Summary
여기, 우리는 테리어 사회적 스트레스 테스트 (TSST)의 수정 된 버전을 사용하여 취약한 청소년 멕시코계 미국인 샘플에서 코티솔 반응을 유발 한 프로토콜을 제시합니다. 타액 샘플은 TSST 발병 초기, 15, 30, 45 분에 수집되었다. 미래의 연구는 취약한 청소년들과 함께이 수정 된 TSST를 이용할 수 있습니다.
Abstract
Trier Social Stress Test (TSST)는 인간에서 Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) 축에 의해 생성되는 생물학적 산출 인 코티솔을 2 ~ 4 배 증가시키는 것으로 밝혀진 잘 검증되고 널리 사용되는 사회적 스트레스 요인입니다. TSST에 대한 변형이 스트레스 반응성에 미치는 영향에 대한 연구가 있었지만, 심각한 코티솔 스트레스 반응을 유발하는 취약 청소년에게 적합한 TSST를 수정 한 연구는 거의 없습니다. 따라서 현재 연구는 14 세 청소년의 취약한 표본에 대해 문화적으로 민감한 방식으로 TSST를 수정하거나 조정하려고했습니다. 현재 연구는 살리나스 (CHAMACOS)의 산모와 아동의 건강 평가 센터라고 불리는 캘리포니아 주에있는 멕시코 계 미국인 가족에 대한 종적 출생 코호트 연구의 맥락에서 이루어졌습니다. CHAMACOS 샘플은 수정 된 문화적으로 적절한 TSST의 효과를 테스트하는 데 최적이었습니다. 이는 멕시코 계 미국인 청년으로 구성되어 있기 때문에연구에서 제외 된 10 명. 이 젊은이들은 또한 초기의 심각한 삶의 역경을 경험했습니다. 예를 들어 시간에 맞춘 프롬프트, 대안 수학 과제, 동종 민족과 동등한 동료를 동반자로 사용, TSST가 끝난 직후에 브리핑, 알려지지 않은 청년 검사원이보고를 관리하는 등의 수정 작업이 포함됩니다. 타액 샘플을 기준치 (휴식기 후)에서 수집 한 다음, TSST 발병 후 15, 30 및 45 분에 다시 코티솔 농도를 평가하기 위해 수집했다. 50 명의 참가자 (50 % 여성)에 대한 시험 연구가 TSST에 대한 코티솔 반응에 대해 분석되었습니다. 결과는 TSST의이 변형 된 버전이 유의미한 코티솔 반응을 유도하는데 성공적이었으며, 개인차에 기인 한 다양한 변동성이 있음을 확인했다. 수정 및 민족성 고려 사항에 대한 목표가 논의됩니다. 이 연구는 취약한 청소년과 함께 수정 된 TSST를 활용하는 미래 연구의 기초를 제공합니다.
Introduction
Trier Social Stress Test (TSST) 1 은 실험실 환경에서 스트레스를 유발하는 데있어 가장 중요한 표준이되었습니다. Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) 축 1 , 3에 의해 생성 된 생물학적 배출량 인 코티솔 (cortisol)의 2-4 배 증가를 유도하는 것으로 입증 된 잘 입증되고 널리 사용되는 사회적 스트레스 요인입니다. 메타 분석에 따르면 TSST 3의 특징 인 예측 불가능 성 / 통제 불가능 성 및 사회적 평가 위협 (SET)과 같은 가장 중요한 HPA 반응을 유도하는 데 필수적인 두 가지 핵심 요소가 있다고 결론지었습니다.
사춘기는 SET가 특히 스트레스가 많은 중요한시기가 될 수 있으며, 민감한 발달 기간으로 표시되어 사회적 상호 작용이 학습을 용이하게합니다 4 . 예를 들어, 초기 사춘기와 청소년기에 피어 그룹과의 통합 5 명이 동기 부여가된다. 사춘기 초기에 호르몬 수치가 급격하게 증가하면 변연 회로가 발달하여 상태 관련 사회적 자극 ( 즉 , 감탄)의 처리가 동기 부여의 중요성이 증가하는 것으로 이어진다 6 . 이러한 사회적 정서적 참여의 증가는 그 순간의 동기와 행동에 영향을 줄뿐만 아니라 오랜 시간 동안의 행동 패턴과 동기 부여 학습에도 영향을 미친다. 시간이 지남에 따라 우선 순위를 부여하는 사회적 장려책의 변화는 건강 탐구와 위험 감수로 이어질 수 있으며, 이는 사회적 기능 및 정서적 학습과 성인의 사회적 기능을 뒷받침하는 기술을 촉진 할 수 있습니다. 따라서 TSST 스피치 페이즈와 관련된 사회적 기능의 측면이 청소년에게 강력한 스트레스를주는 것은 놀라운 일이 아닙니다. 즉 , "좋은 친구"라는 주제 7,8 ,그러나 외상이나 스트레스가 많은 삶의 병력에 민감하게 반응 한 사람들은 감정적 인 통제력이 약하거나 스트레스에 대한 민감성이 증가하여 사회적으로 평가되거나 예측할 수없는 상황에 잘 반응하지 않을 수 있습니다. 약물 사용이나 위험 스릴 추구와 같은 부정적인 건강 결과. 따라서 SET에 대한 생물학적 반응을 이해하는 것은 취약한 청소년에게 가장 중요합니다.
몇 가지 연구에서 SET의 변형과 통제 불가능 성이 스트레스 반응성에 미치는 영향을 조사했습니다. SET는 남부 연방 판사의 수에 따라 증감 할 수 있습니다. TSST는 2 개의 동맹국을 요구하지만, 4 인 10 인과 1 인 1 ~ 2 인의 동맹국 11 , 12 , 13 또는 가상 또는 멀리있는 관객과는 효과가 더 적습니다 14 , , 16 . 긍정적 인 해설은 SET와 응답자 비율 18을 감소시키는 반면 , 부정적인 해설을 추가하면 SET 및 응답자 비율은 11 , 17이 증가합니다. 응답 성의 비율은 (a) 참가자가 연설을 준비해야하는 시간을 수정하는 것 (b) 참가자의 정신 사회적 자원을 증가시키는 것 ( 19 , 20 , 21 ) 또는 (c) 참여자의 자신감을 높이는 것 TSST 22 . 정서 억압 23 , 스트레스 요인 24 또는 25 에 대한 경계 또는 주의력을 향상시키는 수정은 모두 TSST 반응성을 증가시킨다. 마지막으로, 죄수의 성별과 나이federate는 SET 27 , 28에 대한 스트레스 반응성에 영향을 줄 수 있습니다. 이 연구는 반응 속도가 실험적으로 증가되거나 감소 될 수 있음을 보여줍니다. 현재의 연구에서, TSST는 시간 프롬프트, 대안 수학 과제, 동종 민족의 동급 동료 사용, TSST 종료 직후의 브리핑, 알려지지 않은 청소년 심사관의보고를 관리함으로써 수정되었습니다.
최근 스트레스 요인 패러다임을 검토 한 결과, 중년기의 코티솔 상승 (HPA 반응)에 대한 사회적 평가 위협이 특히 강하게 미치는 것으로 나타났습니다 29 . 그러나 취약한 청소년과 함께 TSST를 사용하는 것에 대한 타당한 우려가 있습니다. 특히 청년이 이미 취약한 상태에 처했을 때 TSST를 견뎌내는 것과 관련된 잠재적 인 외상이 있으므로 인체 피험자의 보호 문제가 제기되어 그 이익이 위험보다 중요하다는 것을 보증 할 수 있습니다 ( 예. 30 , 31 의 상승을 유발하는 데는 제한적인 성공을 거두었습니다. 또한 TSST를 문화적으로 민감하고 적절하게 만들기 위해 수정이 필요할 수 있습니다. 예를 들어, 서로 다른 인종의 사람들과 상호 작용하여 스트레스와 위협 반응을 유발할 수 있다고 제안하는 문헌이 있습니다 32 . 참가자 및 TSST위원회의 인종 구성이 다른 것은 TSST 33에 코티솔 반응성에 영향을 미치지 않고 오히려 impTSST 34 에서 코티솔 회복 작용. 따라서 동종 / 종족 동맹자를 TSST에 사용하면 TSST에서인지 된 고정 관념 위협 및 코티솔 회복에 대한 동맹국의 불필요한 혼란을 제거 할 수 있습니다.
현재 연구는 살리나스 (CHAMACOS)의 산모와 아동의 건강 평가 센터라고 불리는 캘리포니아 주에있는 멕시코 계 미국인 가족에 대한 종적 출생 코호트 연구의 맥락에서 이루어졌습니다. 이 샘플은 높은 빈곤율 (가족 중 76 %가 연방 빈곤 수준 이하 였음)과 불리한 초기 생애 사건 (평균 생애주기 = 4.5, 샘플의 경우 SD = 3.3). 비교를 위해 미국 질병 통제 예방 센터 (CDC)와 카이저 퍼머넌트 (Kaiser Permanente)가 수천 명의 응답자를 대상으로 한 대규모 후 향적 연구는 13 %만이 4 가지 이상의 이상 반응을보고 한 것으로 나타났다소년 사건 35 .
TSST는 불리한 조기 사망 사건, 14 세 (TSST 시행 당시)의 사회적 평가 위협에 대한 생물학적 반응 및 위험을 감수하는 행동 사이의 연관성을 연구하기위한 대규모 NIH 교부금의 일부로서이 연구에서 청소년에게 투여되었습니다 (16 세, 데이터 수집은 아직 진행중이며, grant1R01DA035300). TSST 시험 초기 단계에서 우리는이 집단의 고유 한 필요에 따라 상황에 민감하게 반응하고 가난한 응답을 완화하기 위해 접근해야 할 필요가 있음을 관찰했습니다 ( 예 : 울음, 성나게, TSST에서 벗어남). 정확하게 말하자면, 우리는 개조 이전에 TSST에 대한 행동 반응이 20 % ( 예 : 20 명의 TSST 참가자 중 4 명은 분노로 울었거나 분노 함) 였지만 반면에 5 %만이 수정 된 후에 응답이 좋지 않았습니다. 연구 요원은 또한 reta의 중요성을 날카롭게 인식하고있었습니다.이 종단 적 연구에서 젊은이들. 시범 단계에서,보고 기간 중 극심한 스트레스 반응을 보이는 TSST에 반응 한 개인은 생물학적 수준에서 "비 반응 인자" 즉 코티솔 상승을 나타내지 않았다는 점에 유의해야합니다. 이러한 초기 결과의 감정적 / 생물학적 병치는 또한 TSST에 대한 적절한 생물학적 반응을 유도하기위한 최적의 조건을 만들기 위해 TSST를 수정할 필요성을 강조했다. 따라서이 연구는 청소년의 하위 표본으로부터 코티솔 반응을 유도하기 위해 변형 된 TSST의 효능에 대한 예비 증거를 제시한다.
Protocol
이 연구는 캘리포니아 대학 버클리 (University of California, Berkeley)와 샌프란시스코 캘리포니아 대학 (University of California, San Francisco)의 기관 검토위원회 (Institutional Review Board)의 승인을 받았습니다. 참가자는 오후 4시 30 분 ~ 5시 사이에 실험실에 도착할 예정이었습니다.
1. 린스 입
- 참가자에게 화장실에 가서 물로 입을 씻어 내도록 요청하십시오. 참가자에게 5 ~ 10 초 동안 냉수를 부어서 싱크대에 침을 뱉어주십시오. 이 작업은 한 번만 수행하십시오.
- 참가자에게 "타액 수집을 위해 치아에 음식물이나 부스러기가 없는지 확인하는 것"이라고 말 하십시오.
2. 휴식 기간
- 독방 방에 가셔서 최소한 10 분 동안 앉아있게하십시오. 참가자에게 연락처 정보 시트 및 일상 생활 질문지와 같은 비 침습적 또는 비 자극적 인 설문지를 작성하고 3 분의 평화로운 바다 생물의 비디오를 시청하게하십시오.
3. 타액 수집 # 1 (P다시 스트레스)
- 2 mL cryovial에 1 mL의 타액을 표시하는 선을 배치하고 참가자에게이 선에 cryovial을 채우라고 알립니다. 참가자의 타액을 2 인치 밀짚을 통해 수동적 인 침을 통해 수집하고 2 mL의 냉동고 36에 넣고 즉시 (-80 ° C) 동결시킵니다.
- 참가자에게 말하길, " 나는이 줄까지 타액으로이 유리 병을 채우라고 요청할 것입니다. 타액을 입에 넣은 다음 짚을 통해 유리 병에 넣도록하는 것이 가장 좋습니다. 샘플에 거품이 생기면 침을 내지 마십시오 - 타액이 빨대를지나 가게하십시오.이 일을하는 동안 말을하지 않으면 도움이 될 것입니다. 가래를 기침하지 않으려 고 노력하십시오. 정상적인 타액이 필요합니다. 당신의 타액 꼭지에 거품이 있다면, 그 줄로 가야합니다. 그래서 바로 액체가 타액에 지나지 않습니다. 차가워지면 말해주세요. 라인에. 여기에좋아하는 음식을 생각하면 사람들의 입에 물이 생기므로 벽에 게시 된 음식 사진을 다시 찍으십시오. (POINT OUT PICTURES).
- 참가자가 침 샘플을 채운 후에 물을 제공하십시오. 참가자가 물을 보관하도록 허용하지 마십시오. 그 / 그녀가 끝나면 다시 가져 가라.
4. 준비 기간
- 참가자들에게 "몇 분 후에 우리는 당신이 좋은 친구에 대한 5 분 연설을하고 싶습니다. 옆집에있는 두 명의 숙련 된 비평가로 구성된위원회가 있습니다. 당신의 일은 당신이 좋은 친구라고 믿게하는 것입니다. 그들은 당신이 다른 사람들에게 당신을 좋은 친구로 만들어 줄 것을 설명하기를 원합니다. 당신은 다른 사람들과 경쟁하여 당신이 얼마나 좋은지에 대해 경쟁하고 있습니다. 당신의 연설과 당신이 좋은 친구라는 것을 사람들에게 납득 시키십시오. 평론가들은 표정과 몸의 움직임을 판단하는 전문가들입니다.다른 사람들에게 연설을하십시오. 검토자가 메모를하고 있음을 알 수 있습니다. 그래서 나중에 메모를 검토 할 수 있습니다. 또한 나중에 성과를 평가할 수 있도록 비디오 테이프로 녹화됩니다.
연설을 준비하기 위해 3 분이 남았습니다. 기억하십시오, 당신의 연설은 당신을 좋은 친구로 만드는 당신에 관한 것이 무엇인지 설명해야하며, 당신이 얼마나 믿을만한 지 다른 사람들과 경쟁하고 있습니다. 그 다음에, 나는 다음 방으로 데려다 줄 것이며, 여기서 당신은 자신을 비평가에게 소개하고 5 분 연설을 할 것이다. 연설 후에 오는 또 다른 과제가있을 것이나, 연사 이후에 과제가 무엇인지 알릴 것입니다. 질문있으세요? 원한다면 메모를 쓸 수도 있지만, 그 메모를 가지고 방 안으로 가져갈 수는 없습니다. Ok, 준비를 시작하십시오. 몇 분 후에 돌아올거야. " - 참여 종이, 펜 및 클립 보드를 사용하여 메모 할 수 있습니다.
- 참가자를 홀로 방에 두십시오.
- 3 분 정도 기다렸다가 다시 방으로 들어와.
5. TSST 설정
- 참가자에게 "좋아, 이제 옆집에 가서 시작할거야."라고 말하십시오. 참가자가 메모를 작성한 경우 참가자에게서 가져옵니다. 말해봐, " 나는 너에게서 그걸 가져갈 수있어. 고마워."
- 참가자를 TSST 회의실로 걸어 가서 동맹국과 비디오 카메라와 마주 보도록 지시합니다.
- 참가자가 방에 들어가기 전에 비디오 녹화를 시작하십시오. 전체 말하기 및 수학 과제 (약 10 분 총)를 기록하십시오.
- 청소년 인터뷰 담당자에게위원회를 소개하게하십시오. "이것은 (참가자의 이름) _. _ (참가자) _이 사람들 중 누구를 알고 있습니까?"
- 참가자가 아니오로 대답하면 청소년 인터뷰 담당자에게 "알겠습니다. 시작할 수 있습니다."라고 말하십시오.
- 참가자가 예라고 응답하면, h참석자가 알고있는 사람을 표시하고 청소년 인터뷰 담당자에게 "알았어, (동맹) __, 너 자신을 변명해라. 판사는 너를 모르는 사람들 일 필요가있다. "
6. TSST 음성 작업
- 남부 동맹국 1 에게 " 왜 당신이 좋은 친구인지 말해주십시오. 지금 말하십시오 ."
- 타이머를 5 분 동안 설정하십시오. 타이머를 시작하십시오.
- 30 초 동안 침묵 한 후 다음 프롬프트 중 하나를 사용하여 참가자의 대화를 계속 유지하십시오. 30 초의 일시 중지가있을 때마다 프롬프트를 순서대로 사용하십시오.
- "아직도 시간 있습니다. 계속하십시오."
- "왜 너는 좋은 친구 니?"
- "좋은 친구 였을 때의 예를 들어주세요." 라고 말 하십시오.
- "당신이 좋아하는만큼 창조적이십시오. 왜 당신은 다른 좋은 친구입니까?"
- 위의 모든 프롬프트를 사용한 후에는"너는 아직 시간이있다. 계속 해라 ."
- 5 분 후, 남부 동맹 1에게 "멈춰주십시오. 시간이 다되었습니다." 라고 말 하십시오. (수학 과제로 진행하십시오.)
7. TSST 수학 과제
- 남부 동맹군 1 명은 "우리는 지금 당신에게 크게 뒤로 물러나라고 부탁 할 것입니다 .423에서 시작해서 7 초 뒤에 계산하십시오. 우리가 멈추라 고 말할 때까지 7 시까 지 뒤로 계산하십시오. 실수하면, 우리는 가능한 한 빠르고 정확하게하십시오. 지금부터는 423에서 시작하고 7을 뺍니다. 우리가 멈추라 고 말할 때까지 7을 계속 빼십시오. "
- 타이머를 5 분 동안 설정하십시오. 타이머를 시작하십시오.
- 참가자가 혼란스러워하는 경우, 남부 동맹국 1 에게 "그걸 반복하길 바래요?"라고 말하십시오.
- 참가자가 실수를하면, 남부 동맹 1에게 "그 '잘못되었습니다. 다시 시작하십시오. 423 - 7. "
- 참가자가 30 초 후에 큰 소리로 계산을 시작하지 않으면 동일한 프롬프트에서 위와 동일한 지침을 사용하여 다음 더 쉬운 수학 문제로 이동하십시오.
- 더 쉬운 수학 문제가 (이 순서대로) 다음과 같이 사용하십시오 :
423 - 5 =?
95 - 5 =?
66 - 3 =?
6 + 3 =? - 참가자가 각 정답 후 확인을 기다리면 멈추고 남부 동맹은 1 번 "7 시까 지 계속 계승하십시오. 실수하면 당신을 교정 할 것입니다. 그렇지 않으면 계속하십시오 "라고 말하십시오.
- 5 분 후, 남부 동맹 1에게 "시간이 다되었습니다. 다음 타액 샘플을주기 위해 옆집에 가십시오." 라고 말 하십시오.
- 참가자를 독방 방으로 안내하십시오.
8. 중지 프로토콜
- 두 동맹 자 모두가 프로토콜을 일찍 중지하도록 권한을 부여합니다. 두 동맹국은 그렇게하기 전에 서로상의 할 필요가 없습니다.
- 만약참가자가 울거나 눈물을 흘리거나, 분명히 화가 나거나 공격적이되거나, 조난을 나타내 거나 참가자가 공격적이거나 이상한 자세로 자세를 취하는 경우, 즉각적으로 가능한 한 정상적으로 프로토콜을 중지하십시오.
- "다음 시간에 , 다음 타액 샘플을주기 위해 옆집으로 가십시오. "라고 말 하십시오 .
- 다음 방으로 직접 참여하십시오.
9. 타액 샘플 # 2 (스트레스 시작 후 15 분)
- 청소년이 다음 방에 다시 들어가면 15 분 동안 타이머를 설정하십시오.
- 참여자에게 "방문을 가장 힘들게하는 부분인데, 그렇게 해 주셔서 감사 드리며 잠시 후에 이야기하겠습니다. 다른 타액을 수집해야 할 때입니다."
- 참여자가 TSST에 언급 한 내용을 참가자에게 말하면 "잠시 후에 이야기 할 수 있지만 타액 샘플을 먼저 작성하십시오.
- 2 mL cryovial에 1 mL의 침을 표시하는 라인을 놓고 파이 선으로 cryovial을 채우려는 사람. 참가자의 타액을 2 인치 밀짚을 통해 수동적 인 침을 통해 수집하고 2 mL의 냉동고 36에 넣고 즉시 (-80 ° C) 동결시킵니다.
- 참가자가 타액 샘플을 채운 후에는 물을 마시도록하십시오. 참가자가 물을 보관하도록 허용하지 마십시오. 그 / 그녀가 끝나면 다시 가져 가라.
10. 요약보고
- 참가자들에게 말하기를 "좋아요, 연설과 수학 활동에 대해 이야기 해 봅시다 당신은 이미 짐작할 수 있습니다 만, 그 활동의 모든 목적은 스트레스를 만드는 것이 었습니다."리뷰어 "가 가장 친절한 사람은 아니란 것을 눈치 챘을 수도 있습니다 세상에, 맞지? "
"글쎄, 우선, 나는 '평론가'가 연구 조교 일 뿐이라고 말하고 싶다. 그들이하는 일은 청소년들이 그 일을 할 수는 있지만, 당신이 얼마나 위대한 일을해도 긍정적 인 피드백을주지 않는 것이다.이러한 작업에 대한 귀하의 실적과 아무 상관이 없습니다 - 그들은 그들이 만나는 모든 참가자들과 동일한 방식으로 행동합니다. "
"우리는 왜 그렇게했는지 궁금해하고 있으며, 우리는 과학적으로 그 이유를 알고 있습니다. 우리는 일상 생활에서 경험하는 스트레스의 양이 이처럼 스트레스가 많은 상황에 얼마나 강하게 반응하는지 연구하고 있습니다. 이 연구는 십대들이 스트레스에 대해 다르게 반응하는 이유를 이해하는 것입니다. 우리는 스트레스 반응을 보는 방법으로 타액 샘플에서 코티솔이라고 불리는 것을 측정하고있었습니다. "
"연설과 수학이 스트레스를 받으면 당신은 혼자가 아닙니다! 우리는 연설을하고 수학을하기로했습니다. 왜냐하면 그들이 안전하다고해도 많은 사람들이 긴장하게 만든다는 것을 알기 때문입니다. 그러한 활동을 스스로 할 필요가 있었고, 우리 모두는 그것을 정말로 열심히 찾았습니다! 심지어 버클리의 과학자조차도 수학을 엉망으로 만들었습니다. 그리고 우리 모두는 '내 인생의 10 분! ' 그런 식으로 생각하니? "
"내가 언급하고 싶은 몇 가지 더 ..."
[IF VIDEOTAPED] "우리는 2 가지 이유로 비디오 테이프를 녹화했는데, 주된 이유는 우리 상사가 WE가 올바르게 활동하고 있는지 확인하는 것이므로 나중에 비디오를보고 사람들의 표정에 대한 더 많은 정보를 얻을 수도 있습니다. 십대 자녀들이 스트레스에 어떻게 반응 하는지를 보는 또 다른 방법 일뿐입니다. "
"사실은 우리가 실제로 당신을 비디오로 녹화하지 않았다는 것입니다. 카메라가 실제로 켜지지 않았습니다. 스트레스를 많이하는 행동의 또 다른 부분이었습니다."
"그곳의 사람들은 당신의 연기에 대한 노트를 쓰지 않고 있었으며, 연기의 일부로 난센스 노트를 쓰고있었습니다.
"우리는이 활동을 다른 사람에게 언급하지 말 것을 요청하고 싶습니다.비록 그들이 당신의 가장 친한 친구, 형제, 자매, 사촌, 또는 무엇이든간에 연구. 다른 사람들이 방문하기 전에이 활동에 대해 알게되면 집에서 연설을 연습하거나 여기에 오기 전에 긴장을 할 수도 있습니다. 그리고 그들은 당신이했던 것보다 완전히 다른 경험을하게 될 것입니다. 우리는 그런 일이 일어나기를 원하지 않습니다. 이게 말이 돼? 같은 이유로 부모님과 이야기 할 경우 친구 나 가족에게 이야기하지 말 것을 요청하십시오. "
"질문있으세요?"
11. 타액 샘플 # 3 (스트레스 시작 후 30 분)
- 2 mL cryovial에 1 mL의 타액을 표시하는 선을 배치하고 참가자에게이 선에 냉동 약을 채우라고 알립니다. 참가자의 타액을 2 인치 밀짚을 통해 수동적 인 침을 통해 수집하고 2 mL의 냉동고 36에 넣고 즉시 (-80 ° C) 동결시킵니다.
- 타이머를 15 분 동안 설정하십시오.
- 물 공급을 제안하십시오.k는 참가자가 타액 샘플을 완성한 후입니다. 참가자가 물을 보관하도록 허용하지 마십시오. 그 / 그녀가 끝나면 다시 가져 가라.
12. 타액 샘플 # 4 (스트레스 후 발병 후 45 분)
- 2 mL cryovial에 1 mL의 타액을 표시하는 선을 배치하고 참가자에게이 선에 냉동 약을 채우라고 알립니다. 참가자의 타액을 2 인치 밀짚을 통해 수동적 인 침을 통해 수집하고 2 mL의 냉동고 36에 넣고 즉시 (-80 ° C) 동결시킵니다.
- 참가자가 타액 샘플을 채운 후에는 물을 마시도록하십시오. 참가자가 물을 보관하도록 허용하지 마십시오. 그 / 그녀가 끝나면 다시 가져 가라.
Representative Results
샘플은 풍부하고 특성이 확립 된 코호트 연구의 일부인 14 세, 살리나스 (CHAMACOS)의 산모 및 아동 건강 평가 센터로 구성되었습니다. 이 연구는 캘리포니아의 한 농민 공동체에 살고있는 325 명의 멕시코 계 미국인 가정의 첫 번째 집단으로 구성되어 있으며 자궁에 있었기 때문에 전향 적으로 연구되었습니다. TSST는 9 세부터 추적 된 CHAMACOS 두 번째 집단에 투여하지 않았다. 청소년들은 이전 방문 (12 세)에서 풀 스케일 IQ가 70 점 미만인 경우, 과거 방문시 진료소에 극단적 인 비정상 행동이 나타나면 청소년이 모성 보고서 당 한 번 자폐증 진단을 받으면 TSST에 참여한 것으로부터 심사를 받았다. 연구에 대한 불신 / 편집증, 모성 보고서에없는 사물이나 사람을 보았을 때), 우울증 스크리너 점수가 연령과 성별에 대한 평균보다 3 SD 이상 높은 경우,그는 지난 해 갱단 싸움에 연루된 것으로보고했다. 이러한 제외 기준은 처음에 TSST에 대해 과도하게 응답 한 것을 토대로 추가되었지만 이러한 제외 기준이 최종 결과에 차이가 있는지 여부는 불분명합니다. 이러한 제외 기준 이외에 참가자는 심리적 건강 및 신체 건강에 관계없이 등록되었습니다. 결국, 264 명의 청소년이보고 된 문제가 없거나보고가 끝날 때까지 아무 문제없이 TSST를 완료했습니다. 표 1 은 제외 된 참가자의 수와 왜 제외 된 참가자의 수를 나열합니다. TSST를 완료하지 않은 사람과 그렇지 않은 사람 사이에는 인구 통계상의 차이가 없었습니다.
타액 샘플은 아이오와 주립 대학의 동료들에게 드라이 아이스로 운송 될 때까지 -80 ° C에서 보관되었습니다 ( 즉 , 바이오 안전성 레벨 II 실험실). 도착시 냉동 된 타액 샘플을 카탈로그 화하고 -80 ° C의 냉동고에 다시 넣습니다. 에분석 일에, 각 타액 샘플을 해동하고 잘 확립 된 매우 민감한 효소 면역 측정법 키트를 사용하여 24 시간 이내에 2 회 분석 하였다. 평균 intra-assay 변동 계수 (CV)는 2.25 % 미만이었고 평균 inter-assay CV는 코티솔의 경우 5.13 %였다. 중복 측정치의 CV가 7 % 이상인 경우 샘플을 재분석했습니다.
각 표본에 대한 표준 편차와 함께 코티솔 측정에 대한 기술 통계는 표 2 와 그림 1에 나와 있습니다. 네 개의 타액 샘플에 대한 성의 영향을 테스트하기 위해 2 x 4 반복 측정 ANOVA를 실행했습니다. TSST에 대한 코티솔 반응의 주 효과가 있었지만 ( F = 9.09, p <0.001), 성은 스트레스에 대한 코티솔 반응의 유의 한 예측 인자는 아니었다 ( F = 1.03, p = .39). 평균 체질량 지수는 23.53이었고 리피카의 중요한 예측 인자는 아니었다코르티솔 ANOVA ( F = 1.03, p = 0.38)를 측정 하였다. 예상 한 바와 같이, 표 3 에 제시된 쌍으로 된 표본 t- 테스트는 스트레스가 시작된 후 15 분, 스트레스가 가해진 후 15 분부터 스트레스가 가해진 후 30 분, 스트레스가 시작된 후 15 분까지 코르티솔의 유의 한 변화를 나타냈다 수질 악화 후 30 분, 수질 악화 후 45 분. 코르티솔의 가장 큰 변화는 사전 스트레스 코르티솔 농도를 스트레스 요인 후 30 분 농도와 비교할 때 발생했는데, 이는 이전 연구 (Cohen 's d = .80) 1 , 3 과 일치합니다. TSST로 어려움을 겪는 것으로 표명 된 개인은 스트레스 요인에 대한 스트레스 반응도를보고하는 경향이 있지만 연구가 끝나기 전에 정상 상태로 돌아 오는 것으로보고되었습니다. 스트레스 후 30 분 농도가 이들 샘플에서 가장 높은 농도 였지만, 스트레스 후 코티솔 농도 45 분은 개인이 시작한 것을 시사합니다스트레스 요인으로부터 회복하기 위해서는 스트레스 요인 후 45 분이 30 분 농도보다 유의하게 낮았다 ( 표 3 참조).
그림 1 : TSST에 대한 코티솔 반응. 코르티솔 반응성은 표준 편차로 플롯 한 것을 의미합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
표 1 : 제외 이유 참여자는 TSST를 시작했지만 조기에 중단되거나 참여를 거부하거나 프로젝트에서 제외되거나 프로젝트 관련 문제로 인해 건너 뛴 경우 연구에서 제외되었습니다.
표 2 : 평균 코티솔 농도와 표준 편차. 코티솔은 샘플 1-3에서 증가한 다음 샘플 4에서 감소했습니다.
표 3 : 쌍 샘플 t- 테스트. 코티솔 농도 (μg / dL)와 표준 편차 (SD)가 서로 다른 시료를 비교합니다. 베이스 라인 샘플에서 스트레스 후 샘플까지 코티솔의 유의 한 증가가 관찰되었다.
Discussion
현재의 연구는 취약한 청소년들과 함께 TSST의 수정 된 버전의 효능을 확인하고자했습니다. CHAMACOS 프로젝트는 독특하고 (멕시코 계 미국인 표본은 연구에서 제외되는 경우가 많다) 개조 된 문맥 상 적절한 TSST의 효과를 시험하기위한 최적의 표본을 제시하고 상당한 조기 생애 역경을 경험 한 청소년 표본을 대표한다. 결과는 사전 스트레스에서 스트레스 후 샘플까지 코티솔의 유의 한 증가뿐만 아니라 마지막 타액 샘플 수집 시점까지 TSST로부터의 정상적인 상대적 회복을 유발하는 변형 된 TSST의 성공을 확인합니다. 이 연구는 TSST의 문맥 적으로 적합한 프로토콜과 원래의 TSST의 수정에 영향을주는 요소의 탐색을 통해 현장에 유용한 도구를 제공합니다.
TSST의 설정 및 관리를위한 몇 가지 중요한 단계가 있습니다.참석해야합니다. 첫째, 두 동맹인은 흰색 실험실 코트를 착용하고 탁자 뒤에 앉아 비디오 카메라 녹음을하고 참가자가 방 안으로 안내되기 전에 참가자가 서있을 곳을 가리켜 야합니다. 참가자는위원회가있는 동안 TSST 전체에 걸쳐 있습니다. 둘째, 동성애자는 각 성별이 1 명일 필요가 있으며, 동맹국은 참가자와 유사한 인종 / 민족성을 지니고 있어야하며 참가자와 비슷한 연령으로 나타나야합니다 (이 연구에서는 나이가 비슷하게 생겼던 약간 나이가 많은 청소년을 대상으로했습니다. ). 셋째, 동맹국들은 프로토콜 전반에 걸쳐 약간의 지루함과 함께 평범한 영향을 보여 주어야합니다. 남부 동맹은 TSST 기간 동안 관심을 나타내지 않고 가능한 한 참가자를보아야합니다. Confederate 2는 노트를 쓰는 반면, Confederate 1은 프롬프트와 지시 사항을 관리합니다.
TSST를 감정적으로 "중성 &34; 국가는 기술과 실습을 필요로합니다. 중립적 인 얼굴을 유지할 수없는 경우 일부 개인은 동창 역할에 적합하지 않을 수 있습니다. 이 연구의 남부 동맹은 전체 TSST 동안 중립 자세를 유지할 수 있도록 직접 선정되었습니다. 그러나 참가자가 눈물을 흘리거나, 슬프거나, 공격적으로 될 경우이 요원은 프로토콜을 중단하기 위해 언제 어떻게 개입해야하는지 알 필요가 있습니다. 정서적 태도 나 대본에 드리프트가 없도록 TSST의 무결성을 조사 기간 동안 주기적으로 평가해야합니다. 이 연구에서는 TSST 관리 전문가와 함께 비정상적인 문제를 해결하고 질문으로 체크인 할 수있을 때 매주 체크인을 동맹국에 제공했습니다. TSST에서 동맹국을 재교육하기 위해 몇 달에 한 번씩 TSST "refreshers"가 제공되었습니다. 어머니가 동의 한 참여자를위한 TSST 중에 비디오가 녹음되었으며이 비디오는 TSST 스크립트의 진실성을 보장하기 위해 검토되었습니다.. 마지막으로, 일부 연구자들은 TSST에 대한 반응으로 배신이나 분노를 표출 한 참가자들이 높은 코티솔 반응을 보일 것이라고 생각할 수도 있습니다. 그러나이 연구는 이러한 청년이 코티솔 반응을 통해 평가할 때 비 반응 자 ( 즉 , 코티솔이 작업을 통해 감소하거나 안정을 유지하는 개인) 일 가능성이 가장 큰 것으로 나타 났으므로이 데이터에서이 개념을 제외시켰다. 따라서 민감한 프로토콜을 엄격하게 준수하는 것은 전반적인 반응 속도를 저해하지 않고 스트레스 요인의 도전이 이러한 청소년에게 적절한 수준으로 향상되도록 보장합니다. 따라서 표준 TSST 프로토콜은 윤리적으로나 과학적으로 모두 부적절한 것이며, 탈퇴, 무응답 및 "포기"가 주된 반응이었습니다.
원래 TSST를 통해 소수의 참가자를 실행 한 후 원래 TSST는 최적이 아닌 응답으로 인해이 인구의 상황에 맞는 요인을보다 잘 일치하도록 수정되었습니다( 즉 , 울음, 작업에서의 이탈, 공격적인 자세). 연구 인력은 취약 계층 ( 예 : 고아원, 청소년 정의 설정, 학대 된 인구)이있는 TSST를 사용한 수많은 연구원과 상담했지만이 연구의 필요에 완벽하게 부합하는 수정은 없었습니다. 일부는 프로토콜과 너무 멀어졌고 변화는 코티솔 반응을 유발하지 않을 것이다 12 , 27 . 따라서 본 연구에서는 TSST에 세 가지 기본 수정 사항이 적용되었으며 이러한 수정 사항의 수정 및 동기는 아래에 나와 있습니다.
첫째, 참가자들을 멀리하지 않는 것이 중요합니다. 이 연구에서는 스트레스 과제 관리가 중요했지만, 어머니가 임신 한 이래로 청소년들이 길게 따라 갔기 때문에 참가자들이 마찰을 잃지 않도록하는 것이 필수적이었습니다. 이 연구에서 참가자들은 dTSST 종료 직후 참여자가 스트레스를받지 않도록하기 위해 TSST 직후에 e 브리핑. 이 샘플의 경우, 디 브리핑을 관리하는 직원은 청소년에게 감정적 인 연결없이 가능한 익숙하지 않지만 여전히 공감력있는 사람이어야했습니다. 그것이 직관에 어긋나는 것처럼 보일 수도 있지만 청소년에게 친숙하고 정서적으로 연결된 직원이 TSST에서 그들을보고했을 때 젊은이들은 TSST에 대한 반항에 대한 경향이 더 많았으며 그것에 대해 더 많이 이야기하는 경향이있었습니다. 때로는 우울하거나 분개심으로 끝나는 경우가 많았습니다 "속임수"로 디 브리핑을 관리하는 친숙하지 않은 직원은 TSST를 구현함으로써 코호트가 친숙한 직원과 만든 종단적 인 관계를 끊지 않도록했습니다. 이것은 라틴계 지역 사회 내에서 중요하지만 참가자들과의 강한 공감대를 형성하는 많은 종단 연구가 고려해야 할 사항입니다. 익숙하지 않은 역 사용하기ff는 또한 익숙하지 않은 직원을 사용하여 관찰 한 최적의 행동 반응을 감안할 때, 디 브리핑이 청소년에게 더 많은 스트레스를 줄 수있는 가능성을 감소 시켰습니다. 2 개의 타액 샘플을 채취하기 전에보고하는 동안이 변형을 사용하는 연구자들에 대해 우려할만한 것이지만,이 연구는 TSST의 결론 이후에 프로토 타이컬 코티솔 반응 패턴을 관찰했다는 점에 주목해야한다 (스트레스 원 , 스트레스 요인의 종료 후 30 분 후 회복). 이 수정은 TSST 후에 취약한 상태로 인해 스트레스 반응을 계속했을 수있는 청소년에게 문화적으로 민감한 것으로 만들어졌습니다.
둘째, TSST 프로토콜은 참가자의 개별 요소에 대해 유연해야합니다. 이 연구에서 멕시코 계 미국인 청소년은 살리나스 계곡의 저소득 및 빈곤 한 농업 공동체에 거주합니다. CHAMACOS 가족의 어려운 노동특히 저임금, 간헐적 인 계절 고용 및 급격한 청소년 발달의시기에 긍정적 인 가족 관계를위한 기회를 피하는 긴 노동 시간 등이 포함됩니다. 코호트의 낮은 SES / 빈곤과 관련된 스트레스는 식량 불안정, 과밀한 주거, 표준 이하 거주 조건,인지 장애 및 정신 건강 필요를 해결하기위한 부적절한 의료 서비스에 기여합니다. 이 점을 보완하면 살리나스 계곡의 젊은이들이 가정 폭력과 청소년 폭력에 불균형 적으로 노출되어 지역 학교와 이웃으로 유출 될 수 있습니다. 이러한 위험 요소는 청소년이 급변하는 사회적 경제적 어려움에 적응하는 법을 배우거나 일상 생활의 예측할 수없는 성격에 점차 민감 해 지거나 (경우에 따라 감도를 잃어 감에 따라) 점점 더 강조됩니다. 이 집단에 대해 TSST를보다 유연하게 만드는 한 가지 예는 수학 섹션의 난이도를 다양 화하는 것이 었습니다. 주어진이 study는 이전의인지 검사에 관여하고 IQ 38에 영향을 미칠 수있는 환경 병원체 노출에 대한 지식이 있었기 때문에 TSST와 관련된 "한 가지 크기의 모든 것"수학 업무가이 인구를 수용하지 않을 것이라는 것이 분명했습니다. 다른 스트레스 원 39 , 40에 이어, 수학 난이도는 도전적이지 만 청소년에게는 불가능한 것은 아닙니다.
셋째, TSST 규약은 특정한 문화적 환경에서 지역 사회와 사회적 관계에 대한 높은 인식을 인식하고 구축해야합니다. 청소년들이 참여하는 동맹국을 이용하는 것이 중요합니다. 그래서이 연구는 참여자보다 약간 나이 많은 동료들이 같은 나이와 민족성을 나타 내기 위해 동네에서 왔고, SET는 "동료들"로부터 왔습니다. 반대로 너무 많은 사회적 연결은 문제가있었습니다. 이를 보장하는 것이 중요합니다.동맹국은 적절하게 중립이며 동맹국은 참가자들에게 알려지지 않았다. 살리나스 계곡은 상대적으로 넓은 지역이지만 청소년 공동체는 매우 작고 상호 연결될 수 있기 때문에 이것은 현재의 연구에서 매우 중요합니다. 따라서 TSST가 참가자와 동맹국이 서로를 모르기 시작하기 전에 확인하는 것이 유용 할 수 있습니다. 참여자 또는 동맹자가이 연구에서 다른 사람을 인정했다면, TSST는 오직 하나의 동맹으로 운영되었습니다. 이 연구의 동맹국이 같은 지역 사회에서 온 사실은 대학 환경과는 거리가 있고 한 번에 한두 시간 일할 수있는 직원을 찾을 때 어려울 수 있다는 점에서 중요한 의미를 지닙니다 (Salinas). 이 연구의 현장 사무소 연구원은 연구에 관해 매우 숙련되고 고도로 훈련 받았으며, 프로토콜 유지에 관해서는 당연한 것으로 받아 들여서는 안됩니다.
이러한 결과가 수정 된 TSST의 사용을 확인하는 데 유망한 반면청소년이 취약한 경우, 다른 표본에 대해 이러한 영향의 복제 가능성을 확인하기 위해서는 더 많은 연구가 필요합니다. 첫째,이 프로젝트는 멕시코 아메리카 청소년의 독특하고 취약한 표본에 접근 할 수있는 행운 이었지만이 수정 된 TSST가 코티솔 반응을 이끌어 내기에 충분히 강력하다는 것을 확인하기 위해 다른 취약한 소수 민족에 복제해야합니다. 다른 인구. 둘째,이 샘플은 14 세 아동으로 제한되었습니다. 이 표본에서 TSST 반응에 대한 나이의 영향에 대해 통제 된 좁은 표본 채집이 있지만, 미래의 연구는 사춘기와 어린 나이에 그리고 사춘기 발달 전반에 걸쳐 이러한 효과를 재현하려고 시도 할 수 있습니다. 마지막으로, 수정되지 않은 TSST를 사용하는 비교 그룹에서 데이터를 수집하지 않았 음을 유의해야합니다. 초기 샘플링에서 경험했던 빈약 한 행동 및 정서적 반응의 비율이 높고이 샘플의 경우 비 윤리적 일 것입니다 버전 oTSST.
일반적으로 TSST 기술의 한계도 있습니다. 앞에서 언급했듯이 남부 동맹국들이 TSST 전체에서 중립적 입장을 유지하는 것은 중요한 관행입니다. TSST를 적절하게 운영하는 데 최소 3 명이 필요하며 (동맹 2 명과 실험자 1 명), 참가자가 모르는 경우 TSST가 더 잘 실행됩니다. 따라서이 프로토콜은 학부생이 한 번에 2 ~ 3 시간 씩 실험실에서 근무할 수있는 대학 캠퍼스 환경에서 실행하기가 쉽지만 원격 설정이나 동창이 직장으로 지급되는 환경에서는 덜 쉽습니다 (유료 인만큼 TSST 당 ~ 1 시간 작업). 이 기술은 시간이 지남에 따라 프로젝트에서 작업하는 인력을 대상으로하는 종단 연구의 장애물 일 수도 있습니다. 이러한 잘 알려진 직원은 TSST를 관리하는 직원이 아니어야합니다. 또한 시간이 지남에 따라 TSST의 무결성을 유지하는 측면에서 상당한 오버 헤드가 있습니다 - 전문가는 비디오 테이프를 검토해야합니다TSST의 주간지 점검, 동맹국과의 주간 점검을 유지하며, 기술에 드리프트가 없도록 주기적으로 "리프레셔"세션을 제공합니다. 또한, TSST는 사소한 속임수에 의존하기 때문에 주어진 참가자에게 반복적으로하기가 어렵고 참가자들은이 기술에 익숙해 질 수 있습니다. 말하기 및 수학 부분은 균형이 맞지 않아 자율 신경계 기능과 같은 다른 방법론에 더 적합합니다. TSST에는 스트레스가없는 부분이 없으므로 다른 세션 ( 즉 , 친숙한 TSST 또는 위약 TSST) 또는 비 스트레스 비교가 필요한 다른 항목 ( 즉 , 기초 일)이 필요합니다. 마지막으로, 실험실 이외의 스트레스 요인이 더 효과적 일 수 있습니다 ( 예 : 노래방, 롤러 코스터 또는 유령의 집).
이 연구는 취약한 청소년과 함께 수정 된 TSST를 활용하는 미래 연구의 기초를 제공합니다. 미래의 세로데이터 수집의 여러 단계에서 참여자를 유지하려는 연구는 마찰을 제한하기 위해 이러한 수정 중 일부를 활용하여 접근 방식을 수정해야 할 수도 있습니다. 또한,이 연구는 실제로 문화적으로 민감한 TSST의 변형 된 버전을 만들면서 스트레스 반응성을 적절한 수준으로 조정하여 코르티솔 반응성의 개인차를 포착 할 수 있음을 보여줍니다.
Acknowledgments
저자는 CHAMACOS 연구에 참여한 부모와 청소년 들께 감사드립니다. 우리는 또한 연구에 참여한 CHAMACOS 직원, 특히 Katherine Kogut, MS,이 연구를 위해 프로젝트 매니저로서했던 모든 일에 감사드립니다. 저자는 또한 국립 약물 남용 연구소 (National Absorber) 보조금 1R01DA035300을 인정하고자합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| TSST | |||
| 2 white lab coats | Dickies | 83403 | For confederates |
| 2 clip boards | Staples | 21423 | For confederates |
| 2 pens | BIC | GSM609-Blk | For confederates |
| Table | Ikea | B00EYU3E7I | For confederates to sit behind |
| Video Camera & Tripod | Sony | K-86674-05 | |
| Paper | Generic | For participant's preparation period | |
| Saliva samples | |||
| Latex gloves | Fisher Scientific | 19041171C | To collect saliva samples |
| 2 mL cryovials | Wheaton | W985872-100 | 4 per participant |
| 80 °C freezer | So-Low | U85-13 | |
| 2'' straws | Genuine Joe | GJO58925 |
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