方法文章

大鼠外周全血细胞免疫表型和因子生成的单细胞分析

DOI：

10.3791/57780

⸱

2018年6月26日

 ,  ,  ,  , 
1Department of Immunology and Microbiology, University of Colorado School of Medicine, 2OMNI Biomarkers, Development Sciences, Genentech, 3Department of Pediatrics, Division of Allergy and Immunology, University of Colorado School of Medicine

* These authors contributed equally

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

在这里, 我们描述了一个单细胞蛋白质组学方法, 以评估免疫表型和功能 (细胞因子诱导) 改变周围全血标本, 分析通过大规模细胞术。

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

细胞因子在自身免疫性疾病的发病机制中起着举足轻重的作用。因此, 对细胞因子水平的测量一直是多项研究的重点, 试图了解导致自我耐受和随后的自身免疫性崩溃的精确机制。迄今为止的方法都是基于对免疫系统的一个特定方面 (单个或少数细胞类型或细胞因子) 的研究, 并且不提供对复杂自身免疫性疾病的全球评估。虽然以血清为基础的研究为自身免疫提供了重要的洞察力, 但它们并没有给出失调细胞因子的特定细胞来源。本文介绍了在 "固有" 患者特定血浆循环因子的背景下, 综合评价多种免疫细胞亚群细胞因子生成的综合性单细胞方法。这种方法可以监测患者特定的免疫表型 (表面标记) 和功能 (细胞因子), 无论是在其本机 "固有致病性" 疾病状态, 或在存在的治疗药物 (在体内或体内).

引言

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

自身免疫性疾病是影响3-8% 人口发病率和死亡率的主要原因。在美国, 自体免疫性疾病是青年和中年妇女死亡的主要原因 (年龄 < 65 岁)1,2。自身免疫性疾病的特点是异质临床表现和多种基础免疫学过程。非均质谱在不同的疾病中有很好的表现, 如联合参与类风湿关节炎 (RA) 和多发性硬化症 (MS) 的神经系统疾病。然而, 这一水平的异质性也表现在单一的紊乱, 如系统性红斑狼疮 (SLE): 一些病人可能出现肾脏病理, 而其他人患有血液或联合介入3。

自身免疫性疾病的潜在发病反映了临床异质性, 包括多先天和自适应免疫细胞亚群的自动和超活化, 以及伴随失调细胞因子的产生。虽然细胞因子在自身免疫性疾病的发病机制中起着举足轻重的作用, 但了解其在疾病机理中的具体作用已证明是具有挑战性的。细胞因子的特点是多效性 (一个细胞因子可以对不同的细胞类型有多种影响), 冗余 (多个细胞因子可以有相同的效果), 二元性 (一个细胞因子可以有亲或抗炎作用在不同的条件下),和可塑性 (细胞因子可以塑造成一个角色不同于它的 "原物" 一, 取决于环境)4,5,6。因此, 人口水平的方法不能区分异质细胞对同一 "细胞因子环境" 的反应。同样, 研究的设计, 专注于免疫系统的一个特定方面 (单一细胞类型或细胞因子), 不提供全球评估所有的因素涉及复杂的自身免疫性疾病。虽然以血清为基础的研究为自身免疫提供了重要的洞察力, 但它们并没有给出失调细胞因子的特定细胞来源。

最近, 我们开发了单细胞蛋白质组学方法, 同时评估多种免疫细胞类型, 并检测其在特定的 "致病性" 外周血血浆循环因子的环境中的各种细胞因子扰动。这里描述的工作流的特点是使用完整的周围全血样本, 而不是孤立的外周血单个核细胞 (PBMCs)。外周全血代表最生理相关的车辆, 以研究系统性免疫介导的疾病, 包括 1) 非单核血细胞经常参与自身免疫性疾病 (即中性粒细胞, 血小板) 和 2) 血浆诸如核酸、免疫复合物和细胞因子等循环因子, 具有免疫激活作用。为了捕捉 "内在致病性" 失调细胞因子的产生, 外周血标本立即处理后, 血液提取 (T0, 时间零), 并在6小时的孵化后37°c (生理体温) 与蛋白质运输抑制剂在没有任何外源刺激条件 (T6, 时间6小时), 以检测细胞因子的生产 (积累, T6-T0), 这将反映 "内在" 疾病状态 (图 1)。为了研究反应信号通路在与疾病相关的免疫应答中的失调过程, 外周血样本被治疗 (6 小时孵化37°c 与蛋白质转运抑制剂) 与外源刺激的条件, 反映疾病的发病机制, 例如, 在 SLE (T6 + R848, 时间6小时与1µg/毫升 R848) 的情况下类似的像样受体 (TLR) 激动剂, 以检测细胞因子的产生, 反映对核酸的反应 (比较 T0 和 T6 vs T6 +R848,图 1)。为了研究可用疗法的免疫调节作用, 因为它们与特定患者的精确免疫失调过程有关, 所以在相关治疗中用 JAK 抑制剂治疗外周血标本。集中 (这里, 5 uM ruxolitinib;T6 + 5R, 时间6小时与 5 uM ruxolitinib), 以检测 "内在" 疾病状态的变化反应的药物 (T0 vs T6 vs T6 + 5R,图 1)。为这项研究选择了 JAK 抑制剂, 因为 JAK 抑制剂已证明是成功的治疗自身免疫性疾病, 如 RA。

为了同时评价上述在多免疫细胞亚群中的失调过程, 对 SLE 患者的外周血样本和健康控制进行了处理, 并通过质细胞术进行了分析。质细胞术, 也称为细胞术-飞行时间, 提供了40多个参数的单细胞分析, 没有光谱重叠7,8,9的问题。这种技术利用稀土金属同位素的形式, 可溶性金属离子作为标签绑定到抗体, 而不是显影10。关于质量细胞术技术平台的其他细节 (即调谐和校准, 样品采集) 可以在 Leipold 等和麦卡锡等中找到 。11,12高维度的大规模细胞术能够同时测量的多种细胞因子整个先天和自适应免疫细胞亚群与单细胞粒度 (材料表)。

目前的常规临床和实验室参数往往不敏感或具体到足以检测正在进行的疾病活动或对特定的免疫调节剂13的反应, 反映了需要更好地描绘潜在的免疫驱动 flare 的更改。鉴于细胞因子失调在自身免疫性疾病中的普遍存在, 大量的治疗方法使用的抗体或小分子抑制剂靶向细胞因子或信号蛋白参与调控细胞因子的生产有最近出现。在它的基本格式, 这里描述的外周血分析方法提供了一个平台, 以确定病人特定的失调细胞亚群和他们的异常细胞因子产生的自身免疫性疾病的系统性表现。这种方法允许个性化的治疗选择, 因为具体的失调细胞因子可以确定, 和特定的治疗方案, 可以测试在体内, 以评估他们的能力 immunomodulate 病人特定的疾病过程。

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方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

这里描述的所有方法都已被科罗拉多大学的科罗拉多多机构审查委员会 (COMIRB) 批准。所有描述的程序应在无菌组织培养罩中执行, 除非另有说明, 过滤的吸管提示, 所有试剂过滤。

1. 外周全血处理试剂的制备

  1. 按照制造商的说明 (存储在-80 摄氏度), 在10毫米的 ruxolitinib 上, 根据生产商的指示, 对亚砜中的冻干试剂进行稀释, 准备整除数 (10–15 ul/小瓶)。在所有化验中保持亚砜浓度, 包括静态控制在0.2% 以下 (卷/卷)。
  2. 在1微克/ul R848 (resiquimod) 库存整除数 (10–15 ul/小瓶), 稀释无菌水中的冻干试剂作为每个制造商的指示。存储在-80 摄氏度。
  3. 在1微克/ul 中, 根据制造商的指示, 在无菌水中稀释冻干试剂, 制备脂多糖 (LPS) 库存整除数 (每瓶 5 ul 一次)。存储在-80 摄氏度。
  4. 使用 PBS、0.5% BSA 和0.02% 南3制备细胞染色培养基 (CSM)。
  5. 获取并保持准备蛋白转运抑制剂 (公共交通) 鸡尾酒 (材料表)。
  6. 解冻和稀释 ruxolitinib 瓶 (10 毫米) 1:10 在无菌 PBS (1 毫米)。放置在室温下的组织培养罩。
  7. 解冻和稀释 R848 瓶 (1 微克/µL) 1:10 在无菌 PBS (0.1 微克/µL)。放置在室温下的组织培养罩。
  8. 解冻和稀释脂多糖瓶 (1 微克/µL) 1:100 在无菌 PBS (0.01 微克/µL)。放置在室温下的组织培养罩。
  9. 在标准的37°c 水浴 (至少10分钟) 前温暖的无菌 RPMI (无 l-谷氨酰胺)。
  10. 将溶解/固定缓冲器稀释 1:5, 过滤 ddH2O (工作浓度) 在台式上 (不需要无菌)。
    注: 1 毫升的全血需要20毫升的工作浓度的溶解/固定缓冲。
    1. 使溶解/固定缓冲器的5条件1毫升的全血每 (至少100毫升)。整除20毫升的工作浓度的溶解/固定缓冲器成50毫升圆锥管每毫升的全血 (保持溶解/修复解决方案在37°c, 直到需要)。对包含溶解/固定缓冲器的锥形管上的条件进行标记, 如下所示: T0 (时间零), T6 + 5R (时间6小时与 5 uM ruxolitinib), T6 + R848 (时间 6 h 以1微克/毫升 R848), T6 + LPS (时间 6 h 以0.1 微克/毫升 lps), T6 (时间 6 h)。
  11. 标签圆底无菌聚苯乙烯管与帽和1毫升离心管与步骤1.10 相同的名称。

2. 对周围全血的刺激和处理 (图 1)

  1. 将标记的圆底聚苯乙烯管从步骤 1.11 (T0、T6 + 5R、T6 + R848、T6 + LPS、T6) 放置在机架上。
    注意: 除非另行指定, 否则在这种类型的管道中执行以下所有步骤。在组织培养罩和孵化器之间进行转移, 以维持不孕。
  2. 添加1毫升37°c RPMI (无 l-谷氨酰胺) 的每一个管 (T0, T6 + 5R, T6 + R848, T6 + LPS, T6)。反转采血管几次, 每管加1毫升的全血, 和吸管上下几次混合彻底与 RPMI (稀释与 RPMI 防止在6小时潜伏期的血液聚集)。
  3. 添加 10 ul 的 1:10 ruxolitinib 到 T6 + 5R。与 P1000 吸管彻底混合。将管架放在孵化器的37摄氏度, 开始定时孵化 (T = 0)。
  4. 按照以下步骤处理 T0 示例。
    1. 将 T0 管的全部内容注入一个含有20毫升37°c 工作浓度溶解/固定缓冲器的标记圆锥管。为优化细胞恢复, 用工作浓度溶解/固定缓冲液冲洗管。通过反转圆锥管混合。
    2. 孵育在37°c 15 分钟, 以使溶解和固定。在固定后, 执行所有后续步骤在台式。在室温下, 离心细胞在 500 x g 处为5分钟。
    3. 醒酒上清。并用重悬1毫升的冰冷 PBS 中的细胞分解颗粒, 然后用 PBS 填充圆锥到15毫升的体积。
    4. 在室温下将细胞以 500 x g 为5分钟离心。醒酒上清。重复 PBS 洗涤 (步骤 2.4. 3–2.4 4) 如果小球是红色的。并用重悬1毫升内的细胞分解颗粒, 然后转移到标记的离心管 (步骤 1.11) 进行抗体染色。用一个10µL 的样本来计算使用自动单元计数器或 hemocytometer 的单元格。
      注: 由于所有细胞都是固定的, 在这一点上, 没有必要包括生存的污点。
    5. 在室温下将细胞以 500 x g 为5分钟离心。吸上清液, 将颗粒留在60µL 的残余容积中。把这个颗粒放在冰上, 直到其他条件的样品完成处理。
  5. 在 T = 30 分钟, 将管架 (步骤 2.3) 移动到组织培养罩并执行以下操作。
    1. 添加 10 ul 的0.1 微克/ul R848 到 T6 + R848。与 P1000 吸管彻底混合。
    2. 添加 10 ul 的0.01 微克/ul lps 的 T6 + lps。与 P1000 吸管彻底混合。
    3. 添加 4 ul 的蛋白转运抑制剂 (股票在 500X) 到 T6, T6 + 5R, 和 T6 + LPS (但不是T6 + R848), 并返回到孵化器的样品, 直到 T = 6 h. 每2小时与一个 P1000 吸管彻底混合。
      注: R848 是一种内质 TLR 激动剂, 因此需要在增加蛋白转运抑制剂的时间延迟, 以允许进入其目标受体。
  6. 在 T = 2 h, 添加 4 ul 的蛋白转运抑制剂鸡尾酒 (股票在 500X) 到 T6 + R848 管。将所有样品与 P1000 吸管混合, 并将机架返回到孵化箱, 直到 T = 6 小时。
  7. 将样品与 P1000 再混合一次, 在 T = 4 小时。
  8. 在 T = 6 h, 处理 T6, T6 + LPS, T6 + R848, T6 + 5R 血液样品管如步骤2.4 中所述 T0 样品。
  9. 将细胞小球储存在-80 °c 的残余 CSM 体积内, 以处理未来的日期。或者, 进行条形码和抗体染色而不储存。

3. 裂解/固定血细胞条码

  1. 在冰上慢慢解冻裂解/固定细胞样品从-80 °c 存贮;最多有20个样本可以用独特的条形码标记, 并使用这个系统进行汇集。用 PBS 稀释10X 条形码烫发缓冲器 1:10;使足够的缓冲区为每样3毫升。
  2. 用 CSM 和1X 条形码烫发器填充一个无菌槽。加入1毫升的冰冷 CSM 到新鲜解冻的样品, 与吸管彻底混合, 并转移到各自预先标记的聚丙烯集束管。
  3. 用一个 10 ul 样本来计数细胞使用自动的细胞计数器或 hemocytometer。将单元格计数规范化为每个簇管中每个样本的 1.5–2 x 106个单元格: 移除并丢弃超过 2 x 106个细胞的多余细胞的体积。
  4. 在室温下将细胞以 600 x g 为5分钟离心。并用重悬在1毫升1X 条形码烫发缓冲细胞与多通道吸管和离心机在 600 x g 5 分钟室温。从上清中吸取。
  5. 按条形码键上指示的顺序将机架上的簇管排成一行, 以便示例与条形码匹配。添加 800 ul 1X 条形码烫发缓冲通过多通道吸管到所有样本的集束管没有接触的细胞颗粒与吸管提示 (不混合), 以减少细胞损失。用集束管把架子搁在一边。
  6. 去除20丛 Pd 条形码试剂盒从-20 °c 和解冻在室温下。添加 100 ul 1X 条形码烫发缓冲器, 彻底混合, 并转移 120 ul 的悬浮条码混合到相应的细胞样本在集群管。
  7. 通过多通道吸管彻底混合, 使单独条形码样品之间没有交叉污染。在室温下孵化出30分钟的聚束管, 允许条形码对细胞进行标记。
  8. 离心机在室温下为 600 x 克, 5 分钟。吸入上清, 然后并用重悬1毫升的 CSM。
  9. 离心机和并用重悬在 CSM 再次像在步骤3.8。
    注意: 每个示例现在都用一个唯一的条形码进行标记, 并且样品可以被汇集。
  10. 离心机在室温下 600 x 克, 5 分钟, 吸上清液。用单吸管和使用相同的尖端, 转移所有细胞颗粒在〜 70–80 ul 残余体积到一个聚苯乙烯管。不要弹出吸管尖端;用这个尖端把单吸管放在一边。
  11. 用多声道吸管和新的提示, 添加〜 100 ul CSM 每一个原始的集束管, 以最大限度地恢复细胞。用单吸管与提示预留, 转移所有细胞颗粒在 100 ul 剩余体积到同一聚苯乙烯管。
  12. 添加 CSM 到顶部的聚苯乙烯管 (~ 3 毫升)。计数并记录池内条形码集的单元格号。离心机在室温下 600 x 克, 5 分钟, 吸上清液。在同一天对条形码样品进行染色。
    注意: 在条形码过程中期望20–30% 细胞丢失是正常的。

4. 条形码裂解/固定血细胞染色及质量细胞仪分析的制备

注: 染色抗体的每1X 滴度 (1 ul 抗体每 100 ul 染色反应), 通常可以染色 3–4 x 106细胞。因此, 当所有的条形码样本被汇集成一个管, 抗体的数量必须扩大。如果20条形码样品共计 30 x 106个细胞, 并且每1X 滴度能染色 3–4 x 106个细胞, 条形码样品只需要10X 滴度, 相反单独地染色每个样品, 需要20X 抗体 (1X 每单独管)。抗体浓度的细胞数应仔细滴定每一个抗体鸡尾酒 (这里没有讨论)。

  1. 用抗体 (材料表) 染色细胞, 用于表面染色和细胞因子诱导。
    1. 通过计算要添加的量和吹打错误 (例如, 如果在每个样品中染色 2 x 106个细胞的20条形码样本, 就需要进行表面染色鸡尾酒; 对于最终的卷计算,通过制作10.5X 最终染色液来补偿吹打误差)。
    2. 添加10X 的表面染色量的条形码细胞颗粒。为了减少细胞损失, 用同样的尖端, 混合和测量表面污渍和细胞颗粒的体积。
    3. 根据细胞体积和染色鸡尾酒, 增加 CSM 到最终染色量 50 ul 每数量的细胞样本 (即, 如果运行一组20样品, 50 ul X 20 = 1 毫升)。孵育30分钟, 在4摄氏度。每15分钟搅动样品以促进均匀染色。
    4. 在表面染色孵化过程中, 用过滤后的 ddH2的稀释 1:10, 准备烫发/洗涤缓冲器 (材料表), 准备通透2毫升的容积, 以及5毫升的洗涤。保持在4摄氏度或冰上。
    5. 顶部的表面染色管与 CSM, 和离心机在 600 x g 在4°c 5 分钟。并用重悬条形码样品在2毫升4°c, 1:10 稀释烫发/洗涤缓冲器。孵育在4°c 20–30分钟完全 permeabilize 细胞。
    6. 离心机在 600 x g 在4°c 5 分钟和吸入上清。
    7. 对于细胞内染色, 遵循类似的染色步骤 (如表面染色)。然而, 使用4°c, 1:10 稀释烫发/洗涤缓冲, 而不是 CSM, 使总染色量, 使细胞保持在一个 permeabilizing 的环境中整个细胞内染色。
    8. 添加细胞内抗体鸡尾酒的表面染色和透细胞颗粒 (步骤 4.1. 2–4.1 17)。将总染色量的 50 ul 每数量的细胞样本。孵育60分钟, 在4摄氏度。每15分钟搅动样品, 以确保均匀染色。
    9. 在细胞内染色时, 准备 intercalator 溶液: 900 ul 的过滤 PBS + 100 ul 的过滤16% 粉煤灰 (最终浓度1.6% 粉煤灰) + 0.2 ul 的 500 uM 的 intercalator 染料 (材料表)。
    10. 顶出细胞颗粒 + 细胞内抗体鸡尾酒与冷1:10 烫发/洗涤缓冲。
    11. 离心机在 600 x g 在4°c 5 分钟, 并吸入上清。顶部的染色管与 CSM。计数并记录单元格号。离心机在 600 x g 在4°c 5 分钟, 并吸入上清。从步骤4.9 并用重悬1毫升的 intercalator 溶液中的细胞。在室温下孵育至少20分钟以充分插层, 或隔夜在4摄氏度 (intercalator 溶液中的样品可以停留在4摄氏度, 直到1周, 然后再在质量细胞仪上运行它们)。
  2. 为大众细胞术仪器准备细胞。
    1. 顶出管与3毫升过滤 ddH2O, 和离心机在 600 x g 5 分钟在4°c。并用重悬在3毫升的过滤 ddH2o 的细胞通过这个悬浮通过100微米的过滤器, 以消除任何碎片或聚集可能会堵塞的大规模细胞术的仪器。
    2. 计数并记录过滤后的细胞数。离心机在 600 x g 5 分钟在4°c
  3. 通过稀释1:10 在过滤 ddH2O 准备定标珠解答 (材料表)。
  4. 并用重悬染色细胞在所需体积的1:10 稀释校准珠溶液, 以达到细胞浓度为 ~ 1 x 106细胞/毫升。
    注: 对于 CyTOF1 在45µL/分钟, 推荐的最佳是 5 x 105细胞/毫升;为太阳神在30µL/分钟, 7.5 x 105细胞/毫升。
  5. 继续运行该样本的大规模细胞术仪器9。

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结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

图 1展示了用于刺激和处理外周血液样本的工作流, 包括血液样本整除数的分配、添加刺激剂的时间、蛋白质转运抑制剂鸡尾酒和孵化时间直到红细胞 (红细胞) 溶解和固定。刺激剂的选择取决于要评估的信号和细胞因子通路。例如, 在这里描述的协议中, TLR 激动剂被用来评估不同细胞类型的先天免疫传感机制。选择了代表性细胞外 (LPS, TLR4 激动剂) 和内质 (R848, TLR7/8 激动剂) 激动剂。其他刺激剂包括佛波 12-酯 13-醋酸酯和 Ionomycin (PMAIONO), 可作为 T 细胞活化剂。特异的细胞因子也可以作为刺激剂, 以及其他特定的 B 和 T 细胞抗原。

为了演示本协议中描述的实验方法,图 2、图 3和图 4<...

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讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

在这里, 我们描述了一个新的, 单细胞, 蛋白质组学方法, 同时评估多种免疫细胞类型和检测其各种细胞因子扰动的环境中的患者特异性 "致病性" 外周血血浆循环因素。该方法采用外周全血作为分析载体, 以质细胞仪作为评价免疫细胞表型和功能异常的工具。该方法易于应用于人体和小鼠的研究21, 并与其他免疫功能分析 (如检测信号异常14) 兼容。

用户应该认识到一些可能影响此过程成功的变量。根据我们的经验, 应在2小时内处理血液样本, 以避免细胞内细胞因子的基线诱导 (未显示数据)。血液样本应保持室温 (25 °c), 同时等待处理。血液样本可以收集在肝素钠或 EDTA 管, 不干预的描述化验。应用顺铂22进行大容量细胞术, 可评估活细胞和死体细胞的鉴别。但是, 上述评估在上文所述的议定书中省略, 假定血液在收集后立即处理 (或在2小时以内)。此外, 即使样品在加工过程中被延迟, 由于缺乏冷冻保存, 也不能忽略活/死的歧视。不过, 我们建议使用顺铂进行...

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披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者没有什么可透露的。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

我们要感谢艾米 Pugh-伯纳德对她的智力投入和有益的评论。这项工作得到了 Boettcher 基金会韦伯-华林生物医学研究奖和 K23-1K23AR070897 从 NIH 到埃琳娜 W.Y. 谢的奖励数字的支持。她还得到了来自尤尼斯肯尼迪K12-HD000850 国家儿童健康和人类发展研究所以及露塞尔儿童健康基金会、斯坦福 CTSA UL1 TR001085 和儿童健康研究协会颁发的奖项编号的支持。斯坦福大学研究所。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
RuxolitinibSanta CruzSC-364729A原液浓度：10 mM;最终浓度：5 μM
R848Invivogentlrl-r848-5库存浓度： 1 μg/μL;最终浓度： 1 μg/mL
LPS-EKInvivogentlrl-eklps库存浓度： 1 μg/μL;最终浓度： 0.1 μg/mL
无菌 PBSLonza17-516F
裂解/固定缓冲液BD biosciences558049储备液浓度：5X;最终浓度：1X（在 ddH2O 中稀释）
BD Phosflow 渗透/洗涤缓冲液 IBD biosciences 557885原液浓度：10X;最终浓度：1：10（在 ddH2O 中稀释）
RPMIGibco21870-076
叠氮化钠 （NaN3）Sigma-AldrichS-8032原液浓度：>99.9%;最终浓度：0.0002
蛋白质转运抑制剂 （PTI）eBiosciences00-4980-93原液浓度：500X;最终浓度：1X
DNA 嵌入液201192B储备浓度：500 &μ;M;最终浓度： 0.1 μM
细胞染色培养基 （CSM）PBS + 0.5% BSA，0.02% NaN3
MaxPar 条形码 Perm 缓冲液流体201057原液浓度：10X;最终浓度：1X
20 重 Pd 条形码组FluidigmS0014库存浓度：n/a;最终浓度：n/a
EQ TM 四元件校准珠Fluidigm201078库存浓度：10X;最终浓度：1X
16% 不含 MeOH 的甲醛溶液Thermo28908原液浓度：16% （w/v）;最终浓度：1.6% （w/v）
无菌圆底聚苯乙烯管VWR60818-496原液浓度：n/a;最终浓度：n/a
聚丙烯簇管Light LabsA-9001库存浓度：n/a;最终浓度：n/a
Helios CyTOF 仪器FluidigmHelios用于 CyTOF 分析的所有溶液都需要没有金属污染。ddH 2 O 用于制备任何溶液，电阻率应至少为 18.0 MΩ。cm. ddH 2 O 和任何自行制备的溶液应储存在从未高压灭菌过的新塑料瓶或玻璃瓶中。
名称Company目录号评论
用于质谱流式细胞术的抗体
表面标志物
CD1cBiolegendL161质量：161
CD3BDUCHT1质量：144
CD4BiolegendSK3质量：174
CD7BDM-T701质量：149
CD8BiolegendSK1质量：142
CD11bfluidigmICRF44质量：209
CD11cBDB-ly6质量：152
CD15BDHI98质量：115
CD14BiolegendM5E2质量：154
CD16eBioscience/ThermoB73.1质量：165
CD19Santa CruzSJ25C1质量：163
CD21BiolegendBu32质量：141
CD27BDL128质量：155
CD38FluidigmHIT2质量：172
CD45 总BiolegendHI30质量：89
CD45RABiolegendHI100质量：153
CD56MiltenyiREA196质量：168
CD66BDB1.1/CD66质量：113
CD86FluidigmIT2.2质量：150
CD123Fluidigm6H6质量：143
CD278/ICOSBiolegendC398.4A质量：156
CD179/PD1BiolegendEH12.2H7质量：162
IgDBiolegendIA6-2质量：146
IgMBiolegendMHM-88质量：151
CXCR5BDRF8B2质量：173
HLADRBiolegendL243质量：167
<强>细胞因子
IL-1&α;Biolegend364-3B3-14质量：147
IL-1&β;生物传奇 H1b-98质量：169
IL-1RA圣克鲁斯 AS17质量：157
IL-6BiolegendMQ2-13A5质量：164
IL-8BDE8N1质量：160
IL-12/IL-23p40Biolegend C8.6质量：171
IL-17A生物传奇 BL168质量：148
IL23p19eBioscience/Thermo23dcdp质量：176
MIP1βBDD21-1351质量：158
MCP1BD5D3-F7质量：170
IFNα米尔特尼 LT27：295质量：175
IFNγ生物传奇4S。B3质量：165
PTENBDA2B1质量：159
TNFαBiolegendMab11质量：166
注：如果制造商声明为 Fluidigm，则该抗体购自 Fluidigm，金属预偶联。如果制造商声明为 Fluidigm 以外的制造商，则该抗体是使用 MaxPar 多金属标记进行自偶联的 试剂盒 （Fluidigm Cat： 201300） 根据制造商方案。

参考文献

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