Methodenartikel

Split-Ubiquitin Basierend Membrane Yeast Two-Hybrid (Mythos) System: Ein wirksames Instrument zur Ermittlung von Protein-Protein-Wechselwirkungen

DOI:

10.3791/1698

⸱

1. Februar 2010

 ,  ,  , 
1Department of Biochemistry, University of Toronto, 2Department of Molecular Genetics, University of Toronto, 3Terrence Donnelly Centre for Cellular and Biomolecular Research (CCBR), University of Toronto

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MYTHOS ermöglicht den empfindlichen Nachweis von transienten und stabilen Wechselwirkungen zwischen Proteinen, die im Modellorganismus Saccharomyces cerevisiae exprimiert werden. Es wurde erfolgreich angewendet, um exogene und Hefe integrale Membranproteine ​​zu studieren, um ihre Interaktionspartner in einem hohen Durchsatz Weise zu identifizieren.

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die grundlegenden biologischen und klinischen Bedeutung von integralen Membranproteinen veranlasste die Entwicklung einer Hefe-basiertes System für die Hochdurchsatz-Identifizierung von Protein-Protein-Interaktionen (PPI) für full-length Transmembranproteine. Zu diesem Zweck entwickelt unser Labor das Split-Ubiquitin-basierten Membrane Yeast Two-Hybrid (Mythos) System. Diese Technologie ermöglicht den empfindlichen Nachweis von transienten und stabilen Protein-Wechselwirkungen mit

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hintergrundinformationen

Protein-Protein-Interaktionen (PPI) sind die grundlegenden Bausteine ​​in über alle zellulären Prozesse beteiligt. Daher ist es wichtig, dass alle Interaktionen fest geregelt sind, um zelluläre Homöostase, wie eine Verschiebung in diesem biologische Gleichgewicht im Allgemeinen spielt eine Rolle bei Erkrankungen und Krebs Zelltransformation. Membran-assoziierten Proteine ​​gehören zu den biologisch wichtigen Klasse von Proteinen, wie sie komplexe Signalkaskaden auslösen kann, und vermitteln sowohl den Import und Export verschiedener Moleküle, darunter Medikamente, die der jüngsten Bedeutung im Bereich der Gesundh....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MYTHOS ist das erste System mit hohem Durchsatz, die die Identifizierung von Wechselwirkungen zwischen full-length Membranproteinen und cytosolische oder membrangebundene Partnern ermöglicht. Es wurde verwendet, um Membranprotein aus einer Reihe von Organismen [3-7] zu studieren. Es gibt jedoch bestimmte Details, die müssen unter die Lupe, um sicherzustellen, das Protein-of-interest zugänglich ist mit MYTHOS Studie werden können.

Viele membrangebundene Proteine ​​sind an die Plasmamembran üb.......

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Igor Stagljar ist ein Mitbegründer der Dualsystems Biotech, Schweiz.

Danksagungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wir möchten Morgenröte Edmonds für eine kritische Lektüre des Manuskripts danken. Die Stagljar Labor wird aus Mitteln der kanadischen Stiftung für Innovation (CFI), die Canadian Institute for Health Research (CIHR), der Heart and Stroke Foundation, die Canadian Cancer Society und Novartis unterstützt.

....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Polymilchsäure (PEG3350)BioShop CanadaPEG335
Lithiumacetat-DihydratBioShop CanadaLIA001
X-Gal (5-Brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid)BioShop CanadaXGA001
N,N-DimethylformamidBioShop CanadaDMF 451
3-Amino-1,2,4-triazol (3-AT)BioShop CanadaATT124
Natriumphosphat, dibasischBioShop CanadaSPD307
Natriumphosphat, monobasischFisher ScientificBP329-500
Lachsfisch-Sperma-DNAVWR internationalCA80601-120
D-GlukoseBioShop CanadaGLU501
LB-Bouillon, LENOXBioShop CanadaLBL405
Hefe-Stickstoff-BasisBioShop CanadaYNB406
HefeextraktBioShop CanadaYEX401
PeptonBD Biosciences211677
Bio-TryptonBioShop CanadaTRP402
AdeninsulfatBioShop CanadaADS201
L-UracilBioShop CanadaURA241
L-ThreoninBioShop CanadaTHR002
L-HistidinBioShop CanadaHIS200
L-MethioninBioShop CanadaMET222
L-ValinBioShop CanadaVAL201
L-PhenylalaninBioShop CanadaPHA302
L-IsoleucinBioShop CanadaISO910
L-TyrosinBioShop CanadaTYR333
L-LeucinBioShop CanadaLEU222
L-ArgininBioShop CanadaARG006
L-TryptophanFisher ScientificBP395-100
L-LysinBioShop CanadaLYS101
L-AlaninFisher ScientificBP369-100
AgarBioShop CanadaAGR001
Soda-Lime-GlasperlenBiospec Products11079105
NatriumchloridBioShop CanadaSLD002

Referenzen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stagljar, I., Fields, S. Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies. Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).
  2. Iyer, K. Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid s....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden

Genehmigung beantragen

Schlagwörter

Split Ubiquitin Systemintegrale MembranproteineSaccharomyces cerevisiaeFluoreszenzmikroskopieHefetransformationReportergenexpressionDeubiquitinierungsenzymeBait Prey Interaktion

Verwandte Artikel