التنبؤ ببتر باستخدام خلايا السلف أحادية النوى في المرضى الذين يعالجون من الأوعية مع الإقفاريات الحرجة

على الرغم من أن رأب الأوعية يحسن تدفق الدم في نقص تروية الأطراف الحرجة ، إلا أن بعض المرضى سيظلون يتقدمون إلى بتر الأطراف. بالمقارنة مع التشخيص القائم على عوامل الخطر التقليدية والسمات الوعائية الجوهرية ، يمكن أن يكون عدد MPCs المحلية أكثر تنبؤا بالنتيجة السريرية ، فيما يتعلق بالخلل البطاني وبتر الأطراف. يمثل عدد MPCs المحلية مؤشرا واعدا لتشخيص أحداث الأوعية الدموية ، مثل نقص تروية أمراض القلب ونقص تروية الأطراف السفلية ، مع إمكانية التطبيق في تقسيم المخاطر وفرض الوقاية.

سيظهر الإجراءات إدواردو فيرا جوميز ، وأليخاندرو هيرنانديز باتريسيو ، وكارولينا أراندا رودريغيز ، وخوان أرييل جوتيريز بوينديا ، وأتزين سوا رويز هيرنانديز ، وماريو أنطونيو تيليز غونزاليس ، وغابرييل ألكسندرا دومينغيز بيريز. سيكون الدكتوراه من مختبرات التمثيل الغذائي التجريبي وتجديد الأنسجة ، أيضا ، غابرييل هيرنانديز دي روبن وأوسكار أنطونيو لومان زونيجا. وهذه من قسم جراحة الأوعية الدموية.

لتحديد ما قبل وبعد الرأب الوعائي ، استخدم محول طاقة خطي للأوعية الدموية لقياس قطر الشريان العضدي للمريض. في المرتبة التالية ، سوار مقياس ضغط الدم فوق موقع القياس في الساعد ، وقم بنفخ الكفة 50 ملم من الزئبق فوق ضغط الدم الانقباضي لمدة خمس دقائق قبل تفريغها. في غضون 60 ثانية من الانكماش ، قم بقياس قطر الشريان العضدي مرة أخرى ، واستخدم المعادلة لتقدير الحمى القلاعية القلاعية

لتقييم الشدة السريرية لنقص تروية الأطراف ، وفقا لتصنيف رذرفورد ، ضع إبرة قياس 18 في الأوعية الدموية في موقع الفخذ المحدد ، وضع مدخلا فوق الإبرة. قم بتقديم سلك توجيه مرن في المقدمة واستبدل الدليل بستة مقدمة فرنسية. باستخدام التوجيه التنظيري الفلوري ، قم بحقن وسيط التباين لتحديد مسار الشريان ومواقع الأوعية الدموية المسدودة.

أدخل اثنين ، 0.014 من الأسلاك التوجيهية للملاحة الفرنسية واثنين ، 0.014 من أسلاك التوجيه الفرنسية في السفينة ، وقم بدفع أسلاك التوجيه إلى الموقع المحجوب. بعد ذلك ، أدخل قسطرة فرنسية واحدة بخمسة ، ثم قسطرة فرنسية بثلاثة ، واجمع 10 ملليلتر من الدم من الموقع الأقرب إلى انسداد الأوعية الدموية. ضع العينة على الجليد وقم بتقديم سلك توجيه مرة أخرى.

عندما يكون السلك التوجيهي في مكانه ، أدخل قسطرة بالون رأب الأوعية الدموية ، تحتوي على بالون قابل للنفخ يقع في نهاية القسطرة ، وقم بدفع قسطرة بالون رأب الأوعية إلى موقع الآفة. قم بنفخ البالون ضد البلاك المانع الموجود في جدار الأوعية الدموية وتحقق من استعادة تدفق الدم. بعد 30 دقيقة من إجراء رأب الأوعية الدموية ، تقدم قسطرة إلى الموقع الأقرب إلى كتلة الأوعية الدموية واجمع 10 ملليلتر من الدم.

بعد ذلك ، قم بإزالة جميع الأسلاك التوجيهية وتوفير الرعاية المناسبة بعد الجراحة. بعد أسبوعين من عملية رأب الأوعية الدموية ، قم بتقييم الشدة السريرية لنقص تروية الأطراف ، وحل آلام الراحة ، ونقص التروية المنخفض ، والحفاظ على القدم الوظيفية ، وفقا لتصنيف رذرفورد ، وتحديد تلك الحالات التي تتطلب بترايا كبيرا بسبب نتيجة غير مواتية. في غضون ساعة واحدة من الجمع ، قم بنقل ستة ملليلتر من كل عينة دم تم جمعها إلى أنابيب جديدة سعة 15 مليلتر ، وقم بتخفيف العينات بنسبة واحد إلى واحد في PBS.

أضف ملليلترين من وسط تدرج الكثافة إلى كل أنبوب من أنابيب الاختبار الثلاثة ، وأضف ثلاث حصص متساوية الحجم من الدم المخفف إلى كل أنبوب بحيث لا يزيد عن ثلاثة أرباع ممتلئة. افصل خلايا الدم عن طريق الطرد المركزي المتدرج للكثافة ، واستخدم ماصة لجمع خلايا واجهة الطبقات الناتجة. اسحب الخلايا من كل عينة إلى أنبوب واحد سعة 15 مليلترا، واغسل كل عينة ست مرات، باستخدام ملليلترين من PBS لكل غسلة.

بعد الغسيل الأخير ، أعد تعليق MPC الذي يحتوي على كريات في مليلتر واحد من PBS لكل عينة للعد ، وأضف مرة واحدة في 10 إلى الخلايا الست لكل أنبوب إلى العدد المناسب من خمسة مليلتر من أنابيب قياس التدفق الخلوي لكل عينة. قم بتكسير الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، وأعد تعليق كل عينة خلية في 100 ميكرولتر من كوكتيل الأجسام المضادة محل الاهتمام لمدة 10 ثوان ، قبل احتضان الخلايا لمدة 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية ، محمية من الضوء. في نهاية الحضانة ، استخدم الأجسام المضادة للتحكم المتطابقة مع النمط المتماثل لإعداد بوابات التشتت الأمامية والجانبية المناسبة للتحليل ، واستخدم أنبوبا يحتوي على عدد كبير من الخلايا الإيجابية CD45 و CD34 لبوابة الشخصيات غير القابلة للعب.

لتحديد الأنماط الظاهرية المناعية الإيجابية المزدوجة ، قم بإنشاء مخططات جديدة وتحديد الخلايا الإيجابية ل KDR و CD133 و CD184 الإيجابية و CD34 الإيجابية و CD45 ، ثم البوابة لتحديد المجموعات السكانية الفرعية الرئيسية ل MPC. يمكن بعد ذلك ربط عدد MPCs بقيمة خط الأساس لمرض الحمى القلاعية ، ودلتا ما بعد رأب الأوعية الدموية من الحمى القلاعية ، ونسبة المرضى الذين يحتاجون إلى بتر كبير في الطرف السفلي. في هذا التحليل التمثيلي ، بعد 30 يوما من رأب الأوعية الدموية في الأطراف السفلية ، يرتبط الرقم الأساسي ل CD45 إيجابي ، CD34 إيجابي ، KDR إيجابي ، سلبيا بمرض الحمى القلاعية القلاعية

في حين أن التغيير في CD45 إيجابي ، CD34 إيجابي ، CD133 إيجابي ، CD184 إيجابي ، بعد رأب الأوعية الدموية ، يرتبط ارتباطا كبيرا بتحسن الحمى القلاعية القلاعية كما لوحظ زيادة عدد خط الأساس من MPCs CD45 إيجابية ، CD34 إيجابية ، مجموعات سكانية فرعية إيجابية KDR ، بالإضافة إلى انخفاض ما بعد رأب الأوعية الدموية في الخلايا الإيجابية MPC CD45 ، وإيجابية CD34 ، وإيجابية CD133 ، والخلايا الإيجابية CD184 ، كما لوحظ في المرضى الذين تطوروا إلى بتر الأطراف ، أثناء نهج الأوعية الدموية ، تأكد من جمع الدم من الموقع الأقرب إلى انسداد الأوعية الدموية.