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꼬리 클립에서 DNA 추출

 
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꼬리 클립에서 DNA 추출 : 제브라 피시 Genotyping에 사용되는 방법

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- 흡수성 용지 더미에 마취 된 성인 생선을 배치하여 절차를 시작합니다. 꼬리 클립을 용해 완충제를 함유한 깨끗한 튜브로 옮기십시오. 리시스 버퍼에는 세포의 플라즈마 막과 핵막을 용해시키는 nonionic 세제가 포함되어 있습니다. 버퍼에는 단백질을 분해하고 용해로 DNA의 방출을 가능하게 하는 단백질 효소 K라는 효소도 함유되어 있습니다. 소화.

이제 연속 회전으로 55도의 조직을 완전히 분해하기 위해 하룻밤 동안 인큐베이터에 꼬리 클립이있는 튜브를 둡니다. 다음으로, 튜브를 15도에서 가열하여 단백질Ae K. 원심분리기를 비활성화하여 소화되지 않은 물질을 펠릿으로 만들고 DNA를 포함하는 수퍼네티를 다른 튜브로 이송합니다.

- DNA 준비 당일, 밀리리터당 1밀리그램의 농도로 용해 완충제에 신선한 단백질아제 K를 첨가합니다.

먼저, 트리카인 용액으로 물고기를 마취합니다. 아가미 의 움직임이 느려질 때까지 기다립니다.

멸균 파이펫 팁으로 클립을 들고 DNA 용해 버퍼의 100 마이크로 리터로 채워진 튜브로 옮길 있습니다.

인큐베이션 후, 15분 동안 95도에서 튜브를 가열하여 단백질Ae K를 비활성화합니다.

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