الحصول على خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات الصلبة: طريقة لزراعة خلايا سرطان المبيض الظهارية من عينات ورم المبيض

قد تخضع الخلايا الظهارية الموجودة على السطح الخارجي للمبيض لتحول خبيث إلى خلايا سرطانية يمكن أن تنمو إلى أورام المبيض.

لعزل خلايا سرطان المبيض الظهارية أو EOCs ، ابدأ بأخذ عينة من ورم المبيض وفرمها إلى قطع صغيرة. انقل القطع المفرومة إلى أنبوب يحتوي على عازل هضم مكمل بإنزيم البروتياز المطلوب.

تعمل هذه البروتياز على تدهور بروتينات المصفوفة خارج الخلية داخل الأنسجة ، وتطلق خلايا EOC ، وكريات الدم الحمراء ، وعدد قليل من الخلايا الليفية المنفصلة في معلق.

قم بتصفية ملاط الخلية من خلال مصفاة لفصل الخلايا المفردة العالقة عن قطع الأنسجة غير المنفصلة. الطرد المركزي المعلق لتكوير خلايا EOC وكريات الدم الحمراء والخلايا الليفية. تخلص من المادة الطافية المحتوية على الإنزيم.

أعد تعليق حبيبات الخلية في وسط نمو ظهاري ونقلها إلى طبق ثقافة. احتضان المزرعة للسماح لخلايا EOC والخلايا الليفية بالالتصاق بقاعدة الطبق بينما تطفو كريات الدم الحمراء في الوسط.

قم بإزالة كريات الدم الحمراء العالقة عن طريق تحديث الوسائط. بمرور الوقت ، تسهل الوسائط النمو الانتقائي لخلايا EOC على الخلايا الليفية لتشكيل طبقة أحادية من خلايا سرطان المبيض الأولية.

اجمع العينة من غرفة العمليات وانقلها على الجليد إلى المختبر. لا تزال داخل الحاوية المنقولة ، ضع العينة في غطاء أمان بيولوجي. انقل العينة من أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر إلى طبق بتري مقاس 60 ملم × 60 ملم يحتوي على 10 ملليلتر من PBS الطازج المثلج.

بعد ذلك ، باستخدام شفرة حلاقة معقمة ، قم بتقطيع العينة إلى قطع 2 ملم أو أصغر. بعد ذلك ، عالج DMEM مع dispase II في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. انقل الأنسجة المفرومة إلى أنبوب خليط DMEM dispase II. ثم احتضان العينة عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. حرك ملاط الخلية يدويا كل خمس دقائق لضمان الهضم الأمثل.

بعد الحضانة ، انقل ملاط الخلية من خلال مصفاة خلية شبكية بحجم 70 ميكرومتر موضوعة فوق أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلترا. اضغط برفق على الشبكة باستخدام مكبس المحقنة. تخلص من أي أنسجة غير منفصلة متبقية أعلى الشبكة واجمع معلق الخلية الذي تم الحصول عليه في الأنبوب المخروطي المعقم سعة 50 مل.

بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للأنبوب المخروطي عند 320 × جم لمدة سبع دقائق عند 4 درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في 10 ملليلتر من DMEM تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ PS. بعد ذلك ، انقل تعليق الخلية إلى طبق بتري واحتضان المعلق عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية. قم بتغيير الوسط بعد 24 ساعة من الطلاء الأولي لإزالة الحطام الخلوي وغالبية كريات الدم الحمراء الموجودة في المزرعة.

أخيرا ، قم بتغيير الوسط كل ثلاثة أيام خلال الأسبوعين التاليين ، وبعد ذلك تكون مزارع خلايا EOC الأولية جاهزة للتطبيقات النهائية.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.