القياس الكمي للإنترفيرونات النشطة بيولوجيا من النوع الأول باستخدام مقايسة مراسل الفوسفاتيز القلوي الجنيني المفرز

لتحديد كمية الإنترفيرون النشط بيولوجيا من النوع الأول ، مثل الإنترفيرون ألفا والإنترفيرون بيتا ، في عينة اختبار ، خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا مراسل هندسية. تعبر هذه الخلايا عن الفوسفاتيز القلوي الجنيني المفرز ، SEAP ، جين المراسل تحت سيطرة المحفز المحفز للإنترفيرون ألفا وبيتا.

أضف عينة الاختبار التي تحتوي على تركيز غير معروف للإنترفيرون من النوع الأول. الماصة مجموعة من تركيزات الإنترفيرون البشرية من النوع الأول إلى الآبار الأخرى ، والتي تعمل كعناصر تحكم قياسية. حضن.

يرتبط الإنترفيرون من النوع الأول في بئر الاختبار بمستقبل سطح خلية معين ، مما يؤدي إلى تنشيط كينازات Janus. هذه البروتين كينازات محولات إشارة الفوسفوريلات ومنشطات النسخ ، STAT ، البروتينات ، التي تضعف وتشكل مركبا بعامل تنظيمي محدد للإنترفيرون.

عند دخول النواة ، يرتبط المركب بتسلسل DNA محدد في المحفز المحفز للإنترفيرون ألفا وبيتا ، مما ينشط نسخ جين SEAP وينتج إنزيمات SEAP ، التي يتم إفرازها في الوسائط.

انقل الوسائط المحتوية على SEAP إلى آبار صفائح متعددة الآبار ذات الركيزة الخاصة ب SEAP. يقوم SEAP بتحلل الركيزة الوردية ، مما ينتج عنه منتج أرجواني أزرق اللون.

باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس امتصاص المنتج في الآبار الاختبارية والقياسية ، مما يدل على مستويات SEAP وتركيز الإنترفيرون من النوع الأول.

من منحنى ال