Diese Operationstechnik veranschaulicht die Injektion von Gentherapie-Vektoren und Stammzellen in den subretinalen Raum des Auges Maus.
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Methodenartikel
Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Der Verlust der Sehkraft betrifft etwa 3,4 Millionen Menschen in den Vereinigten Staaten und wird voraussichtlich in den kommenden Jahren zu erhöhen. 1 Kürzlich, Gentherapie und Stammzelltransplantationen sind zu den wichtigsten therapeutischen Ansätzen zur Behandlung von Blindheit infolge degenerativer Netzhauterkrankungen. Verschiedene Formen der autologen Transplantation für altersbedingte Makula-Degeneration (AMD), wie Iris Pigmentepithel-Transplantation haben ermutigende Ergebnisse erzeugt und klinischen Studien am Menschen sind für andere Formen der Gen-und Stammzelltherapie begonnen. 2 Dazu gehören RPE65 Genersatz Therapie bei Patienten mit angeborenen Amaurose Leber und einem RPE Zelltransplantation Verwendung von humanen embryonalen Stammzellen (ES-Zellen) in Stargardt-Krankheit. 3-4 Da es mittlerweile Gentherapievektoren und Stammzellen für die Behandlung bei Patienten mit retinalen Erkrankungen ist es wichtig zu überprüfen, diese mögliche Therapien im Tiermodell vor geltenING sie in Studien am Menschen. Die Maus ist ein wichtiges wissenschaftliches Modell zur Prüfung der therapeutischen Wirksamkeit von Vektoren für die Gentherapie und Stammzelltransplantation in die Augen. 5-8 In diesem Video Artikel präsentieren wir eine Technik, um Vektoren für die Gentherapie oder Stammzellen in den subretinalen Raum zu injizieren die Maus Auges minimiert Beschädigung des umgebenden Gewebes.
Protokoll
Ein. Montieren Sie Geräte für den subretinalen Injektion
- Kauf oder eine 100 Mikrometer Durchmesser Nadel aus einer Glaskapillare. Dies kann manuell mit Hilfe eines P-97 Sutter Pipette Abzieher oder ähnliche Ausrüstung durchgeführt werden. Das Ende des Kapillarrohrs wird erhitzt und gezogen werden kann, bis er den gewünschten Durchmesser (100 um) erreicht. Ein kleinerer Durchmesser Nadel kann für die Gentherapie-Vektoren verwendet werden, jedoch ist dies die empfohlene Durchmesser für Zellinjektion ohne Schädigung der Zellen oder des Auges. Verglichen mit Stahlnadeln weist das Glas Kapillarnadel einen sehr feinen, jedoch stumpfe Spitze, zur Visualisierung d....
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Ergebnisse
Eine Zeichnung der Maus Auge mit großen Strukturen als Referenz bezeichnet gezeigt, mit Pfeilen Darstellung der Standorte für beide intravitrealen und subretinale Injektion chirurgischen Eingriffen (Pfeilspitzen, Abbildung 1). Gentherapie-Vektoren, wie das lacZ lentiviralen Vektor (Figur 2), kann unter Verwendung dieser Positionen injiziert werden. Zusätzlich können Stammzellen, wie embryonalen Stammzellen der Maus (Abbildung 3), auch an diesen Stellen in der M.......
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Diskussion
Dieses Video-Technik enthält Anweisungen zum Ausfüllen des subretinalen Injektion chirurgischen Eingriff erfolgreich, und sicherzustellen, dass die Gentherapie-Vektor oder Stammzellen in der Lage erforderlich sind, um effizient behandeln die Augenerkrankung platziert werden. Diese Technik erlaubt die Targeting von Retinazellen wie RPE oder Photorezeptoren, da es die Gentherapievektoren oder Stammzellen abgeleiteten Geweben stellt sich in der Nähe dieser Zellen. Frühere Verfahren involviert intravitreale Injektionen, wo .......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Forschung zur Erblindung verhindern; Experimentelle Unterstützung von Takayuki Nagasaki; Diese Forschung entspricht der ARVO Statement für die Verwendung von Tieren in Ophthalmic und Visual Research. KJW durch die NIH Zuschüsse 5T32EY013933 und 5T32DK007647-20 unterstützt. VBM wird durch NIH K08EY020530 unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name | Firma | Katalog | Kommentare |
| 0,8-1,10 x 100 mm Kapillarrohr (Glas) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming / Brown Feinpipettenziehvorrichtung | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge kann stattdessen verwendet werden. Catalog # MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silikon |
| Dubecco die Phosphate Buffered Saline mit Calciumchlorid und Magnesiumchlorid | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12 "; Blutentnahme-Set | BD Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 265/8G Slip-Tip Spritze | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0,5-10 ul Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetten | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 ul Natürliche abgeschrägten Spitzen | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereomikroskop | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Behandelte Polystyrol Zellkultur Schale | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Gerade Schere | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Gebogene Pinzette mit Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Grad Mikrochirurgie Knife | Wilsam Ophthalmic Corp | 091204 | |
| Ketamin | Ketaset III | NADA # 45-290 | |
| Xylazin | Lloyd Laboratories | NADA # 139-236 | |
| Bupivacain (Carbostesin) | AstraZeneca | N / A | |
| Buprenorphin | Sigma Aldrich | B9275 |
Referenzen
- Prevalence of Blindness Data Tables [NEI Statistics and Data]. , National Eye Insitute. Available from: http://www.nei.nih.gov/eyedata/pbd_tables.asp (2011).
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E.....
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Nachdrucke und Genehmigungen
