5.5: 啮齿动物鉴定 (2)

1. 尾部纹身

尾部纹身很容易阅读, 不需要处理动物.

图1。成年老鼠的尾巴纹身

1. 根据制造商和 #39 的说明准备纹身设备。少量墨水是必需的。黑染料应用于白化小鼠或大鼠, 绿色染料的色素小鼠或大鼠.
2. 为识别准备动物.
   注意: 为了尽量减少忧虑或苦恼, 应在手术室而不是在动物居住区进行尾部纹身。
   1. 适当地限制动物进行纹身, 以使运动最小.
   2. 断奶大鼠使用塑料缺口杯进行克制, 在纹身平台上的螺栓下固定杯子的唇, 并通过缺口延伸到尾部.
   3. 成年小鼠可以通过一杯抑制剂来克制, 尾巴从开口处拉紧, 杯子的法兰通过平台或其他装置举行.
   4. 用棉签擦拭后用少量的稀释组织清洁剂清洁尾部。成年大鼠通常有规模和尾部的碎片堆积, 必须在应用纹身之前清洗。肥皂和水擦洗的尾巴将清除大部分的污垢和碎片。在继续之前先把尾巴干好.
   5. 在纹身前用棉签将组织油涂抹在皮肤上。组织油是必要的, 以减少组织损害, 软化皮肤和润滑纹身针。此外, 油溶解任何污垢没有清除的清洗过程和防止油墨染色的 nontattooed 皮肤.
3. 应用纹身。
   1. 将针的尖端浸入颜料中, 并关闭机器.
   2. 用脚踏板激活的枪将针头的尖端带到纹身站点.
   3. 在一个方向上使短, 甚至笔画。数字和字母应该用这样的方式纹身, 以便它们以最小的角度和曲线 (可能时) 的片段构造.
   4. 深穿透到真皮中, 用针进行永久性色素沉积。激活针的声音的变化可以帮助辨别深度.
   5. 用针接近皮肤 90 ^o 角度来充分沉积颜料.
4. 后纹身清除和护理
   1. 印迹 (不擦) 已完成的纹身过量颜料与纸巾.
   2. 纹身或纸巾上的血迹表明纹身的深度太深, 因此不太可能是永久性的.
   3. 用附加色素增强纹身字符的薄区域。字符是加强与色素沉积平行, 但不是在上面, 已经沉积颜料.
   4. 添加额外的色素, 将针尖浸入染料库中, 每两个字符为小鼠和每一个字符的老鼠.
   5. 褪色纹身的原因包括色素含量不足, 纹身太浅, 纹身太深, 针头不合适的角度, 使用钝或钩针, 或纹身太快.
   6. 根据制造商和 #39 的说明在每次使用后彻底清洗纹身设备

2。新生儿脚趾纹身

实验性协议可以要求新生儿的基因分型早于第一天, 这就使得这些幼崽必须被永久性地识别。使用脚趾纹身允许动物识别, 直到它们足够大的耳朵标签或耳朵冲压.

图2。对新生鼠进行文身的适当抑制技术。柳叶刀的尖端有绿色的染料.

1. 约束 preweaned 的 pup。
   1. 将手上的新生儿放在纱布垫上。将脚放在食指的拇指和钩之间, 露出所选择的脚趾或脚趾, 以进行纹身.
   2. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止它弯曲掉.
   3. 定位脚时不要 overtwist 腿。受约束的幼崽可能会摆动, 但没有必要听到发声.
2. 准备设备。
   1. 选择 4.5 mm 黄花动物柳叶刀.
   2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
   3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
   4. 只使用少量的粘贴.
3. 应用纹身。
   1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
   2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
   3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
   4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
4. 后纹身清理和护理
   1. 用吸水擦拭/毛巾轻轻涂抹斑点以去除多余的糊状物.
   2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
   3. 将动物返回笼子.
   4. 当护理幼崽被纹身时, 最好也刺青大坝。这可能会阻止她对幼崽的反应过度, 这可能导致过度梳理纹身.
   5. 对每个垃圾使用新的柳叶刀.
   6. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

3。成年大鼠和小鼠的脚趾纹身

当一窝新生儿被纹身时, 建议母亲也要纹身, 这样她的幼崽身上的糊状物就不是她的外型了.

1. 对该动物的限制。
   1. 通过使用塑料锥或有机玻璃抑制剂来约束动物, 使其能够进入后脚.
   2. 将脚从约束装置中伸出.
   3. 在食指的拇指和钩之间放置脚, 以露出所选的脚趾或脚趾, 以进行纹身
   4. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止脚趾弯曲掉.
   5. 定位脚时不要 overtwist 腿。受限制的成年人可能会试图撤回脚.
2. 准备设备。
   1. 选择 5 mm 黄花动物柳叶刀.
   2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
   3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
   4. 只使用少量的粘贴.
3. 应用纹身。
   1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
   2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
   3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
   4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
4. 后纹身清理和护理
   1. 轻轻地在吸水性擦拭/毛巾上涂抹斑点, 以去除多余的浆糊.
   2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
   3. 将动物返回笼子.
   4. 对每种动物使用新的柳叶刀.
   5. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

4. 晶片

RFID 芯片的植入是一种用于识别动物的常用方法.

1. 将微芯片装入变更, 或选择预加载的注射器.
2. 用有机玻璃约束管抑制动物, 使其能够在肩部上抓取皮肤.
3. 帐篷的皮肤, 创造一个口袋.
4. 将针放在皮肤上, 向上倾斜并平行于脊柱, 并将其指向尾部.
5. 弹出微芯片.
6. 取出针头并在注射点处捏紧皮肤。这样可以防止微芯片从皮肤中取出针。继续施加压力, 为任何皮肤出血提供止血.
7. 从约束装置中取出动物并扫描芯片以确认识别码.

图3。成年大鼠的微芯片植入.

5. 小鼠的临时鉴定

无毒染料和动物标记物可用于小鼠的临时鉴定.

1. 限制鼠标, 使肩胛骨之间的区域可用于毛皮上的标记.
2. 在该区域的毛皮上放置一个标记、斑点或条纹的染料。该区域用于防止动物在梳理时去除标记.
3. 如果将标记作为唯一标识符使用了几天, 请定期检查它.
4. 尾部也可以用于短工期。然而, 动物可能会去除它的标记, 而梳理.

6。老鼠的临时识别

1. 抑制鼠, 使染料或标记应用的区域易于访问。在某些情况下, 当只需要一个条纹或点, 动物将不需要被限制, 但允许自由移动在笼子里.
2. 手动约束通过抓住尾巴和保持它绷紧, 而应用识别通常是这样做的.
3. 临时固定使用吸入麻醉剂可以为脾气暴躁的动物做.
4. 如果使用此方法作为唯一标识符超过几天, 则定期检查标记.

识别个体研究动物的能力是科学记录保存和数据收集的一个重要方面。区分动物可确保将正确的受试者用于预期的实验程序。

科学家们使用几种永久和临时方法来识别个体实验动物。在本视频中，我们将讨论涉及成年啮齿动物尾巴、新生儿脚趾和成年脚趾纹身的方法。接下来，我们将介绍通常在成年大鼠中进行的微芯片放置技术，然后是利用无毒染料的通用临时识别方法。

在深入研究这些方法的方案之前，让我们回顾一下这些技术的注意事项、优点和缺点。尾巴纹身在许多研究方案中都是有益的，例如涉及 MRI 成像的实验或动物在遗传上易患皮肤病（包括溃疡性皮炎）的实验。尾巴纹身的另一个优点是它们很容易被看到，而不必手动约束动物。

某些实验方案要求最早在第一天就对新生儿进行基因分型，这使得永久识别这些幼崽变得至关重要。使用脚趾纹身可以识别这些动物，直到它们大到可以贴耳标或打耳。在成年母亲身上纹上类似的脚趾纹身是个好主意，以防止她反应过度和过度梳理幼犬的新纹身。虽然使用这种方法有几个优点，但缺点是该程序需要技巧、练习、稳定的手和专门的设备。

正在考虑的下一个永久识别方法是微芯片。虽然植入微芯片是一个相对简单的过程，但有几个因素限制了它的实用性。首先，这些芯片大约有一大粒米那么大，需要一个 10-12 号的针头进行植入，这对老鼠来说太大了，因此将该方法限制在成年大鼠身上。其次，微芯片价格昂贵，因此不适合识别大量动物。最后，微芯片不能用于涉及 MRI 的实验。但是，如果有一组有价值的动物，例如必须永久识别具有独特基因的饲养动物，则可以使用微芯片。

我们将讨论的最后一种方法是使用无毒标记物进行临时识别。无毒标记用于为研究动物的皮毛着色。这种方法非常适合短期研究，这些研究只需要在几个小时或几天内识别动物，尽管染料可以在几周内保持可见。一些研究人员将这些标记与其他识别方法结合使用，以轻松发现群体中的特定动物。

现在我们已经讨论了背景，让我们学习一下程序，从尾巴纹身开始。在这里，我们将在成年小鼠上演示该程序，但同样适用于断奶和成年大鼠。

为了尽量减少对动物的任何担忧或痛苦，尾巴纹身应在手术室而不是动物饲养区进行。在纹身之前，用杯形限制器束缚鼠标，将尾巴从开口处拉紧。吸盘的法兰通过专用玻璃平台固定到位。接下来，用棉签蘸少量稀释的组织清洁剂清洁尾巴。此步骤对于去除任何可能干扰纹身的水垢和碎屑堆积很重要。接下来，用另一根棉签将组织油涂抹在尾部皮肤上。这通过软化皮肤并为纹身针提供润滑来最大限度地减少组织损伤。此外，油可以溶解清洁过程未去除的污垢，并防止未纹身的皮肤上沾上墨水。现在你已经准备好应用纹身了。

当机器关闭时，将纹身针的尖端（柳叶刀或皮下注射针）浸入色素中。接下来，使用脚踏板激活枪，将纹身工具放在尾部，然后将针尖带到纹身部位。用 90 度的针头接近皮肤？角度并深入真皮层，使色素永久沉积。激活针头的声音变化有助于辨别深度。在一个方向上均匀地短笔画，形成数字和字母。纹身时尽量使用最小的曲线和角度。

要添加额外的色素，请将针尖浸入染料储液器中，小鼠每 1-2 个字符，大鼠每 1 个字符。用纸巾吸干完成的纹身以去除多余的色素。纹身或纸巾上有血迹表明纹身太深，因此不太可能是永久性的。通过将针平行于已经沉积的颜料而不是顶部，用额外的颜料增强薄字符。每次使用后彻底清洁纹身设备，并在笼子之间使用新的或消毒的针头和新的墨水，以防止疾病传播。

接下来，我们将学习如何将脚趾纹身应用于新生儿和成人。在这里，我们将在小鼠中演示该程序，但相同的步骤也适用于大鼠。

新生儿的脚趾上有纹身，因为尾骨没有骨化，尾巴的长度太小。此外，随着尾巴的生长，皮肤会被拉伸，数字可能会变得扭曲、模糊和难以阅读。首先在无孔表面（如铝箔）上放置一点绿色纹身膏。接下来，用纱布垫将断奶前的幼犬放在手中。将脚放在拇指和食指弯之间，露出选定的脚趾进行纹身。将脚靠近脚趾，使所选脚趾后面有一个坚实的表面，以防止其弯曲。

现在，将 4.5 毫米柳叶刀的尖端浸入纹身膏中。然后，根据预定的代码戳所需的脚趾。为确保正确渗透，请戳同一位置 3 次。充分渗透皮肤，使糊状物留下痕迹，但避免戳得太深以至于脚趾流血。用纱布轻轻吸干新纹身，去除多余的纹身膏，然后将动物放回笼子里。为下一窝使用新的柳叶刀。手术后一天，确认纹身可见。

当哺乳幼崽纹身时，建议也纹上母犬。这可以防止她反应过度和过度梳理小狗的纹身。要给成年人纹身，首先要在铝箔上放一小块绿色纹身膏。然后，使用允许进入后脚的塑料锥体或有机玻璃限制器约束动物。将脚从约束装置中伸出，将脚放在拇指和食指弯之间，露出选定的脚趾进行纹身。

现在，将 5 毫米柳叶刀的尖端浸入纹身膏中。而且，和以前一样，通过戳和刺穿所需脚趾的皮肤至少 3 次来纹身，以确保正确渗透。接下来，轻轻吸干纹身以去除多余的糊状物，然后将动物放回笼子里。与新生儿一样，在手术后一天验证纹身。如果纹身后的第二天可以看到标记，则应在动物的一生中保持可见。如果它很模糊或不可见，请按照前面描述重做纹身。

我们将讨论的下一个识别方法涉及将微芯片植入啮齿动物体内。通常用于标记实验室动物的芯片是射频识别 （RFID） 芯片。通常，芯片预装在针中，然后可以将其放入涂布器中。插入芯片时，使用有机玻璃管约束动物，确保您仍然可以抓住肩膀上的皮肤。首先，在皮肤上搭帐篷以创建一个口袋。然后将针头穿过皮肤，斜向上，平行于脊柱，并指向尾部。皮下弹出微芯片并拔出针头。捏住注射部位闭合的皮肤，以防止芯片跟随针头从皮肤中脱落。继续施加压力，为任何皮肤出血提供止血。将动物从约束装置中取出，并使用制造商提供的阅读器扫描芯片以确认识别码。

最后，让我们学习如何将临时染料应用于啮齿动物以进行鉴定。让我们从老鼠开始。首先，约束动物，使肩胛骨之间的区域可以接触到。身体的这一部分不会自我梳理。在该区域的毛皮上放置染料的斑点或条纹，然后将动物放回笼子中。

对于大鼠，通过抓住尾巴并拉紧它来手动约束动物。这确保了染料应用区域易于接近，可以是头部、肩部或臀部。在毛皮上放置染料的斑点或条纹。有时可以在不约束动物的情况下使用无毒染料。定期检查这些动物身上的标记，特别是如果您将它们用作唯一标识符超过几天。

现在我们已经回顾了这些不同鉴定方法的程序，让我们看看科学家们今天如何在不同的研究中使用它们。

在行为实验中使用啮齿动物是很常见的。在这里，研究人员使用尾巴纹身来永久标记动物，然后在人工建造的家笼环境中观察它们几天。收集的数据揭示了在手术后 10 天内，对照动物和实验动物之间的行为差异，例如移动的距离。

在另一项行为实验中，研究人员对新生儿进行了脚趾纹身，并将其放入带有特殊麦克风的记录盒中，以记录超声波发声。该实验的目的是观察野生型和 Shank2 缺陷小鼠（一种超过 12 天新生儿期和成年期的自闭症模型）的叫声率（即每分钟发声次数）的差异。

最后，如前所述，使用无毒染料是标记动物进行短期实验的有效方法。在这里，科学家们对血浆蛋白的瞬时表达感兴趣。因此，他们用临时标记标记动物，静脉注射质粒 DNA，并在两天后收集血液样本，以使用 western blot 技术确定蛋白质表达。

您刚刚观看了 JoVE 对纹身、微芯片放置和实验室小鼠和大鼠临时识别方法的介绍。动物鉴定是研究中记录保存的主要组成部分。因此，在选择合适的鉴定方法时，必须考虑许多因素。这包括动物的不适程度、技术的难易程度、实验需求，最后是与该方法相关的成本。一如既往，感谢您的观看！