从尾鳍组织提取DNA：斑马鱼基因分型中常用的方法

- 开始 的 实验步骤 由 放置 一个 麻醉的 成年 鱼 开启 a 堆栈 的 吸收剂 纸张 现在 使用 a 无菌的 剃刀 刀片 到 切割 的 尾部 fin 和 快速地 转移 的 鱼 到 a 储液罐 含有 新鲜 水 用于 恢复 转移 的 尾部 夹子 到 a 清洁 管 含有 a 裂解 缓冲液 这 裂解 缓冲液 含有 非离子型 去垢剂 哪个 溶解 的 血浆 膜 和 的 细胞核 膜 的 a 细胞 该 缓冲液 也 含有 一个 酶 称为 蛋白酶 K 那 断裂 向下 蛋白质 和 使能够 的 释放 的 DNA 进入 的 裂解液 它 也 降解 核酸酶, 保护 的 DNA 从 核酸酶 消化

现在， 离开 的 管 与 尾部 夹子 在 一个 培养箱 过夜 到 完全地 中断 向下 的 组织 在 55 度 摄氏度 与 连续的 旋转 接下来， 热 的 管 在 95 度 摄氏度 用于 15 分钟 到 灭活 蛋白酶 K. 离心 的 管 到 沉淀物 未消化的 材料 和 转移 的 上清液 含有 DNA 到 另一个 管 添加 酒精 到 沉淀物 的 DNA 和 离心机 再次 到 收集 的 DNA 在 a 沉淀物 在 的 随后 方案 我们 将 分离 DNA 从 的 尾部 夹子 的 一个 成年 斑马鱼 和 从 a 整个 胚胎

- 开启 的 天 的 的 DNA 制备 添加 新鲜 蛋白酶 K 到 的 裂解 缓冲液 在 a 浓度 的 1 毫克 每 毫升 组织 能 是 收集 从 一个 成年 鱼 使用 a fin 夹子 或 从 一个 胚胎的 鱼

首先， 麻醉 的 鱼 在 三卡因 溶液 等待 直到 的 鳃 运动 缓慢。 然后， 放置 的 鱼 开启 a 堆栈 的 组织 以及， 与 a 无菌的 剃刀 刀片， 切割 关闭 a 小 块 的 的 尾部 fin 关于 2 至 3 毫米 长。 快速地 放置 的 鱼 在 a 标记的 储液罐 与 新鲜 水 用于 恢复

挑选 向上 的 fin 夹子 与 a 无菌的 移液器 尖端 和 转移 它 进入 a 管 已填满 与 一百 微升 的 DNA 裂解 缓冲液 是 当然 到 标签 两者 的 动物的 储液罐 和 的 管 孵育 全部 的 收集 组织 用于 在 最少 四 小时 和 上 到 过夜 在 55 度 摄氏度

之后 的 孵育， 灭活 的 蛋白酶 K 由 加热 的 管 在 95 度 摄氏度 用于 15 分钟 这些 样品 应该 是 使用 用于 PCR 立即 但 能 也 是 储存的 在 负 20 度 摄氏度 用于 向上 到 三 个月