عزل واستئصال الفئران الأبهر. تقنية متعددة الاستخدامات في دراسة أمراض القلب والأوعية الدموية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تعقيم الشريان الأورطي الفأري وعزله واستئصاله. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض التجويف الصدري والبطن أولا. الخطوة الثانية هي الترشيح بمحلول ملحي بارد ومعقم.

بعد ذلك ، تتم إزالة أعضاء تجاويف الصدر والبطن ، تاركا القلب متصلا بالشريان الأورطي. الخطوة الأخيرة هي استئصال الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية والأنسجة المجيئة من الشريان الأورطي. في النهاية ، يتم استخدام مجهر تشريح للتحقق من إزالة جميع الأنسجة المحيطة ، ويمكن استخدام الشريان الأورطي لمجموعة متنوعة من التحليلات التجريبية.

لذا فإن هذه التقنية مفيدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث القلب والأوعية الدموية ، مثل تطور تمدد الأوعية الدموية وتشكيل لويحات تصلب الشرايين. ولذا يمكنك النظر إليها من خلال النظر إلى التغيرات في البيولوجيا الجزيئية ، مثل التعبير الجيني والبروتيني. بعد القتل الرحيم للماوس ، تحقق من حالة القتل الرحيم عن طريق قرصة إصبع القدم.

بعد ذلك ، قم بتعقيم الجلد عن طريق ترطيب فراء البطن بنسبة 70٪ من الإيثانول. ثم قم بتأمين الماوس في لوح الجراحة مع الزوائد الممدودة. ابدأ الجراحة باستخدام الملقط لتحديد موقع جلد البطن الأدنى من عملية الخنجري وعزله.

بعد ذلك ، ارفع الجلد لأعلى وقم بقصه بالمقص. يجب أن يكشف هذا الجزء العلوي من الصفاق والتجويف الصدري السفلي. ثم باستخدام الملقط والمقص ، ارفع عملية الخنجري وقم بعمل شقوق جانبية أدنى منها على طول الحواف تحت الضلعية.

لتشريح التجويف الصدري ، ادخل عبر الحجاب الحاجز ، مع الحرص على عدم إتلاف القلب أو أي أوعية رئيسية في هذه العملية. الآن تمتد الجمجمة الشقوق الجانبية على طول الحواف تحت الضلعية. وبالتالي ، قم بإزالة الجزء الأمامي من القفص الصدري.

قد تكون هناك حاجة إلى تشريح حاد لإزالة القلب من جدار الصدر الأمامي لإكمال هذه الشقوق. الآن باستخدام الشاش ، قم بتنظيف تجويف الصدر من السوائل الزائدة لتسهيل الوصول إلى الأعضاء. ثم قم بإزالة الرئتين باستخدام الملقط والمقص الفص بالفص.

يجب بعد ذلك أن يكون القلب والشريان الأورطي مكشوفين بالكامل ويسهل الوصول إليهما لجمع الدم عن طريق ثقب القلب. افعل ذلك الآن قبل الشروع في التروية لتنفيض القلب ، املأ حقنة 10 سم مكعب ب 10 مل من الثلج المعقم XPBS. ثم قم بإرفاق إبرة قياس 25.

أدخل الإبرة بعناية في البطين الأيسر. ثم قم بعمل شق في الأذين الأيمن حتى لا يتراكم الضغط المفرط في الدورة الدموية في الخطوة التالية. الآن ، خلال الدقيقتين إلى الثلاث دقائق التالية ، قم بإخراج PBS ببطء من المحقنة إلى القلب.

أثناء طرد PBS ، استخدم شاشا معقما لامتصاص السوائل التي تتدفق من الأذين عند الشق. عندما يتم إخراج PERFUSE ثمانية بالكامل ، امتصاص أي سائل متبقي بشاش يحجب رؤية نظيفة للتجويف الصدري. لفضح محتويات الجهاز الهضمي ، قم بقطع جدار البطن بشكل لطيف ، مع تمديد الشق إلى منطقة العانة فوق العانة.

بمجرد أن هناك ، قم بقطع ثنائي باتجاه الأطراف السفلية لعمل سديلة جلدية ، والتي يمكن تثبيتها أو استئصالها. المضي قدما يزيل العديد من الأعضاء وفصوص الكبد والبنكرياس والطحال والأمعاء والمريء السفلي. هذا يفتح المنظر على الشريان الأورطي.

كن حذرا للغاية أثناء تشريح منطقة بيرين حيث توجد فروع سطحية من الشريان الأورطي إلى الشرايين الكلوية في هذه المنطقة. قم بهذا التشريح بدقة وبعناية ، لأن بكتيريا الجهاز الهضمي يمكن أن تلوث الأنسجة الأخرى ، وتشطف المنطقة التي تم تطهيرها باستخدام XPBS واحد وتمتص المحلول الزائد بالشاش ، يجب الوصول إلى الشريان الأورطي بسهولة. لذلك باستخدام المقص والملقط ، افصل الشريان الأورطي عن العمود الفقري.

التشريح الحاد مناسب ، ويوصى بشدة باستخدام مجهر تشريح. يمكن إزالة الشريان الأورطي ، بدءا من البترول أو القرآن. ما يهم هو عملية نباتية منظمة لتنظيف وفصل الأنسجة.

عند تشريح الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية الدموية ، قم بإزالتها باستخدام مقص دقيق دقيق لتجنب تلف جدار الأبهر. هذا يقلل من فرصة الإصابة بالخلايا الليفية عند زراعة خلايا العضلات الملساء الأبهري. من المهم جدا الاستئصال الدقيق للأنسجة المحيطة بالأوعية الدموية والأنسجة الدهنية والأدفنتيتيا.

يمكن أن يتسبب أي نسيج متبقي في تلوث مزرعة الخلايا ، ولكنه أيضا يتحيز المقايسات الجزيئية. باستخدام هذا الإجراء ، ينزل الشريان الأورطي السليم الذي ينشأ من القلب إلى تجاويف الصدر والبطن. مع استمرار توصيل الشرايين الكلوية ، يمكن تصوير الشريان الأورطي في الموقع لتحديد التغيرات المورفومترية ، والتي يتم تشخيصها في دراسة تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني.

بعد ذلك ، يمكن إزالة الشريان الأورطي وتثبيته وتلطيخه للنظر في التغيرات النسيجية مثل صبغة الهيمات والتوين والإيوين ، أو مع تلطيخ فير هوف فان جين للنظر إلى أشرطة الإيلاستين وبالتالي عرض السلامة الهيكلية للشريان الأورطي. يمكن أيضا استخدام الخلايا الأبهرية لعزل الخلايا الأولية وللدراسات المختبرية مثل دراسات الجدوى وتوطين البروتين. بعد الإجراء ، يمكنك استخدام تقنيات أخرى مثل عزل البروتين والحمض النووي الريبي للنظر في تعبير البروتين ونشاط الإنزيم وكذلك التعبير الجيني.