العدلة عزل بروتوكول

بروتوكول عزل العدلات. سيقوم هذا الإجراء باستخراج خلايا الدم البيضاء من أجهزة الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي لعينة الدم الكاملة. دوامة سيدي إبرة وفلتر حقنة حقنة.

ملي صب العلامة التجارية MX gv 0.22 ميكرومتر المواد. يتطلب فصل العدلات لتعويذة هانك ومحلول الملح نوعين من حلول HBSS. سيتم استخدام HBSS مع كلوريد الكالسيوم لعمل محلول مع زلال مصل البشرية.

سيتم استخدام HBSS بدون كلوريد الكالسيوم لتعليق وغسل العدلات. يرجى توخي الحذر بشكل خاص لاستخدام محلول HBSS المناسب في هذا الإجراء. ألبومين مصل الدم البشري أو HSA هو بروتين في بلازما الدم يحافظ على درجة الحموضة وضغط SMO.

لا تستخدم المخزن المؤقت لتحلل الخلايا الحمراء المدمج في مصل الأبقار. يتم تصنيعها بواسطة Roche Diagnostics و neutrophil Isolation Media NIM Cedar Line Labs وسائط فصل بولي خفيفة ليمفاوية محمية من الضوء ومحفوظة في الثلاجة للحصول على أفضل النتائج. يجب أن تكون جميع الكواشف في درجة حرارة الغرفة وقت الاستخدام.

قم بإزالة الكواشف من الثلاجة قبل ساعة واحدة من التجربة. تحضير محلول H-B-S-S-H-S-A لفصل العدلات. ماصة HBSS مع كلوريد الكالسيوم في قارورة.

ارسم HSA في المحقنة. تجنب حبس فقاعات الهواء. قم بإزالة إبرة المحقنة واستبدلها بالفلتر.

حقن HSA من خلال مرشح في دوامة قارورة HBSS اثنين عندما يكون لديك المواد الأخرى جاهزة وفي درجة حرارة الغرفة ، احصل على حوالي 15 مل من الدم الكامل. سينتج عن ذلك 10 إلى 15 مل من 10 إلى العدلات الثامنة. يجب ألا يكون المتبرع قد تناول الكحول أو المخدرات التي لا تستلزم وصفة طبية لمدة 24 ساعة قبل التبرع بعينة الدم.

يمكن أن تعطل هذه عملية الانفصال. يمكن مضاد تخثر الدم الكامل باستخدام سترات EDTA أو الهيبارين عن طريق إضافة تسعة أجزاء من الدم إلى جزء واحد K أو ثلاثة سترات الصوديوم EDTA أو الهيبارين باتباع تعليمات الشركة المصنعة. سيتم وصف الخطوات التالية في هذا الإجراء.

فصل وإزالة البلازما والخلايا الوحيدة. فصل واكتساب طبقة عدلات يحلل خلايا الدم الحمراء مجانا يعلق عدلات أولى فصل. اكتساب العدلات في طبقة IM.

اجمع خمسة ملليلتر من وسائط العزل في أنبوب الطرد المركزي. يسمح وضع وسائط العزل في الأنبوب بالعمل كمرشح ، حيث أن جهاز الطرد المركزي سيجبر الدم على النزول من خلاله بعناية. ضع طبقة خمسة ملليلتر من الدم فوق NIM لفصل نظيف.

كن حذرا جدا لتجنب خلط المحاليل. قم بتنفيذ هذه الخطوة ببطء وحذر ومع وجود طرف الماصة بالقرب من سطح وسائط التحليل لمنع خلط أجهزة الطرد المركزي. الحل في 500 RCF لمدة 35 دقيقة.

عند 20 إلى 25 درجة مئوية ، يجب أن ينفصل الدم إلى ستة نطاقات متميزة. النطاقات الستة هي الخلايا الوحيدة في البلازما ، ووسائط العزل ، والعدلات ، ووسائط العزل ، وحبيبات خلايا الدم الحمراء في الأسفل. إذا لم تكن هذه النطاقات الستة واضحة ومتميزة ، فإن عملية الفصل ليست نظيفة وستحتاج إلى تكرارها.

الأسباب الشائعة للانفصال السيئ العزل القديم ، أو تناول المتبرع بوسائل الإعلام الكحول في ال 72 ساعة الماضية ، أو تناول المتبرع أدوية أخرى مثل تايلينول أو الأسبرين. قم بإزالة الخلايا الوحيدة في البلازما ووسائط العزل والتخلص منها بعناية. ضع هذه الطبقات في أنبوب قابل للغلق وتخلص بعناية من الماصة وطبقة العدلات وجميع وسائط العزل الموجودة أسفل العدلات في ملف طرد مركزي نظيف لاستعادة أكبر عدد ممكن من العدلات.

غالبا ما يكون من الأسهل تضمين بعض وسائط العزل من الطبقة أدناه أيضا. لا تزعج البليت في الأسفل. الإعلان الثاني ، صقل طبقة العدلات.

تمييع محلول العدلات إلى 10 ملليلتر مع HBSS بدون الكالسيوم. اقلب الأنبوب عدة مرات لتعليق أجهزة الطرد المركزي للخلايا. محلول العدلات.

350 RCF لمدة 10 دقائق. عند 20 إلى 25 درجة مئوية ، يجب أن تكون هناك حبيبات حمراء في قاع الأنبوب تحتوي على العدلات وخلايا الدم الحمراء المتبقية. قم بإزالة سوبرا ناتين باستخدام الماصة.

كن حذرا. لإزعاج الحبيبات في الأسفل. تحلل خلايا الدم الحمراء.

يجب الآن تدمير خلايا الدم الحمراء في العينة عن طريق التحلل. لتحلل خلايا الدم الحمراء المتبقية ، أضف ملليلترين من محلول تحلل الخلايا الحمراء إلى الأنبوب إلى إعادة الضغط. قم بتعليق دوامة الحبيبات على القارورة في إعداد من ثلاثة إلى أربعة.

تجنب زيادة إعداد الدوامة فوق أربعة لأن هذا قد يتسبب في تنشيط العدلات. قد يكون من الضروري الدوامة لعدة ثوان أو نبض الدوامة لإذابة الحنك. جهاز الطرد المركزي لمحلول التحلل عند 250 RCF لمدة خمس دقائق.

استخدم خيار البدء الناعم لتقليل الضرر الذي يلحق بالعينة. قم بإزالة supra natin مع الماصة. كرر عملية التحلل.

إذا لزم الأمر ، قم بتحرير تعليق العدلات ، أضف 500 ميكرولتر HBSS بدون كالسيوم إلى كل أنبوب. دوامة الحبيبات في إعداد من ثلاثة إلى أربعة ، تخفيفها إلى 10 ملليلتر باستخدام HPSS بدون جهاز طرد مركزي للكالسيوم. تستنشق العدلات عند 250 RCF لمدة خمس دقائق snat وتتخلص منها.

أعد تعليق الحبيبات في 250 ميكرولتر من HBSS بمحلول HSA ، مرتين في 10 إلى ستة. عادة ما يتم جمع العدلات لكل مليلتر.