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从尾夹中提取DNA:斑马鱼基因型平中使用的方法

 
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从尾夹中提取DNA:斑马鱼基因型平中使用的方法

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- 开始程序,将麻醉的成年放在吸水现在使用无菌剃须刀片切割,并迅速转移到含有淡水鱼缸进行回收。 转移到包含裂解缓冲器干净中。裂解缓冲液包含非离子洗涤剂,溶解血浆细胞 缓冲器含有一种叫做蛋白酶K的酶,这种分解蛋白质,使DNA释放到裂解物中。 它还降解核糖核酸,保护DNA免受核糖脂消化。

现在,带尾的管子留在孵化器过夜,以连续旋转55 摄氏度下完全分解组织接下来, 95 摄氏度下加热子 15 分钟使蛋白酶 K.子离心机未消化的材料,并将含有DNA超自然物质转移到另一个管子上。加入酒精,使DNA沉淀,然后再次心,颗粒中收集DNA。 下列协议中,我们将成年斑马鱼整个胚胎分离出DNA。

-DNA制备的当天裂解缓冲器加入新鲜蛋白酶K,浓度为每毫升1毫克组织可以使用胚胎成年鱼类中采集

首先,三合一溶液麻醉等到移动缓慢。然后,放在纸巾上无菌剃须刀刀片长约23毫米迅速放入贴有淡水标记水箱中,以便恢复。

无菌移液器尖端拾取,将其转移到装满一百微升DNA裂解缓冲器管子里定要动物的罐子管子贴上标签。在摄氏55下,将所有采集的组织孵化至少4小时,并通宵进行

孵化通过95摄氏度的温度下加热管子15分钟来灭活蛋白酶K,这些样品立即用于PCR,也可以储存在零下20摄氏度温度下长达3个月。

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