肝转移的临床前小鼠模型
September 27th, 2014
通过hemispleen注射技术进行肝转移的临床前，小鼠模型。
该程序的总体目标是通过半脾技术创建肝转移的临床前镜像胰腺癌模型。这是通过首先创建培养的 pan O2 肿瘤细胞的单细胞悬液来实现的。该程序的第二步是挤出和分裂完全麻醉的小鼠的脾脏。
下一步是将肿瘤细胞注射到单个半脾中，并切除注射的半脾。最后一步是关闭腹部并将小鼠从麻醉中恢复过来。最终，通过监测生存率、肝脏坏死检查和其他无创影像学检查，可以获得显示转移性疾病进展差异的结果。
这些技术可以帮助回答癌症研究领域的关键问题，例如确定转移过程中的关键因素、测试新型治疗药物和进行肿瘤免疫学研究。该技术的意义延伸到胰腺癌的治疗，因为免疫功能正常的小鼠经历相同的肿瘤接种，在准备手术之前持续发展肿瘤和 atic 一致的时间点。在 PBS 中以每毫升 2000 万个细胞储存在冰上，准备 panco 两个细胞。
接下来麻醉一只 8 至 12 周龄的雌性 C 57 黑六只小鼠。然后使用分次剂量，然后通过测试小鼠的反射来确保小鼠被麻醉。根据需要给予额外剂量，用软膏照料小鼠的眼睛，然后继续剃腹部。
剃须后，用 70% 乙醇和碘的交替磨砂膏清洁皮肤。然后覆盖鼠标。从左肋下切口开始，与左耳对齐，使用手术刀穿过皮肤和腹膜。
然后通过沿切口的颅骨和侧部同时施加数字压力，通过切口挤出脾脏。可见脾脏，找到脾下端的血管。接下来，分脾。
将两个 horizon 中等大小的结扎夹放在其中心。小心脾极的脾血管。它们很容易损坏。
现在，将脾脏的上极放回腹膜中以避免污染。首先将 150 微升 PBS 吸入 26 号 5 8 英寸注射器中，准备肿瘤注射。然后将 100 微升准备好的 Panko 两个冰细胞吸入同一个注射器中。
保持注射器直立，使各层不会混合太多，然后再将注射针头浸入 70% 乙醇溶液中。然后用注射器直立慢慢将细胞注射到暴露的半脾中。通过脾囊观察注射器的斜面，以确保脾脏下的细胞没有受伤。
注射后脾脏应变白。现在抬高脾脏并在脾脏下方应用一个中等水平夹以阻塞脾血管。然后将一个小的水平夹套在胰腺和脾血管的最远端。
夹子就位后，通过在夹子上方切割来结扎来自半脾脏的胰腺和脾管。结扎后，将小鼠侧放并用蒸馏水冲洗切口。通过用四根 oh 连续缝合线闭合腹膜来完成手术。
然后应用两到三个皮肤夹以闭合皮肤切口，立即以每公斤 4 毫克的剂量皮下注射卡洛芬以减轻术后疼痛。将鼠标转移到加热垫上，直到它可以移动并有规律地呼吸。不要将老鼠送回其他动物的陪伴下，直到它表现出正常的呼吸并正常移动 手术后 30 至 60 天，老鼠将开始出现转移的临床症状并需要安乐死。
一旦动物没有反应，就用剪刀在腹膜上切开一个切口，露出腹部。然后用镊子和剪刀小心地将肝脏与腹部隔离。使用液氮将肝脏转移到 OCT 化合物中快速冷冻，并将肝脏储存在零下 80 摄氏度。
或者，将肝脏在室温下在 16% 中性缓冲液福尔米中固定 24 小时，然后用石蜡固定。用于处理的嵌入。介绍的是创建胰腺肝转移的技术。
在 100 多只正确加工的小鼠中，100% 使用 panco 两个肿瘤细胞注射到半脾中，形成肝转移。此外，在迄今为止进行的所有实验中从未观察到肺和腹膜转移。Panko：两只未经治疗的注射小鼠在 30 至 60 天内死于肝转移。
在尸检中，总是观察到多个肝转移，注射其他细胞导致类似的转移，例如 KPC 肿瘤细胞。KPC 肿瘤细胞是一种同基因胰腺肿瘤细胞系，来源于具有组织特异性 KRAS 和 P 53 敲入突变的小鼠。通过已知的治疗，可以抑制或延迟转移的形成。
因此，这可能是测试新治疗药物的有效模型。另一种可以使用的工具是小动物超声，它允许对肝脏进行体内分析，具有足够的分辨率以查看在此发展之后发展中的转移。这项技术为肺癌研究探索转移过程以及测试胰腺癌的新型治疗药物铺平了道路。
看完这个视频，你应该对如何使用半脾技术建立肝转移的临床前镜像胰腺癌模型有一个很好的了解。
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概述
本文描述了一种通过半脾注射技术研究肝转移的临床前小鼠模型。该方法使用培养的胰腺肿瘤细胞创建一个模拟胰腺癌进展的模型。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 肿瘤学
- 临床前研究
背景
- 肝转移是癌症治疗中的一个重大挑战。
- 创建可靠的动物模型对于研究癌症进展至关重要。
- 半脾注射技术为模拟转移提供了一种新方法。
- 了解体内肿瘤行为可以带来更好的治疗策略。
研究目的
- 开发一个准确反映胰腺癌转移的小鼠模型。
- 评估肿瘤细胞在肝脏中的转移进展。
- 评估半脾注射技术的有效性。
使用的方法
- 培养的胰腺肿瘤细胞的单细胞悬液的制备。
- 在麻醉小鼠上进行的半脾注射技术。
- 注射后存活和疾病进展的监测。
- 利用肝脏尸检和非侵入性成像进行评估。
主要结果
- 成功建立了小鼠胰腺癌模型。
- 观察到转移性疾病进展的差异。
- 通过生存监测和成像技术收集的数据。
- 对胰腺肿瘤转移行为的洞察。
结论
- 半脾注射技术有效用于模拟肝转移。
- 该模型可用于进一步研究胰腺癌疗法。
- 结果突出了临床前模型在癌症研究中的重要性。
常见问题
Executive Industry Relevance
This preclinical murine model enables biopharma R&D teams to study hepatic metastases in a syngeneic immunocompetent system, supporting target validation and mechanistic de-risking for pancreatic cancer therapeutics. By consistently generating liver metastases without lung or peritoneal spread, the model provides a disease-relevant system for evaluating therapeutic efficacy and tumor immunology. It bridges discovery and preclinical stages by offering quantitative survival and imaging endpoints for go/no-go decisions.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses in pancreatic cancer metastasis using syngeneic tumor cells.
- Operational Value: Enables functional target validation through consistent hepatic metastasis formation.
- Scientific Value: Supports predictive confidence by modeling clinical metastatic patterns in immunocompetent mice.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated biological systems for downstream therapeutic agent testing.
- Operational Value: Standardizes metastasis induction via hemispleen injection for reproducible compound evaluation.
- Scientific Value: Provides quantitative readouts via survival monitoring and liver necropsy for assay optimization.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Aligns with disease relevance by mimicking human hepatic metastatic progression.
- Operational Value: Ensures translational continuity from discovery through preclinical validation.
- Scientific Value: Facilitates risk-adjusted advancement decisions based on metastasis inhibition or delay.
Pipeline & Workflow Integration
The model integrates into the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, supported by its ability to monitor metastatic progression over time.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification in metastatic cascade.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility through standardized hemispleen injection.
- Analytics: Enables quantitative measurements of survival, imaging, and necropsy for comparative condition analysis.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity via therapeutic intervention studies in metastatic liver burden.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable platform for multiple therapeutic modalities and immunology studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation and reduction of mechanistic ambiguity in metastasis.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of hepatic metastasis induction.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on metastasis modulation.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine surgery, anesthesia, and aseptic technique.
- Dependent on instrumentation for hemispleen injection, ligation, and imaging.
- Necessitates cross-team standardization for survival monitoring and necropsy protocols.
- Involves adaptation considerations across syngeneic tumor cell lines (e.g., Pan02, KPC).
- Limited to hepatic metastasis study; does not model lung or peritoneal spread per source observations.
