DNA-Extraktion aus dem Schwanzclip: eine Methode zur Genotypisierung von Zebrafischen

- Beginnen Sie die Prozedur, indem Sie einen betäubten erwachsenen Fisch auf einen Stapel saugfähigem Papier legen. Schneide nun mit einer sterilen Rasierklinge die Schwanzflosse ab und setze den Fisch schnell in ein Aquarium mit Süßwasser zur Erholung. Übertragen Sie den Schwanzclip in ein sauberes Röhrchen, das einen Lysepuffer enthält. Der Lysepuffer enthält nichtionische Detergenzien, die die Plasmamembran und die Kernmembran einer Zelle solubilisieren. Der Puffer enthält auch ein Enzym namens Proteinase K, das Proteine abbaut und die Freisetzung von DNA in das Lysat ermöglicht. Es baut auch Nukleasen ab und schützt die DNA vor der Nukleaseverdauung.

Lassen Sie nun die Röhrchen mit den Schwanzklammern über Nacht in einem Inkubator, um das Gewebe bei 55 Grad Celsius mit kontinuierlicher Rotation vollständig aufzubrechen. Erhitzen Sie anschließend das Röhrchen 15 Minuten lang bei 95 Grad Celsius, um die Proteinase K zu inaktivieren. Zentrifugieren Sie das Röhrchen, um unverdautes Material zu pelletieren, und übertragen Sie den Überstand mit der DNA in ein anderes Röhrchen. Fügen Sie Alkohol hinzu, um die DNA auszufällen, und zentrifugieren Sie erneut, um die DNA in einem Pellet z