عزل بروتينات الشعيرة المتوسطة من أنسجة الفئران المتعددة لدراسة التعديلات المرتبطة بالشيخوخة بعد الترجمة

الهدف العام من هذا الإجراء الكيميائي الحيوي هو عزل الأجزاء المخصبة بالخيوط الوسيطة من أنسجة الفئران المتعددة من أجل دراسة التعديلات اللاحقة للترجمة لبروتينات الخيوط الوسيطة الخاصة بالأنسجة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الخيوط الوسيطة مثل كيفية تأثر وظيفة وتنظيم هذه البروتينات الهيكلية الخلوية الهامة الواقية من الإجهاد أثناء شيخوخة الثدييات. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن دمج خطوة تحلل الأنسجة الآلي يسمح للمستخدمين بمعالجة عينات متعددة من الأنسجة بطريقة سريعة وفعالة.

للبدء ، أضف ملليلترا واحدا من المخزن المؤقت Triton X-100 المثلج البارد المكمل بمثبطات الإنزيم البروتيني في الخالط الأنبوبي الزجاجي وضعه على الثلج. قم بإزالة قطعة صغيرة من الأنسجة من تخزين النيتروجين السائل وضعها مباشرة في الخالط الزجاجي. ثم مع الاحتفاظ بالخالط والعينة على الجليد في جميع الأوقات ، استخدم ما يقرب من 50 ضربة من باستيل بولي تترافلورو إيثيلين لتجانس العينة مع تقليل تكوين الفقاعات.