المرض بين C. ايليجانس والكائنات أعلى (80% جينات الفيروس المتنقل قد أورثولوجوي بشرية)، ترتبط بالبساطة و الفعالية من حيث التكلفة لزراعة وجعله كائن نموذج فعال في فيفو قابلة للفائق الوراثية^3،،من^{45،، ،}من^{67 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13} والمخدرات عروض^14،،من¹⁵¹⁶ . ولجميع هذه الأسباب، C. ايليجانس قد استخدمت لتوصيف المسارات الجزيئية العادية وذات الصلة بالمرض؛ في ميدان نيوروديجينيريشن، على سبيل المثال، قد مكن استكشاف آثار الشيخوخة على البروتين تجميع^3،،من^47،،من^{1517، 18}، والتوصيف للمروجين ومثبطات البروتين تجميع^3،،من^45،،من^{67،14، 18}.

اللياقة البدنية عموما من الديدان، ومعلمة سلوكية هامة لتعريف بهذا النوع من الدراسة، يمكن أن تقاس يدوياً في مجموعة متنوعة من الطرق، كما هو الحال بإحصاء عدد الانحناءات الهيئة الواحدة والدقيقة (BPM)^{4،6، 19}، أو عن طريق قياس سرعة حركة^20،،من²¹إلى²²، وكذلك عن طريق قياس معدلات الشلل ومتوسط عمر. على الرغم من أن القياسات اليدوية من الانحناءات الجسم وسرعة الحركة وأدت إلى العديد من الأفكار الهامة في مجموعة متنوعة من المسارات الجزيئية والآليات^3،4،،من^{1419، 20،23}، الاختبارات اليدوي تظل منخفضة الإنتاجية حاليا وتتطلب عمالة مكثفة جداً وتستغرق وقتاً طويلاً حين يجري عرضه للأخطاء والتحيزات البشرية. هذه المسائل تحديات كبيرة في جمع البيانات مع قوة إحصائية كافية للتمييز بين التغيرات السلوكية خفية. هذا القيد ذات الصلة لا سيما للمخدرات الفحص كعلاجات مع المخدرات المحتملين الجزيئات التي غالباً ما تؤدي إلى التغيرات المظهرية الصغيرة²⁴، ولذلك تتطلب دراسة عدد كبير من الحيوانات من أجل الحصول على النتائج استنساخه. ولتوضيح هذه النقطة، وقد أظهرت الدراسات الأخيرة أن قوة عالية للكشف عن (جراب) أمر ضروري لتحديد أية تغييرات هامة بالثقة في السلوك والحد من النتائج الإيجابية الكاذبة²⁵. وقد أسفر هذا حافزا قويا في المجتمع C. ايليجانس ليحل محل العد اليدوي مع قياسات استنساخه، الآلي، وقت--وفعالة من حيث التكلفة. ولتلبية هذا الطلب، وضعت عدة مختبرات مؤخرا إلى أساليب لقياسات عالية الحساسية وتتبع دودة دقيقة لعدد أكبر من الديدان^22،،من^{2627،28 ،،}من^2930،31،،من³²³³.

من أجل زيادة توسيع عملية التشغيل الآلي لافواج كبيرة من الحيوانات اللازمة لقياسات يعتد به إحصائيا، وقد وضعنا مؤخرا ديدان أسطوانية واسعة المجال لعرض تتبع منهاج (WF-NTP)^{15،34 ،،}من³⁵³⁶، الذي يتيح التحقيق متزامنة متعددة قراءات المظهرية على السكان دودة كبيرة جداً، وعاملا رئيسيا في الكشف عن الشكلية إحصائيا ذات الصلة²⁵. WF-NTP حاليا مراقبة الحيوانات تصل إلى 5,000 جنبا إلى جنب، بل قراءات المظهرية أيضا تضمين معلمات متعددة، بما في ذلك معدل والسعة الانحناءات الجسم، وسرعة الحركة، وجزء صغير من السكان التي هي بالشلل، حجم الحيوانات. ولذلك من الممكن سهولة الشاشة آلاف من الديدان بالتوازي، والجمع بين قراءات مختلفة في خارطة سلوكية لخلق بصمات الأصابع متعددة الأبعاد³⁶. البرمجيات المفتوحة المصدر المرتبطة بها هو مكتوب في بيثون، مطلوب أيضا لتشغيله، وهو تماما للتخصيص. كما تتوفر واجهة مستخدم رسومية (GUI) لتمكين المستخدمين من اعتماد هذه التكنولوجيا.

وهنا، نقدم سلسلة من البروتوكولات التي توضح بعض التطبيقات المحتملة ل WF-معاهدة عدم الانتشار. على وجه الخصوص، نحن مناقشة إدارة المركبات، بدءاً من الجزيئات الصغيرة للمداواة البروتين، وتصف كيفية فحص آثارها مباشرة عبر عدد كبير من السكان من الديدان، وبالتالي فعالية إزالة الحاجة إلى أخذ عينة صغيرة السكان الفرعية. استخدام WF-معاهدة عدم الانتشار لهذا غرض قد حققت بالفعل مزايا كبيرة في إجراءات تهدف إلى تصميم برامج اكتشاف المخدرات مرض الزهايمر (AD)^15،،من³⁴³⁵ ومرض باركنسون (PD)¹⁸ باستخدام البيانات الحية في تقييم المرشحين العلاجية^35،37.

البروتوكول

1-إعداد مواد للبروتوكولات C. ايليجانس

1. إعداد حلاً المخزن مؤقت x M9 10، إضافة 30 غ فوسفات البوتاسيوم مونوباسيك و 60 غرام من فوسفات الصوديوم مائي 50 جرام من كلوريد الصوديوم باستخدام زجاجة أوتوكلافابلي 1 لتر.
   1. إضافة 1 لتر من الماء النقي والاوتوكلاف في كاليفورنيا- 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
   2. تمييع 10 مرات في تنقية المياه والاوتوكلاف في كاليفورنيا- 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
   3. عندما يبرد، أضف 1 مل حل م 1 سلفات المغنيزيوم.
      ملاحظة: 1 فقط x M9 (M9) ينبغي أن تستخدم للدودة المناولة في الخطوات التالية.
2. إعداد متوسط نمو السلكية (الغنية-NGM)، مزيج 2.7 غرام كلوريد الصوديوم، ز 15.75 لاجار، ز 5.75 الكازين، 900 مل من المياه النقية، والاوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
   1. نقل متوسطة NGM الغنية إلى فرن الاحترار (ca. 70 درجة مئوية) في حالة عدم استعمالها فورا؛ الغنية-NGM يمكن الإبقاء على المنصهر في كاليفورنيا-70 درجة مئوية ليصل إلى 12 ساعة قبل أن يصبح غير قابل للاستخدام.
   2. للأغنياء-NGM مزيج، إضافة 900 ميليلتر لإيجاد حل لكلوريد الكالسيوم وميليلتر 900 حل سلفات المغنيزيوم م 1 ميليلتر 900 لإيجاد حل لنسبة الكولسترول في الدم 5 ملغ/مل م 1 في الإيثانول المطلقة.
      ملاحظة: نسبة الكولسترول في الدم لا تتطلب التعقيم قبل الاستخدام.
   3. إعداد لوحات التجريبية التي تحافظ على سكان متزامن بعمر، إضافة ميليلتر 92 من 2-5-مخفضات '--ديوكسيوريديني (فودر) في 812 ميكرومتر إلى 900 مل الأغنياء-NGM.
      ملاحظة: فودر السمية والمسببة للسرطان، ولذلك فمن الضروري ارتداء القفازات النتريل بالإضافة إلى مختبر معاطف ونظارات السلامة. عدم السماح للنفايات إدخال النفايات العامة تيار والتخلص منها بالحرق مع احتراق.
   4. صب 20 مل من الأغنياء-NGM يعقم في طبق بيتري معقمة 9 سم لتوليد صفيحة نمو (NGM الغنية باللوحة). صب 15 مل الأغنياء-NGM يعقم في طبق بيتري معقمة سم 9 جعل لوحة حركية (Mot اللوحة). من أجل 20 مل من الأغنياء-NGM مع فودر في طبق بتري معقمة 9 سم لتوليد صفيحة فودر.
      ملاحظة: حجم لوحة يذكره أجار منخفضة يسهل الكاميرا التركيز والدودة تتبع (راجع الخطوة 3.2.5).
3. إعداد سلالة OP50 الإشريكيّة القولونية ، عن طريق التعقيم 1 لتر من مرق رطل في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وتلقيح مع ثقافة كاتب عندما يبرد.
   1. تسمح ثقافة البكتيرية تنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية وتعقيم أنبوب لاستخدامها للطرد المركزي.
   2. نقل البكتيريا إلى أنابيب معقمة وأجهزة الطرد المركزي في 4,600 س ز لمدة 15 دقيقة.
   3. صب المادة طافية، واستخدام المياه المعقمة، تعليق في 10% الحجم الأصلي لإنشاء 10 الأسهم OP50 x (مركزة 10 مرات).
   4. تمييع 15 مل مخزون x OP50 10 إلى 150 مل لتوليد 1 x OP50، باستخدام الماء المعقم، قبل استخدامها للبذور لوحات NGM الغنية. الحل استخدام x 10 المتبقية إلى لوحات فودر البذور.
      ملاحظة: لوحات يذكره سيبقى المصنف وستستخدم فقط في الخطوة الحصول على الصورة.
4. إلى لوحات البذور بالبكتريا، وفصل الأغنياء-NGM ولوحات فودر.
   1. تحت ظروف معقمة، إضافة 350 ميليلتر من 1 x OP50 إلى NGM الغنية بلوحات وتنتشر بشكل متساو.
      ملاحظة: لا تنتشر على حافة اللوحة كما سيتم الزحف الديدان حتى جانبي اللوحة ويموت.
   2. تحت ظروف معقمة، إضافة 350 ميليلتر من x 10 لوحات OP50 إلى فودر وتنتشر بشكل متساو.
   3. السماح لوحات لتجف واحتضان في 20 درجة مئوية لمد 2 قبل الاستخدام.

2-إعداد C. ايليجانس للاستخدام مع WF-معاهدة عدم الانتشار

1. الحفاظ على C. ايليجانس على لوحات NGM الغنية أو بواسطة نقل كمية صغيرة من أجار تحتوي على الديدان ووجهة للأسفل على طبقة بكتيرية جديدة. الحفاظ على السلالات C. ايليجانس بهذه الطريقة قبل الشروع في البروتوكولات التجريبية.
2. باستخدام تقنية نقل (راجع الخطوة 2، 1)، لوحات 20 بذرة لكل سلالة استخدام الديدان المرحلة جيدا تغذية، مختلطة، والسماح لهم تنمو لمد 2 في 20 درجة مئوية.
3. يغسل 5 لوحات تحتوي على الديدان باستخدام 15 مل M9 وتجمع في أنبوب 15 مل واحد. كرر لكل ألواح 20 لكل سلالة.
4. الطرد المركزي الديدان في 2,000 س ز 2 دقيقة وإزالة المادة طافية، وتعليق في 2 مل من محلول M9.
5. إعداد 10 مل من محلول التبييض عن طريق خلط 13% هيبوكلوريت الصوديوم وهيدروكسيد الصوديوم م 4 بنسبة 3:2 المجلد/vol.
   ملاحظة: لا يتطلب هذا الحل التعقيم. المكونات والحل الناتجة عن التآكل وينبغي التعامل معها بعناية باستخدام قفازات النتريل. هيدروكسيد الصوديوم هو أقل ما يقال أكالة للزجاج، وينبغي أن تكون مخزنة في حاويات بلاستيكية.
6. أضف 1 مل من محلول التبييض لكل أنبوبة الطرد المركزي واهتز بشدة لما يقرب من 3.5 دقيقة أو حتى بشرة قد حلت تماما.
7. تحت ظروف معقمة، تمييع هذه العينات إلى 15 مل M9 وأجهزة الطرد المركزي في 2,000 س ز 2 دقيقة إزالة المادة طافية وتعليق في 15 مل من محلول M9.
8. كرر الخطوة 2.7 6 مرات، حتى تظل فقط دودة البيض، والحل الذي لم يعد له رائحة الكلور.
9. الطرد المركزي في عينات 2,000 س ز 2 دقيقة وإزالة المادة طافية، وتعليق في 2 مل من محلول M9.
10. تحت ظروف معقمة، استخدم ماصة زجاجية معقمة نقل 2 مل M9 المحتوية على البيض في كل من لوحة زراعة الأنسجة 12-جيدا جيدا واحتضان في 20 درجة مئوية للحد ني ح 16.
    ملاحظة: استخدم لوحات منفصلة لكل سلالة لمنع حدوث التلوث المنتقل. الخطوة نقل من أنابيب الطرد المركزي ليساعدك على آبار متعددة لتجنب الاختناق دودة.
11. نقل الديدان تحاك بين عشية وضحاها من لوحات 12-جيدا في أنابيب الطرد المركزي 15 مل. 3 قطرات من 5 ميليلتر من دودة الحل وحساب عدد الديدان الحالية في مرحلة اليرقات الأولى (L1).
12. حساب عدد الديدان كل ميليلتر حل.
13. الديدان على لوحات NGM الغنية في الديدان 3,000 كل لوح L1 البذور والسماح لهم بالنمو لمدة يومين في 20 درجة مئوية، حتى تصل إلى المرحلة الأخيرة مرحلة اليرقات (L4).

3-العامة بروتوكول WF NTP

1. إضافة مل 2.2 من كل دواء مركب في تركيز مناسب (مثل هذا النحو 25 أو 10 ملم للمخدرات مثل سكوالاميني¹⁸ وبيكساروتيني¹⁵، على التوالي) إلى فودر 6 لوحات والسماح لتجف تحت ظروف معقمة لكل المطلوب سلالة الفيروس المتنقل.
   ملاحظة: يتم تكرار هذه الخطوة لكل مجمع قيد الدراسة، لكل تركيز وكل المذيبات المستخدمة.
   1. أغسل الديدان قبالة 5 لوحات NGM الغنية بإعدادها في الخطوة 2.13 15 مل M9 المخزن المؤقت باستخدام ونقل الديدان إلى أنبوب الطرد مركزي.
   2. الطرد المركزي في 2,000 س ز 2 دقيقة وإزالة المادة طافية، وتعليق في 3 مل M9. 3 قطرات من 5 ميليلتر من M9 الحل الذي يحتوي على الديدان وحساب عدد الديدان الحالي في آخر مرحلة اليرقات L4.
   3. حساب عدد الديدان كل ميليلتر من المخزن المؤقت M9.
2. البذور 700 L4 اليرقات على 6 لوحات فودر الجافة المحتوية على مركب معين، كرر هذه العملية لكل تركيز لكل مجمع، والسماح لتجف تحت ظروف معقمة.
   1. احتضان الديدان في 24 درجة مئوية من L4 لهذه السلالات حيث هو الناجم عن الشلل الذي أصاب دودة فقط برفع درجة الحرارة، مثل سلالة الإعلانية³⁸. عد في اليوم التالي مرحلة اليرقات L4 ك D0 من مرحلة البلوغ.
3. قم بتشغيل أضواء المرحلة لتعقب.
   1. تنظيف مرحلة الزجاج مع الإيثانول 70% وضمان أن لا تظل بقايا مرئية، ثم قم بإزالة غطاء العدسة. تنظيف عدسة تصوير تستخدم خرقه هواء. التأكد من أن الكاميرا موصولة بشكل صحيح ومثبتة وبدء التسجيل مع برنامج التقاط الصور.
   2. ضبط إعدادات الكاميرا لتسجيل 20 إطارات/ثانية، مع 16 أحادية تسجيل إعداد معلمات; تسجيل الإطارات 1,200، حفظ في تنسيق MJPEG بمعدل ضغط 95%. استخدام فارغة 9 سم طبق بيتري للتأكد من أن المرحلة التي تم تعيينه إلى الطول الصحيح وتعديله إذا لزم الأمر.
      ملاحظة: التأكد من أن حواف اللوحة مرئية في التسجيل كما سيسمح هذا الخوارزمية 'إبقاء الميت' لتعمل بشكل صحيح (الشكل 1a).
   3. تحت ظروف معقمة، تأخذ 2 لوحات معدّة مسبقاً في الخطوة 3، 2 بنفس الشروط ويذكره 1 فحص لوحة إعدادها في الخطوة 1.2.4. أضف 3 مل الحل M9 لوحة Mot. استخدام أخرى 2 مل M9 غسل 1/3 المساحة السطحية لألواح 2 إعدادها في الخطوة 3، 2 على لوح Mot.
   4. ضع لوحة Mot التي تحتوي على حوالي 5 مل الحل M9 وحوالي 600 من الديدان على خشبة المسرح المقتفي. وتركز الكاميرا باستخدام دودة فردية وبدء التسجيل.
   5. عند الانتهاء من التسجيل، تجاهل لوحة يذكره مع الديدان؛ وضع علامة على لوحات فودر أنها تستخدم مرة واحدة وإعادته إلى الحاضنة.
   6. كرر الخطوات من 3.3.3 إلى 3.3.5 لكل حالة تجريبية.
   7. كرر الخطوات من 3.3.3 إلى 3.3.6 لكل نقطة مرة في عمر الكبار.
      ملاحظة: إجراءات الفرز يمكن أن تنفذ في أي نقطة من دودة عمر الكبار (ca. 3 أسابيع). هذه البروتوكولات تيسير فحص نقاط زمنية تصل إلى 9؛ يوصي المؤلفون بفحص كل يومين ابتداء من اليوم الأول من مرحلة البلوغ.

4-الأمثل لدراسات الجرعة المنفصلة

1. إعداد الديدان بتكرار الخطوات من 3.1.1 إلى 3.1.3.
   1. البذور ca. 1000 L4 الديدان على 5 لوحات فودر. احتضان اللوحات في 24 درجة مئوية حتى الديدان D3 لبلوغ سن الرشد، للتجارب التي تنطوي على الإعلان³⁸ .
2. استخدام ماصة زجاجية معقمة، نقل الديدان أعدت تحت ظروف معقمة من اللوحة إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل، أجهزة الطرد المركزي في 2,000 س ز لمدة 2 دقيقة وإزالة المادة طافية.
   1. تعليق حل الديدان في 1 مل من المخزن المؤقت M9. نقل الديدان إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي، أجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 2 دقيقة، وإزالة المادة طافية.
3. لتوصيل البروتين، إضافة 40 ميليلتر من الكاشف التسليم تعداء و 20 ميليلتر من البروتين الأصلي في التركيز المطلوب (عادة 40 ميكرومتر)، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
   1. تحت ظروف معقمة، استخدم ماصة زجاجية معقمة نقل الديدان من الخطوة 4.2.1 في أنبوب ميكروسينتريفوجي يحتوي على بروتين مغلفة لإعطاء حجم إجمالي 1060 ميليلتر. أنابيب المكان أفقياً ويهز لفة في الدقيقة 60 في 24 درجة مئوية تهز الحاضنة ح 8.
4. تحت ظروف معقمة، إضافة 4 مل من محلول M9 لوح يذكره ونقل أنبوب ميكروسينتريفوجي واحد من الديدان بالإضافة إلى المخدرات على لوح Mot.
   1. إعداد tracker بتكرار الخطوات من 3.3 إلى 3.3.2.
   2. تحت ظروف معقمة، إضافة 4 مل من محلول M9 لوح يذكره ونقل أنبوب ميكروسينتريفوجي واحد من الديدان بالإضافة إلى المخدرات على لوح Mot.
   3. ضع لوحة يذكره على خشبة المسرح المقتفي، تركز الكاميرا على دودة فردية، وبدء التسجيل. عند الانتهاء، تسمية لوحة يذكره وتعيين إلى جانب واحد.
   4. كرر الخطوات من 4.4.1 و 4.4.3 لجميع العينات.
   5. استخدام ماصة زجاجية، نقل الديدان تحت ظروف معقمة من اللوحة يذكره بأنبوب الطرد مركزي 15 مل، والطرد المركزي في س 2,000 ز للحد الأدنى 2 إزالة طافية، نقل بيليه على صفيحة فودر، والسماح لتجف تحت ظروف معقمة.
   6. كرر الخطوة 4.4.5 لجميع العينات.
5. احتضان الديدان في 24 درجة مئوية حتى D6 لمرحلة البلوغ.
   ملاحظة: متعددة الأجسام المضادة إينكوبيشنز أيضا ممكنة.
6. أضف 3 مل من المخزن المؤقت M9 لوحة يذكره واستخدم 2 مل من محلول M9 لغسل جميع الديدان من صفيحة فودر على لوح Mot.
   1. إعداد tracker بتكرار الخطوات من 3.3 إلى 3.3.2.
   2. ضع لوحة يذكره على خشبة المسرح المقتفي وتركيز الكاميرا عند الاقتضاء، وبدء التسجيل. عند الانتهاء من التسجيل، تجاهل لوحة يذكره أو استعادتها لمزيد التحري إذا رغبت في ذلك.
   3. كرر الخطوات من 4.6 إلى 4.6.2 لجميع العينات.

5-تحليل بيانات الفيديو

1. بعد الحصول على أشرطة الفيديو، حدد المعلمات المناسبة في البرنامج واجهة المستخدم الرسومية (الشكل 2) لتحليل البيانات.
   1. تحميل واحد أو العديد من أشرطة الفيديو عن طريق وظيفة التصفح . قم بتحديد مجلد وجهة إخراج. ضمان أن تستخدم إطارات 600 إلى 1,200 لتحليل s 30.
      ملاحظة: يمكن تحليل أي مجموعة من الإطارات.
   2. إدراج بكسل لمعامل التحويل مم، التي سوف تكون 0.029 للتصوير أطباق بيتري سم 9 الكامل في القرار. حدد خوارزمية التتبع 'إبقاء الميت'.
      ملاحظة: معامل التحويل سيتوقف على مجال الرؤية المستخدمة. يمكن استخدام الخوارزمية Z-التحويل أيضا كبديل لذلك.
   3. ملء المعلمات في المقطع العثور (الشكل 2): Z استخدام الصور = 100، حشوة Z = 3، الأمراض المنقولة جنسياً بكسل = 54، عتبة = 9، افتتاح = 1، إغلاق = 2. ضبط معايير التصفية الحد الأدنى للحجم = 20، الحد الأقصى لحجم = 180، مثل دودة = 0.94.
   4. لحن المعلمات تشكيل مسارات : نقل المسافة القصوى = 10؛ طول الحد الأدنى = 150، الذاكرة = 10.
   5. تعيين معلمات الانحناءات والسرعة . استخدم 1.8 عتبة ينحنيو 0 الانحناءات الحد الأدنى150 الإطارات لتقدير سرعة.
   6. لحن الإحصاءات دودة ميتة. استخدام 5.0 الحد الأقصى للفوز في الدقيقة الواحدة و 1.0 السرعة القصوى.
   7. اختر مجلد الإخراج. تعيين عدد إطارات الإخراج إلى 50. تعيين حجم الخط إلى 10.
      ملاحظة: اختيارياً، حدد واحد أو أكثر المناطق ذات الاهتمام (رويس).
2. اختبار المعلمات باستخدام الدالة المثال . إخراج الصور مثلاً والتحقق من أن الديدان مرئية طوال 8 خطوات العتبة (الشكل 1).
3. استخدم الدالة بدء المهمة .
4. تحليل الملفات نتيجة النص عن طريق الجمع بين النتائج الفردية لمجموعة البيانات كاملة. استخدام التصدير إلى الدالة tsv في واجهة المستخدم الرسومية.
   ملاحظة: بشكل اختياري، يمكن أيضا اعتبار المقاييس الفردية من الديدان للدراسات السكانية.
   1. تحليل البيانات باستخدام حزمة برامج إحصائية.

النتائج

سهولة التشغيل والتحليل مولتيباراميتريك، وإنتاجية عالية من بروتوكول WF NTP المصور (الأرقام 1 و 2) يجعل من الممكن تحديد تغييرات صغيرة جداً في سلوك دودة بطريقة دقيقة جداً. يستند منهاج التصوير ميكانيكا البصريات مصنوعة خصيصا، وأنه يمكن تجميعها باستخدام كاميرا أحادية اللون 6 MP جنبا إلى جنب مع البعد البؤري 16 مم عدسة عالية الدقة لأجهزة الاستشعار 1 ''، ومضيئة مع 8 '' 8 '' بيضاء الخلفية (انظر الجدول للمواد وأيضا الإشارة إلى³⁶ للحصول على تفاصيل إضافية). هو مكتوب في بيثون البرمجيات WF NTP المرتبطة بها ووضعت لتشغيله على أنظمة تشغيل ويندوز. يتم تشغيله على جهاز كمبيوتر مجمع مخصص مع ثماني النواة 3.00 جيجاهرتز و 64 جيجابايت من ذاكرة الوصول العشوائي (RAM). كما كان تصميم البرنامج باراليليزي العمل وتحليل أشرطة الفيديو التي تستند إلى RAM ووحدة المعالجة المركزية للكمبيوتر; أي,، آلة ذات صلاحية حساب انخفاض سيؤدي إلى تشغيل أقل من أشرطة الفيديو في نفس الوقت. الإعداد ونستخدم حاليا هو الأمثل لتشغيل إلى ca. 16 أشرطة الفيديو في نفس الوقت ويمكن إكمال تحليل أشرطة الفيديو 100 ca. بين عشية وضحاها. وعلاوة على ذلك، يسمح ارتفاع مستوى التفاصيل المقدمة في واجهة المستخدم الرسومية من WF-NTP التخصيص سيطرة كبيرة على نوعية تحليل التصوير. ويمكن استخدام واجهة المستخدم الرسومية لمباشرة تحميل قواعد البيانات الكبيرة في أشرطة الفيديو موازية أو الفردية؛ يمكن أيضا تحديد أطر محددة لتحليل مفصل الفرعية، جنبا إلى جنب مع عامل تحويل بكسل، التي يمكن استخدامها لتقدير المقاييس السلوكية. ويمكن اختيار إحدى خوارزميات مختلفة تتبع اثنين (تبقى ميتة وتحويل Z) اعتماداً على أم لا يود المستخدم أن تنظر الحيوانات مشلولا في التحليل. يمكن أن تكون المعلمة العتبة جودة ضبطها تبعاً لذلك مع الفيديو والتجريبية. افتتاح واختتام معلمات تسمح للمستخدم بإزالة الضجيج، وكذلك تنفيذ وظائف مستوى العتبة. خوارزمية سكيليتونيزينج يوفر طريقة بديلة للتحليل. كائن حجم انقطاع (تصفية) يوفر عامل تصفية إضافية للضوضاء الخلفية والمعلمة مثل دودة يسمح للمستخدم بالنظر في الكائنات فقط الديدان بشكل بيضاوي، وبالتالي التمييز بين الكائنات الأخرى التي قد يكون لها نفس حجم بكسل الديدان. بعد هذه العمليات العتبة، يمكن تحديد جميع المناطق توسم الناتجة كالديدان الفردية ومواقف تلك المناطق ثم المخزنة لكل إطار للتحليل اللاحق والتعقب. الانحراف لكل دودة المتعقبة يستخدم لتقدير المقاييس دودة مثل مدى دودة الانحناء (BPM) كدالة للزمن. المستخدمين مسموح أيضا لتحديد عدد الإطارات المستخدمة للحفاظ على دودة في الذاكرة للبرنامج أثر الاصطدام، وعدد وحدات البكسل التي يمكن نقل الفيروس المتنقل بين الإطارات يمكن ضبطها أيضا للتمييز بين الحيوانات من الضوضاء. الخيار طول المسار الحد الأدنى يسمح للمستخدم للتخلص من الديدان التي قد تم تعقبها لإطارات قليلة فقط. البارامترات الرئيسية الأخرى، مثل المنعطفات والسرعة، تسمح للمستخدم بتحديد درجة الانحناء اللازمة تحسب كمنحنى جسم وعدد الإطارات التي تعتبر أن هناك حاجة إليها لتقدير سرعة الحيوانات. معلمات وقف إنتاج المواد الانشطارية يمكن ضبطها كذلك إدراج الحيوانات مشلولة. يظهر الإخراج تلقائياً في ملفات النتيجة. وتعتبر هذه القيم كالحدود العليا للتقييم لجزء صغير الحيوانات مشلولة. يمكن للمستخدم أيضا تحديد منطقة واحدة أو أكثر من الفائدة. هذه الميزة مفيدة بشكل خاص لتحليل الفئات السكانية الفرعية الديدان، ويتم فرز الإخراج تلقائياً في ملفات النتائج. خيار الإخراج يسمح للمستخدم بتحديد مجلد الإخراج وعدد الإطارات التي سيتم إنتاجها لأنها تتبع. يمكن أيضا استخدام مختلف أداة مجموعات لمزيد من التحليل البيانات، مثل الخرائط أداة مسار الأرض يوضح دودة كل المسارات وأداة أخذ البصمات التي تسمح للمستخدم لخلق بصمات الأصابع.

هذه المنهجية بتمكين النهج الجديد الذي سيعتمد، ليس فقط للدراسات البيولوجية من C. ايليجانس ، بل أيضا لأغراض البحوث الطبية والدوائية، مثل الفرز الفائق من التعديلات الوراثية والعلاج بالعقاقير. ونحن قد بينت هذه الإمكانات بوصف توصيف تعمل للدراسات السكانية الكبيرة (N > 1000) لمختلف نماذج دودة الأعصاب مرض الخرف (FTD) (frontotemporal³⁹، مرض باركنسون (PD)⁷ ، مرض الزهايمر (AD)^16،40، والتصلب العضلي الجانبي (المرض)¹⁹ (الشكل 3 ألف)، ووصف آثار جزيئات العلاجية المحتملة باستخدام نماذج دودة PD¹⁸ وإعلان ^15،12 (الشكل 3b). اثنين من الجزيئات الصغيرة، سكوالاميني¹⁸ وبيكساروتيني¹⁵، كانت تدار بتركيزات تصل إلى 25 ميكرون إلى PD (الشكل 3b) و 10 ميكرون للإعلان³⁸ (الشكل 3b) والديدان، على التوالي. وأظهر كل من المركبات واضحة آثار الجرعة تعتمد على أكثر من التركيزات اختبارها. وقد أظهرنا أن هذه الدقة العالية للقياسات هو يتحقق من خلال زيادة عدد الديدان التي يمكن تحليلها بالمقارنة بالطرق التقليدية (الشكل 3 ج). ونحن تبين أهمية حجم العينة (الشكل 3 جيم) في الفحص الجزيئي، وكذلك كما هو الحال في توصيف سلالات متحولة. الزيادة في درجة الحرارة من 20 درجة مئوية يؤدي إلى ما يقرب من نصف من الديدان الإعلانية أصبحت مشلولة بعد 3 أيام من بلوغه سن الرشد. تم فحص السكان دودة تحت ظروف مختلفة، مثل، عندما كانت تتعرض لتغيرات درجة حرارة خفية (الشكل 3 جيم، غادر (AD الديدان) الديدان الإفراط معربا عن شكل 42-بقايا الببتيد اميلويد بيتا (Aβ_1-42) لوحة)، عندما أعرب Aβ_1-42 في جميع الخلايا العصبية (الشكل 3 جيم، الفريق المركزي)، أو عندما تتعرض الديدان الإعلانية بيكساروتيني (الشكل 3 جيم، اللوحة اليمنى). كما جرى تحليل الديدان من رويس صغيرة تم اختيارها عشوائياً من مجال الرؤية الكاملة لأشرطة الفيديو المكتسبة مع WF-معاهدة عدم الانتشار (N < 50، الأصفر أشرطة) تسليط الضوء على المقارنة بين حركية هذه الديدان مع حركية متوسط السكان دودة كاملة (N < 1,000). في جميع اللوحات، الفرق تقاس على العموم دودة السكان يبدو أن يعتد به إحصائيا مع p ≤ 0.0001 (*).

يسمح بروتوكول WF NTP الموصوفة هنا أيضا التسجيل المتزامن لمعلمات متعددة (الشكل 1b) لدعم، على الوجه أمثل، التحقق من الصحة الداخلية ووضع بصمة شاملة لمجموعة واسعة من الظروف بالنسبة إلى مراقبة عينة، مما يتيح إجراء مقارنات مفيدة عبر دراسات متعددة. ويشمل هذا النهج متعدد حدودي تحليل السمات السلوكية المتعددة، بما في ذلك الانحناء التردد والسرعة ومعدل الشلل، الحجم، السعة ينحني وبيند تشريد³⁶المتزامنة. وهذا يسمح لآلاف حيوانات التي يتعين رصدها بقدر كبير من التفصيل، وفي حساسية عالية جداً ودلالة إحصائية ويوفر فرصاً للدراسات إعداد كبيرة من السكان. ويمتاز هذا الإجراء تتبع أيضا السماح للدراسات الشلل يجب القيام بها بالتوازي مع قياسات سلوكية أخرى، سمة رئيسية في دراسات الفحص الجزيئي.

النتائج التي تحققت حتى الآن في إعلان^15،،من³⁴³⁵ واكتشاف الأدوية¹⁸ PD تبرهن على أهمية اكتساب واسعة المجال لعرض البيانات زيادة كبيرة في عدد الحيوانات التي يمكن أن تكون رصد في تجربة واحدة، إلى حد كبير تقليل الأخطاء التجريبية وإلى حد كبير تحسين صحة الدراسات الإحصائية. وبناء على هذه النتائج، ونحن نتوقع أن بروتوكول WF NTP، الذي نحن متاحة ل المجتمع³⁶، سوف تمتد بشكل كبير استخدام C. ايليجانس.

رقم 1: خطوات تحليل WF NTP ومثال لبصمات الأصابع. () 1. الفيديو الأصلي. 2-خلفية الصورة. 3-خلفية طرح الصورة. 4-6-خطوات العتبة. 7-9-وضع العلامات واحدة من الديدان. (ب) تعمل متعددة ترد مع بصمات الأصابع للديدان البرية من نوع ودوده نماذج PD والإعلانية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 2: واجهة المستخدم الرسومية (GUI) من WF-NTP. يمكن تحديد ملفات الفيديو المحددة والإطارات المحددة في واجهة المستخدم الرسومية للتحليل، ويمكن إدراج عامل تحويل بكسل، بعدها يجري التحليل مع إحدى خوارزميات معينة تتبع اثنين. فمن الممكن لتحديد درجة الانحناء اللازمة للاعتماد كمنحنى جسم، فضلا عن العدد من الإطارات اللازمة لتقدير سرعة الحيوانات. هيئة الانحناءات ويمكن تحديد عتبات سرعة الإحصاءات دودة مشلولة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 3: أمثلة لتطبيقات تم تمكينها بواسطة الأسلوب WF NTP. () تطبيق WF NTP في الدراسات السكانية الكبيرة (N > 1,000) القياسات BPM لنماذج C. ايليجانس طائفة من أمراض الأعصاب بما في ذلك FTD، PD، الإعلانية، والمرض. (ب) تطبيق WF NTP في اكتشاف الأدوية. (ج) أهمية الدراسات السكانية في درجة الحرارة حساسية وفعالية العقاقير وتوصيف سلالة متحولة. تعمل للفئات السكانية الفرعية N < 50 (أشرطة صفراء) مقارنة مع أولئك السكان دودة كاملة (N < 1,000). أشرطة الخطأ تشير إلى الخطأ المعياري للوسط (SEM). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

المناقشة

بسبب التوسع السريع في تقنيات داخل ميدان العلوم البصرية، من الممكن الآن لمعالجة الحاجة إلى أساليب مؤتمتة في دراسات C. ايليجانس بطرق جديدة إلى حد كبير. كنتيجة لذلك، تم تصميم عدد الرقمية تتبع منصات^20،،من^{4142،43،44،،}من⁴⁵⁴⁶ وإتاحتها عبر السنوات القليلة الماضية من أجل استبدال العد اليدوي للمعلمات مثل سرعة الحركة، الانحناء التردد، ومعدل الشلل، فضلا عن أشكال أكثر تعقيداً من السلوكيات مثل يتحول أوميغا، وقياسات عمر. أحدث المنصات المؤتمتة تحسنت إلى حد كبير في إمكانية تكرار نتائج ودراسات⁴¹ حساسية ايليجانس جيم- وقدمت بيانات عالية الجودة في مجموعات صغيرة أو حتى كل من الحيوانات. قررنا تمديد التشغيل الآلي لتحليل سلوك دودة تجعل من الممكن تقييم تعمل الأفواج الآلاف من الحيوانات في نفس الوقت أيضا. والميزة الرئيسية للنهج المتبع في دراسة الأفواج دودة هو أنه يتيح للمحاسبة لتباين جوهري عالية دودة السلوك²⁴ ولكون دراسات علاج المخدرات غالباً ما تؤدي إلى الاختلافات المظهرية خفية، من الصعب الكشف عن مع دلالة إحصائية كافية عند استخدام مجموعة صغيرة من الحيوانات. قوة عالية للكشف عن (جراب) في الواقع ضرورية للكشف عن أي اختلاف كبير في السلوك مع الثقة والحد من النتائج الإيجابية الكاذبة²⁵.

وهنا، لقد قمنا بوصف سلسلة من البروتوكولات القائمة على أسلوب فرز الآلي المبلغ عنها مؤخرا C. ايليجانس، ديدان أسطوانية واسعة المجال لعرض تتبع منهاج (WF-NTP)³⁶. البروتوكول هو موضح هنا ينقسم إلى 5 أجزاء. تصف الأجزاء 1 و 2 إعداد السكان الكبيرة دودة. الخطوات الحاسمة هي عقم ظروف العمل وإعداد الكواشف والصفائح اللازمة لتشغيل هذه التجارب. ونلاحظ أنه بسبب زيادة الإنتاجية المقدمة بموجب هذا البروتوكول مقارنة بغيرها فحص المنهجيات³⁶، كما يتطلب كميات متزايدة من المواد الكاشفة؛ وهذا العامل يحتاج إلى النظر بعناية في التصميم التجريبي. ونلاحظ أيضا أن الخطوة تبيض أمر بالغ الأهمية، ويحتاج إلى اختبار مقدما كعدد كبير من البيض واليرقات صحية ضرورية لتشغيل هذه التجارب. الجزء 3 من هذا البروتوكول تفاصيل كيفية تسليم المخدرات في دودة وسائط الإعلام والشاشة الصلبة السكان. ونلاحظ أن هذا الجزء من البروتوكول تعتمد اعتماداً شديدا على العدد من العقاقير والمخدرات تركيزات يمكن اختباره بواسطة المستخدم في نفس الوقت. أتمتة كاملة لإجراء الفحص والحصول على البيانات بسرعة التحول خطوة تحد من المراقبة السلوكية لإعداد كاشف والنمو والمزامنة من السكان دودة كبيرة. الخطوات الرئيسية أثناء فحص السلوكية هي أوقات التسجيل وأي دودة التعامل مع الخطوات (مثلاً، نقل الديدان من لوحات NGM إلى منصة التعقب). البروتوكول الموصوفة هنا مثال مصممة للشاشة الديدان لمدة 9 أيام خلال عمر الكبار؛ ومع ذلك، هذا البروتوكول يمكن تكييفها بسهولة الشاشة العديد من النقاط الزمنية حسب رغبة المستخدم، مثلاً، 18 يوما على التوالي³⁶. ويوضح الجزء 4 ثم تطبيق البروتوكول على تسليم الجزيئات البروتينية (مثل الأجسام المضادة ومرافقين الجزيئية) إلى C. ايليجانس، ويظهر كيف البروتوكول يتضح في الأجزاء 1-3 يمكن تخصيصها بسهولة، حسب المطلوب التطبيق. علينا أن نظهر كيف يمكن تمديد هذا الإجراء ليس فقط لإيصال جزيئات شبيهة بالمخدرات ولكن أيضا لإدارة مرافقين أو الأجسام المضادة الجزيئية³⁷. تنفذ الخطوات الأربعة الأولى (أجزاء) تحت ظروف معقمة، إلا إذا ذكر خلاف ذلك. يجب أن تكون كافة المكونات السائلة يعقم قبل الاستخدام وحضانة الخطوات التي ينبغي أن تجري في الرطوبة النسبية 70%. في الجزء 5، ونحن تصف كيفية استخدام حزمة البرامج المقدمة في تركيبة مع المرحلة التي تعقب. وكان هذا البرنامج مخصصة مصممة لتحليل البيانات WF NTP تتصل بسلوك السكان دودة كبيرة. ونحن نقترح أن المستخدم يتبع المبادئ التوجيهية الواردة في الباب 5 لتحليل البيانات؛ ومع ذلك، هذه المعلمات التي تعتمد على السمات المحددة لأشرطة الفيديو المسجلة (أي في الثانية، ومجال الرؤية، دقة الفيديو، عدد الإطارات المكتسبة). قد تم تصميم الدالة الأمثلة المقدمة في واجهة المستخدم الرسومية تسهيل تقييم المعلمات الصحيحة قبل التحليل.

هذه السلسلة من البروتوكولات تجعل من الممكن لتحليل تعمل لإعداد كبيرة من السكان من C. ايليجانس (حاليا ما يصل إلى 5,000 الديدان الفردية بالتوازي) فعالية، الحد من المصنوعات اليدوية بسبب تباين جوهري في سلوك الحيوانات ، باﻻتفاق مع دراسات تمهيدية بشأن قوة الكشف ضروريا لتحقيق الدلالة الإحصائية للدراسات ايليجانس جيم-²⁵. ويستخدم المنصة نظام الكاميرات ذات الدقة العالية، قادرة على تسجيل الصور لإعداد كبيرة من الحيوانات بسرعة عالية، أثناء تسجيل أفواج كبيرة متعددة في وقت واحد. عالية الأداء والإنتاجية العالية لبروتوكول WF NTP يجعل من الممكن تحديد تغييرات صغيرة جداً في سلوك دودة بطريقة دقيقة جداً. ولذلك، تمكن هذه المنهجية النهج الجديدة التي سينظر فيها لدراسة بيولوجيا C. ايليجانس، بل بالإضافة إلى ذلك للبحوث الطبية والدوائية، مثل الفرز الفائق من التعديلات الوراثية والمخدرات العلاجات. ويمتاز هذا الإجراء أيضا السماح للدراسات الشلل يجب القيام بها بالتوازي مع قياسات سلوكية أخرى، سمة رئيسية في دراسات الفحص الجزيئي.

النتائج التي تحققت حتى الآن في برامج اكتشاف المخدرات الإعلانية^15،،من³⁴³⁵ و PD¹⁸ تبرهن على أهمية اكتساب واسعة المجال لعرض البيانات في زيادة كبيرة عدد الحيوانات التي يمكن رصدها في تجربة واحدة، إلى حد كبير وبالتالي تقليل الأخطاء التجريبية وإلى حد كبير تحسين صحة الدراسات الإحصائية. بينما ركز النهج الحالية المبينة في هذا البروتوكول على التصدي للتحديات في مجال اكتشاف الأدوية، ونأمل أن المنهجية التي ستعتمد على نطاق واسع في المجتمع، وأن تطبيقه سوف تمتد إلى المجمع الوراثي و الدراسات السلوكية وتوسيع عدد تعمل حاليا لإزالتها.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
<قوي > كواشف مستهلكة < / قوي >
أحادي القاعدة فوسفات البوتاسيوم	سيجما ألدريتش	P0662
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة	سيجما ألدريتش	S3264
كلوريد الصوديوم	سيجما ألدريتش	13422
كبريتات المغنيسيوم	سيجما ألدريتش	M7506
أجار	Sigma Aldrich	A1296
Difco casein digest	مستلزمات المختبرات العلمية	211610
كلوريد الكالسيوم ثنائي هيدرات	Sigma Aldrich	C3881
الكوليسترول	Acros	110190250
الإيثانول المطلق	Vwr	20821.33
5-Fluoro-2'-deoxyuridine 98٪	Alfa Aesar	L16497.ME
رطل كبسولات متوسطة	MP biomedicals	3002-031
13٪ هيبوكلوريت الصوديوم	Acros Organics	AC219255000
هيدروكسيد الصوديوم	فيشر كيماويات	S / 4880/53
Name	Company	Catalog	تعليقات < / قوية >
<قوية >سلالات < / قوية >
< م > الإشريكية القولونية < م > سلالة OP50	مقدمة من سلالة CGC	Op50	E القولونية
< م > C. ايليجانس < / م > سلالة برية	مقدمة من CGC	N2	< > C. elegans < / em > سلالة
< em> C. ايليجانس < / م > سلالة AD	مقدمة من CGC	GMC101	C. elegans< / em> سلالة
C. elegans< / em> سلالة PD	مقدمة من CGC	NL5901	C. elegans< em> سلالة
C. elegans< em> سلالة ALS	مقدمة من CGC	AM725	C. elegans< em> سلالة
C. ايليجانس< / إم> سلالة تاو	مقدمة من CGC	BR5485	C. elegans سلالة
<قوية > الاسم < / قوية >	<قوية > شركة < / قوية >	< قوية > رقم الكتالوج < / strong >	التعليقات < strong >
Equipment < / strong >
Tactrol 2 الأوتوكلاف	Priorclave
9 سم أطباق بتري معقمة	فيشر 11309283		العلمي
2 لتر قوارير erlenmeyer	مستلزمات المختبرات العلمية	FLA4036
Nalgene 1 L أواني الطرد المركزي	فيشر Scientific	3120-1000
RC5C بالإضافة إلى أجهزة الطرد المركزي المثبتة على الأرض	Sorvall	9900884
15 مل أنابيب الطرد المركزي	فيشر Scientific	05-539-12
Heraeus Multifuge X3R	Thermofisher Scientific	75004515
موزعات التلقيح	فيشر ساينتفيك	11821741
M4 مضاعفة	إيبندورف	4982000012
P1000 ماصة	Eppendorf Research Plus
P200 ماصة	Eppendorf Research Plus	3123000055
P10	Eppendorf Research Plus	3123000020
1,000 مو ؛ L نصائح منخفضة الاحتفاظ	Sarstedt
300 & L نصائح منخفضة الاحتفاظ	Sarstedt	70.765.105
10 & mu ؛ L نصائح احتفاظ منخفضة	Sarstedt	70.1130.105
pipeteboy 2	VWR	612-0927
50 مل ماصة مصلية	أبليتون وودز	CC117
25 مل ماصة مصلية	أبليتون وودز	CC216
ماصة زجاجية 270 مم	فيشربراند	كاميرا FB50255	لتسجيل مقاطع الفيديو
النبضية	Polyplus Transfection	501-04	كاشف التنبيغ
Multitron حاضنة اهتزاز قياسية	Infors HT	INFO28573
منفضة الهواء	مستودع مكتب	1511631
Name< / strong>	Company< / strong>	Catalog Number< / strong>	<قوي>تعليقات< قوي>
<قوي>مكونات تعقب WF-NTP وبرامج التقاط الصور< / قوي>
8 بوصة × 8 بوصة إضاءة خلفية	إدموند للبصريات	88-508	مكون المقتفي
16 مم FL عدسة عالية الدقة لمستشعر 1 بوصة	Edmond Optics	86-571	مكون المقتفي
6 ميجا بكسل كاميرا	إدموند البصريات	33540	مكون المقتفي
FlyCapture برنامج	PointGrey	SDK v2.12	برنامج التقاط
الصور WF-NTP	برنامج كامبريدج إنتربرايز	v1.0	تحليل الصور
حزمة مكتبية	Microsoft	Office 365	برنامج التحليل الإحصائي