مقايسة مبيد للجراثيم في الدم للنشاط المبيد للجراثيم بوساطة الأجسام المضادة بوساطة تكميلية

خذ عينة مصل مخففة بشكل متسلسل تحتوي على أجسام مضادة وحيدة النسيلة ضد عديدات السكاريد الدهنية، أو LPS — وهو مكون غشاء خارجي للبكتيريا سالبة الجرام.

إدخال البكتيريا سالبة الجرام. ترتبط الأجسام المضادة في الدم ب LPS البكتيرية.

أضف البروتينات التكميلية. يرتبط مركب C1 بالأجسام المضادة المرتبطة ب LPS ، ويشكل C1 نشطا إنزيميا.

يشق C1 المنشط C4 و C2 لتشكيل C3 convertase ، والذي يشق C3 لتشكيل C5 convertase. يشق المحول C5 لإنتاج C5b ، الذي يجند C6 و C7. يدخل المركب الناتج في الغشاء الخارجي ويرتبط ب C8 والعديد من C9 ، مكونا مسام.

يؤدي تلف الغشاء الخارجي إلى زعزعة استقرار الغشاء الداخلي ، مما يتسبب في تحلل الخلايا.

ضع الخليط في طبق أجار ووزعه. احتضان لنمو البكتيريا. قم بتراكب اللوحة بأجار يحتوي على كلوريد ثلاثي الفينيل تيترازوليوم ، أو TTC ، والذي يتم تقليله عن طريق نازعة الهيدروجين الميكروبية ، مما يضفي لونا أحمر على المستعمرات البكتيرية.

يزداد عدد المستعمرة مع تخفيف العينة ، مما يشير إلى انخفاض نشاط مبيد للجراثيم مع انخفاض تركيز الأجسام المضادة.

للبدء ، احتضان العينات في حمام ماء دافئ عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لتعطيل عينات الاختبار بالحرارة. احصل على لوحة فحص و 20 ميكرولترا من المخزن المؤقت للفحص للأعمدة من 1 إلى 12 من الصفوف من A إلى G. أضف 20 ميكرولترا من المخزن المؤقت للفحص إلى العمو