زرع قنية داخل الجمجمة لمستقبلات المستضد الخيمري التسلسلي (CAR) في الخلايا التائية في الفئران

يكرر هذا البروتوكول نظام القسطرة داخل البطيني المستخدم في التجارب السريرية الجارية لاختبار التسليم الإقليمي المحلي للعلاج بالخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الخيمرية الموجه ضد أورام الجهاز العصبي المركزي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القدرة على توفير جرعات متكررة متعددة من العلاج بالخلايا التائية CAR T الإقليمية المحلية دون إجراء عمليات جراحية متعددة الغازية. يمكن استخدام هذا النظام للتحقيق في العلاجات المختلفة في مواقع التسليم المختلفة ، وبالتالي قد يوفر نظرة ثاقبة لعدد لا يحصى من مجالات البحث في علم الأعصاب.

للبدء ، ضع الماوس المخدر برأس محلوق على طاولة العمليات وافتح الجزء السفلي من الذراع التجسيمي برفق باستخدام ملعقة. أدخل القنية بالملقط وقم بتثبيتها عن طريق شد المسمار على الذراع حتى يبرز نصف إلى ثلثي الجزء البلاستيكي الأبيض وخمسة ملليمترات من القنية من أسفل الفتحة. أدخل وثبت الأسنان العلوية للفأر في شريط العضة لجهاز التجسيم.

اسحب مخروط الأنف للأمام وشده ، مع التأكد من أن الماوس يستنشق الأيزوفلوران. ثم ، قم بتركيب الماوس على جهاز التجسيم الدافئ باستخدام أصفاد الأذن أو قضبان الأذن ، وتجنب الضغط المفرط. تطهير موقع الجراحة وجعل قطع موازية للجمجمة كما هو موضح في المخطوطة.

استخدم مسحات طرف القطن لدفع اللفافة بعيدا. تحديد المعالم ، bregma و lambda على الجمجمة المقابلة للعلامات الأمامية والخلفية حيث تلتقي لوحات الجمجمة. لإنشاء سطح لربط الأكريليك ، قم بعمل عدة شقوق برفق عبر الجمجمة باستخدام مشرط.

باستخدام الذراع المجسمة ، قم بتوطين القنية إلى المعلم محل الاهتمام. ارفع طرف القنية من واحد إلى ملليمترين فوق سطح الجمجمة وانتقل إلى الإحداثيات المطلوبة. باستخدام إبرة قياس 18 أو مثقاب جراحي ، قم بعمل فتحتين لولبيتين على الجمجمة المكشوفة بعيدا عن مكان دخول القنية ، مما يضمن مساحة كافية للقنية.

تحريف الحفر من خلال ثقب المسمار حتى يعلق على الجمجمة. باستخدام مفك براغي ذو طرف مسطح ، أدخل واربط مسمارين في الفتحات. ثم اسحب المسمار لأعلى برفق للتأكد من تثبيته.

لإدخال قنية ، قم بإنشاء ثقب في الجمجمة عند الإحداثيات المحددة باستخدام إبرة قياس 18 أو مثقاب جراحي. باستخدام ذراع التوضيع التجسيمي ، اخفض القنية إلى إحداثيات DV المطلوبة. في حوالي 0.3 جرام من مسحوق راتنج الأكريليك و 10 إلى 15 قطرة من السائل في صفيحة خزفية ذات 12 بئرا ، قم بتحميل المادة البيضاء اللزجة المحضرة في حقنة سعة ملليلتر واحد.

معطف الجمجمة وملء الفراغات حول القنية والمسمار. قم بفك المسمار الموجود على ذراع التوضيع التجسيمي بينما يكون الأسمنت مرنا. استخدم ملعقة برفق لتحرير القنية من الحامل عند الفتحة السفلية واسحب ذراع التوضيع التجسيمي بعيدا عن الماوس.

بمجرد تجفيف الأسمنت ، أدخل القنية الوهمية في قنية التوجيه وقم بتدويرها في اتجاه عقارب الساعة لتثبيتها بإحكام. بمجرد اكتمال الإجراء ، أعد الماوس إلى قفصه المنزلي الدافئ للتعافي. لتحضير قنية العلاج ، أدخل الجزء العلوي منها في أنبوب PKG.

بعد ذلك ، املأ حقنة العلاج بتعليق الخلايا التائية CAR T وأدخلها من خلال الطرف الآخر من أنبوب PKG ، الذي يغطي الجزء العلوي من قنية العلاج. بعد تخدير الماوس ، قم بتثبيت قنية التوجيه في القاعدة باستخدام ملقط. قم بفك وإزالة القنية الوهمية ، مما يسمح بالوصول إلى قنية التوجيه.

نقع الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الخيمرية لمدة دقيقة واحدة وثبت قنية العلاج في مكانها لمدة دقيقة إضافية. بعد إزالة قنية العلاج ، قم بربط قنية وهمية بإحكام. ثم، تطبيق ميلوكسيكام تحت الجلد للسيطرة على الألم.

تسبب العلاج بالخلايا التائية CAR T الموجهة من GPC2 في حدوث انحدار كبير للورم في الورم الأرومي النخاعي والبقاء على قيد الحياة لفترة طويلة بشكل كبير في نموذج الورم الدبقي في خط الوسط المنتشر في المهاد. عند إدخال قنية التوجيه في مكان داخل الورم ، من المهم أن نفهم أن الإحداثيات الظهرية البطنية قد تكون أكثر سطحية من حقن الورم من أجل حساب أطوال إسقاط القنية الوهمية والعلاجية.