Abstract
De lever heeft een grote capaciteit om te regenereren. Hepatocyten, de parenchymale cellen van de lever kan regenereren op twee manieren: hepatocyte- of gal aangedreven leverregeneratie. In-hepatocyte gedreven leverregeneratie, regenereren hepatocyten afkomstig van reeds bestaande hepatocyten, terwijl in-gal gedreven regeneratie, regeneratie van hepatocyten zijn afgeleid van gal epitheelcellen (BEC). Voor-hepatocyte gedreven leverregeneratie, zijn er uitstekende knaagdieren modellen die aanzienlijk hebben bijgedragen aan de huidige kennis van de lever regeneratie. Er bestaat echter geen dergelijke knaagdier model voor gal gedreven leverregeneratie. We hebben onlangs gemeld op een zebravis leverschade model waarin BEC uitgebreid tot hepatocyten na ernstige hepatocyte verlies. In dit model worden hepatocyten specifiek geablateerd door farmacogenetische middel. Hier presenteren we in detail de methoden om hepatocyten ablatie en de BEC-gedreven lever regeneratieproces analyseren.Dit hepatocyt-specifieke ablatie model kan verder worden gebruikt om de onderliggende moleculaire en cellulaire mechanismen van biliaire aangedreven leverregeneratie ontdekken. Bovendien kunnen deze werkwijzen worden toegepast om chemische schermen van kleine moleculen die uitbreiding of onderdrukken leverregeneratie identificeren.
Introduction
De lever is een sterk regeneratieve orgaan. Tijdens leverregeneratie, regenereren levercellen, de parenchymcellen van de lever, zijn afgeleid van reeds bestaande hepatocyten (hepatocyte-gedreven lever regeneratie) of BEC (gal gedreven lever regeneratie) 1,2. Leverbeschadiging teweegbrengt gewoonlijk de verspreiding van latente hepatocyten; Wanneer echter de proliferatie van levercellen wordt aangetast, BEC kan bijdragen tot hepatocyten 2-4. Deze twee modi van de lever regeneratie zijn klinisch significant. Na chirurgische verwijdering van een gedeelte van de menselijke lever (bijvoorbeeld wegens levertumoren en levende leverdonor), hepatocyten in de lever resterende prolifereren de lever massaverlies herstellen. Daarentegen, bij patiënten met ernstige leverziekten, proliferatie van levercellen sterk aangetast, waardoor BEC of progenitorcellen (LPCs) lijken bij te dragen tot hepatocyten regenereren 5,6. De knaagdieren 2/3 gedeeltelijke hepatectomie model, waarinhepatocyten verspreiden naar de lever massa verloren te herstellen, heeft aanzienlijk bijgedragen tot de huidige kennis van-hepatocyte gedreven leverregeneratie 7,8. Er is echter geen geldige knaagdier model waarin hepatocyten regenereren voornamelijk afkomstig van BEC. Hoewel verscheidene knaagdier lever toxine modellen heeft geleid tot de identificatie van biliaire aangedreven leverregeneratie 2-4, recent lineage tracing studies in muizen wijzen op een minimale bijdrage van BEC te regenereren hepatocyten in deze modellen 9,10. Enkele knaagdier leverbeschadiging modellen, waaronder gedeeltelijke hepatectomie 11-13 en acetaminophen geïnduceerde leverschade 14,15, zijn toegepast op zebravis en leidde tot de identificatie van nieuwe genen en routes die betrokken zijn in leverregeneratie. Echter, hepatocyt-gedreven, maar niet BEC-gedreven, lever regeneratie plaatsvindt in deze zebravis leverschade modellen. Daarom is een nieuw leverschade model waarin BEC schaal bijdragen tot regenerating hepatocyten is nodig voor een beter begrip van BEC-gedreven lever regeneratie.
De algemene doelstellingen van de hepatocyt ablatie model hier beschreven zijn (1) een leverschade model waarin BEC schaal bijdragen tot hepatocyten regenereren, en (2) ophelderen van de moleculaire en cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen BEC-driven leverregeneratie genereren. Onze hypothese was dat de ernst van de blessure bepaalt de wijze van leverregeneratie; dus we voorspeld dat gal gedreven leverregeneratie zou starten op ernstige hepatocyte letsel. Om deze hypothese te testen, hebben we een zebravis leverschade model door het genereren van een transgene lijn, Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931, die sterk tot uitdrukking bacteriële nitroreductase (NTR) versmolten met cyaan fluorescente eiwit (GVB) in het kader van de hepatocyt-specifieke fabp10a promoter. Aangezien NTR zet de niet-giftige prodrug, metronidazol (Mtz), een cytotoxisch geneesmiddel, dat ablates alleen de bedoelde NTR-expressie brengen 16-18, in dit geval, de hepatocyten. Door het manipuleren van de duur van Mtz behandeling, kan de omvang van hepatocyten ablatie worden gecontroleerd. Met behulp van dit model hebben wij onlangs gemeld dat men krijgt bij zware hepatocyt verlies, BEC uitvoerig leiden tot hepatocyten regenereren 19, die verder werd bevestigd door twee onafhankelijke studies 20,21. Daarom is in vergelijking met voornoemde knaagdieren en zebravis leverbeschadiging modellen ons hepatocyten ablatie model is voordeliger voor het bestuderen BEC-driven leverregeneratie.
Dit protocol beschrijft de procedure voor het uitvoeren van leverregeneratie experimenten met de zebravis hepatocyte ablatie model. Dit model is geschikt voor het bepalen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan-gal gedreven lever regeneratie en chemische schermen om kleine moleculen die kunnen onderdrukken of versterken leverregeneratie identificeren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Zebravis zijn gerezen en gefokt volgens de standaard procedure; experimenten werden goedgekeurd door de Universiteit van Pittsburgh Institutional Animal Care en gebruik Comite.
1. Voorbereiding van de embryo's / larven
- Om getimede paringen, opgezet volwassen mannelijke en vrouwelijke Tg (fabp10a: CFP-NTR) voeren s931 hemizygoot of homozygote vissen O / N en plaats een scheidingslijn tussen hen. Verwijder deze divider de volgende morgen toen de paring wordt gewenst. Verzamel embryo's door overbelasting van het water met een fijne plastic zeef.
- Draai het filter ondersteboven en spoel het gaas oppervlak met een fijne stroom van ei water afgegeven uit een knijpfles. Breng 100 embryo's in een 100 mm petrischaal met 25 ml water ei. Houd niet meer dan 100 embryo's per petrischaal en hen te verhogen bij 28 ° C.
- Om pigmentatie remmen, voeg fenylthioureum (PTU) in de petrischaaltjes vóór 10 uur na de bevruchting (HPF) en verhogen embryos / larven tot 80 hpf. De eindconcentratie van 0,2 mM PTU. LET OP: PTU is giftig. Gebruik in overeenstemming met de juiste behandeling richtlijnen.
- Verdoven de larven door toevoeging van 3-aminobenzoëzuur ethylester (tricaïne) bij een eindconcentratie van 0,016%, in de petrischalen. Dan, met een epifluorescentiemicroscoop, sorteren CFP-positief larven. Gebruik larven met een vergelijkbare grootte lever- en lever met een kleinere of grotere lever.
OPMERKING: elke CFP-positieve larven, ongeacht de intensiteit kan gebruikt worden omdat er geen verschil in de mate van ablatie hepatocyt tussen hemizygote en homozygote larven. LET OP: tricaïne is giftig. Gebruik in overeenstemming met de juiste behandeling richtlijnen. - Verwijder het ei water met tricaïne en voeg ei water aangevuld met 0,2 mM PTU. Houd de embryo's / larven bij 28 ° C.
2. Mtz Behandeling
- Bereid verse 10 mM Mtz oplossing door het oplossen van 0,171 g Mtz poeder in 100 ml ei water, aangevuld met 0,2% DMSO en 0,2 mM PTU. Om volledig op te lossen de Mtz, meng de oplossing bij RT met snel roeren gedurende 20-30 minuten. Om u te helpen oplosbaar Mtz en Mtz permeatie verbeteren in de larven, voeg DMSO bij de voorbereiding Mtz. LET OP: langdurige blootstelling of een verhoogde concentratie van Mtz is giftig. Gebruik in overeenstemming met de juiste behandeling richtlijnen.
- Scheid de larven in controle- en experimentele groepen door overdracht gewenst aantal larven in twee afzonderlijke 100 mm petrischaaltje of multi-well plaat. Voor de experimentele groep, houden de larven in 10 mM Mtz oplossing; voor de controle groep, bewaar ze in ei water met 0,2% DMSO.
- Bedek de platen of platen met de Mtz oplossing met aluminiumfolie om de foto-inactivatie van Mtz voorkomen en incubeer bij 28 ° C. De duur van Mtz behandeling is afhankelijk van het larvale stadium en transgene lijn.
- Om soortgelijke ernstige hepatocyte ablatie in het observeren
3. Analyse van Biliary-driven leverregeneratie
- Aan het einde van het ablatie periode verwijderen Mtz oplossing van de platen. Was de Mtz-behandelde larven door het toevoegen van 25 ml van het ei water. Swirl de plaat 2-3 keer om de larven te wassen voor het teruggooien het ei water. Herhaal dit drie keer en dan dompel de larven nogmaals in ei water. Om hart oedeem en larven dood te vermijden in de Mtz behandelde larven, voeg een lagere concentratie tricaïne, bij een eindconcentratie van 0,008%, de larven immobiliseren.
- Voor lever analyse onderzoekt de lever grootte van de Mtz-behandelde larven onder een epifluorescentiemicroscoop met het GVB filter. Beoordelen hepatocyte ablatie niveaus op basis van de relatieve grootte van de lever: grote (non-ablatie; 0-10% larven), medium (deels weggenomen; 10-20%) en kleine (volledig weggenomen; 80-90%).
- Verwijder de larven met niet-ablatie of gedeeltelijk weggenomen levers. Alleen houden larven met een kleine lever, wat duidt op ernstige hepatocyt ablatie. Voor lever analyse op de regeneratie 0 uur tijdstip (R0h), oogsten de larven na Mtz uitspoeling en CFP sorteren. Anders houdt de gesorteerde larven in ei water aangevuld met 0,2 mM PTU totdat klaar voor de oogst.
- Overdracht geoogst larven in een 1,5 ml microcentrifugebuis en vervangen ei water met de fixatie oplossing van 3% formaldehyde in PEM buffer. Incubeer de buis op een rotator O / N bij 4 ° C.
- Vervang de fixatie-oplossing met 1 ml van PBSDT en draai de buis met de larven op de rotator gedurende 5 min.
- Breng de vaste larven in een 100 mm petrischaaltje met PBSDT en behulp van een tang, handmatig dooier en borstvinnen te verwijderen onder een dissectie microscoop. Transfer up tp 20 ontleed larven in een 1,5 ml buis. <li> Vervang PBSDT oplossing 1 ml blokkeringsoplossing en rock de buis op een rotator bij kamertemperatuur gedurende 2 uur.
- Vervang blokkeeroplossing met 100 ul van blokkeeroplossing die primaire antilichamen. Langzaam rock de buis op een rotator O / N bij 4 ° C.
- Verwijder het primaire antilichaam oplossing en was met PBSDT 5 maal gedurende 10 minuten per keer. Voeg vervolgens 100 ul van blokkeeroplossing die secundaire antilichamen en schommel het op een rotator bij kamertemperatuur gedurende 2 uur.
- Was 5 keer met PBSDT gedurende 10 minuten per keer bij RT door rocken op een rotator.
- Richt de larven zijdelings op een microscoopglaasje en voeg een druppel fixeermiddelen. Bedek ze voorzichtig met een glazen deksel en sluit het deksel glas met een nagel polijstmachine. Nu het klaar is voor confocale microscopie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mtz behandeling van 36 uur (A36h, A staat voor ablatie) 3,5-5 DPF drastisch verminderd size lever (Figuur 1B). Na Mtz wash-out, beschouwd als het begin van de lever regeneratie (R), sterke fabp10a: CFP-NTR en fabp10a: DsRed uitdrukking zich binnen 30 uur (Figuur 1B). De intrahepatische biliaire netwerk, zoals beoordeeld door expressie van Alcam die aanwezig zijn in het membraan van BEC 22 is aanvankelijk ingestort maar werd hersteld op 54 uur na washout (R54h) (Figuur 1C). Deze data geven aan dat de lever regeneratie en herstel snel voordoen in onze leverschade model.
Figuur 2 laat zien dat regenereren hepatocyten afgeleid van BEC. De Tg (Tp1: H2B-mCherry) S939 lijn drukt een nucleaire rood fluorescerend eiwit onder de controle van een element met 12 RBP-Jĸ bindingsplaatsen 23. Dit Notch Responsive element lijkt genexpressie uitsluitend rijden in WENEN in de lever 24; het is echter mogelijk dat het drijft genexpressie LPCs omdat Notch signalering is nauw verwant aan de LPCs 25. Daarom is deze transgene lijn zorgt voor een gemakkelijke detectie van BEC, en waarschijnlijk LPC, kernen. Verder is de stabiliteit van de verlengde H2B-mCherry fusieproteïne toelaat op korte termijn lineage tracing. Meest H2B-mCherry + cellen in de regenererende lever bij R0h uitgedrukt Hnf4α (figuur 2A), die wordt uitgedrukt in hepatocyten, maar niet in BEC, in de control lever. Hepatocyten, zoals beoordeeld door fabp10a: CFP-NTR expressie, op R48h behield Tp1: H2B-mCherry expressie (Figuur 2B, pijlen). Deze gegevens geven BEC conversie hepatocyten krijgt bij zware hepatocyt verlies, dat verder werd bevestigd door vaste lineage tracing 19.
Figuur 1. Een zebravis leverschade model. (A) Regeling ter illustratie van de periodes van Mtz behandeling en de lever regeneratie. (B) 36 hr Mtz behandeling sterk verminderde lever- omvang en fabp10a: GVB en fabp10a: DsRed fluorescentie bij R0h; echter sterk GVB en DsRed fluorescentie verscheen op R30h. Pijlen wijzen naar de lever (li). (C) confocale projectie uitzicht over de hele lever immunostained met anti-Alcam antilichamen die BEC gelabeld. De intrahepatische galwegen netwerk was ingestort op R0h, maar snel hersteld bij R54h. Gestippelde regio's een overzicht van de lever. Schaal bars:. 100 (B), 20 (C) micrometer Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
_upload / 52.785 / 52785fig2.jpg "/>
Figuur 2. BEC leiden tot hepatocyten na ernstig verlies hepatocyten (A) confocale projectieafbeeldingen van de lever toont Hnf4α (groen) en Tp1. H2B-mCherry (red) expressie in R0h. (B) Confocale single-optische beelden sectie tonen fabp10a: CFP-NTR (grijs) en Tp1: H2B-mCherry (rood) expressie in de lever. mCherry expressie werd onthuld door anti-mCherry immunokleuring. Let op de zwakke mCherry uitdrukking in de kernen van de GVB + hepatocyten (pijlen). Sterke mCherry + cellen zijn BEC. Schaal bars:. 20 urn Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Serieus, maar niet mild, hepatocyte ablatie lokt-gal gedreven leverregeneratie. Daarom na Mtz behandeling en washout, is het belangrijk om de grootte van de lever Mtz behandelde larven, die kan worden bepaald door intrinsieke fluorescentie van de CFP fabp10a onderzoeken: CFP-NTR transgen. Aangezien een klein percentage van de Mtz behandelde larven niet-geablateerde (0-5%) of gedeeltelijk geablateerd (10-20%) levers weergegeven, is het noodzakelijk om uit slechts analyseren de larven met een zeer kleine lever, duidt op ernstige hepatocyt ablatie.
Hoewel in ons protocol, wij 5 DPF (a 36 hr behandelingsperiode) behandeld zebravis larven Mtz van 3,5, alternatieve locaties en duur van Mtz behandeling mogelijk. Zo behandelde larven 5-6 DPF (a 24 hr behandelingsperiode) vertoonde eveneens ernstige hepatocyt ablatie, vergelijkbaar met de bovengenoemde 36 uur behandelingsperiode. Twee aanvullende groepen onafhankelijk gegenereerdSoortgelijke fabp10a: NTR transgene lijnen en ook verslag van het proces van biliaire aangedreven leverregeneratie na hepatocyt-specifieke ablatie. Dat één groep behandeld larven Mtz 6-7 21 dpf, een deed 3,5-4,5 dpf, dezelfde conclusie 20 bereikt. Aangezien elke fabp10a: NTR transgene lijn een verschillend NTR expressie kan vertonen, moeten de duur en de dosering van Mtz behandeling separaat voor elke transgene lijn gebruikt. Het kan ook nuttig zijn om transgene lijn met een verbeterde versie van het NTR gen, waarbij de introductie van drie puntmutaties leidt tot een toename van de enzymatische activiteit 26 genereren. Deze mutant NTR resulteert in een snellere ablatie event dan het wildtype NTR 26. Dit is bijzonder voordelig bij toepassing van wild-type kinetiek NTR de mogelijkheid van volledige cel ablatie op een gewenst stadium kunnen beperken.
Sinds honderden larvenkunnen gelijktijdig ondergaan hepatocyte ablatie, kan deze zebravis leverschade model worden toegepast op chemische schermen om kleine moleculen die kunnen onderdrukken of versterken gal gedreven leverregeneratie identificeren. Bijvoorbeeld met behulp van dit model, de Shin groep aan de Georgia Tech voerde een chemische scherm en vond een aantal Wnt-agonisten en Notch antagonisten die de lever regeneratie 20 vergemakkelijkt. We voerden ook een kleine schaal chemische scherm en geïdentificeerd verschillende verbindingen die leverregeneratie kan onderdrukken (SK, TYC, JS, en de DS, in voorbereiding).
Marker analyses in mensen stelde BEC kan bijdragen aan geregenereerd hepatocyten in de zieke lever 5,6. Dr. Wanless "groep onlangs gemeld dat een groot percentage van parenchym in regressed cirrose lijkt ontleend LPCs / BEC mens 27, impliceert het belang van BEC-driven leverregeneratie in cirrose regressie. Aangezien vooral BECbijdragen aan de regenererende levercellen in de zebravis leverschade model hier beschreven, zal dit model een waardevol instrument voor het bepalen van de cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen BEC-driven leverregeneratie zijn. Inzicht in dergelijke mechanismen zullen aanzienlijke inzicht in hoe je aangeboren lever regeneratie bij patiënten met ernstige leverziekten breiden bieden. Bovendien, in combinatie met chemische schermen, zebravis Dit model kan nuttig zijn bij het identificeren van een potentieel geneesmiddel die aangeboren leverregeneratie bij menselijke patiënten kan vergemakkelijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8532 | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
| Calcium sulfate dihydrate | Sigma-Aldrich | C3771 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| Mounting media (Vectashield) | Vector Laboratories | H-1000 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| clear nail polish | Fisher Scientific | 50949071 | |
| fine forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | Dumont #5 |
| glass slide | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| glass coverslip | Fisher Scientific | 12-540-A and 12-542-A | 18 x 18 mm |
| zn-5 (mouse anti-Alcam) | ZIRC | zn-5 | 1:10 dilution |
| goat anti-Hnf4a | Santa Cruz | sc-6556 (C-19) | 1:50 dilution |
| rat anti-RFP | Allele Biotechnology | ACT-CM-MRRFP10 | 1:300 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L) | Jackson laboratories | 705-605-147 | 1:500 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L) | Invitrogen | A21240 | 1:500 dilution |
| Cy3 donkey anti-rat IgG | Jackson laboratories | 712-165-150 | 1:500 dilution |
| dissecting microscope | Leica Microsystems | S6F | |
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA | |
| confocal microscope | Carl Zeiss | LSM700 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X PBS | 25.6 g Na2HPO4·7H2O, 80 g NaCl, 2 g KCl, 2 g KH2PO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. Autoclave for 20 min at 121°C. | ||
| 1X PBSDT | 0.2% Triton X-100 and 0.2% DMSO in 1 X PBS. | ||
| PEM buffer | 30.2 g PIPES, 761 mg EGTA, 1 mM MgSO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. | ||
| Blocking solution | Mix 1 ml of heat-inactivated horse serum with 9 ml of 1X PBSDT. |
References
- Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N.
- Fausto, N., Campbell, J. S. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation. Mechanisms of Development. 120, 117-130 (2003).
- Duncan, A. W., Dorrell, C., Grompe, M. Stem Cells and Liver Regeneration. Gastroenterology. 137, 466-481 (2009).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration: Alternative epithelial pathways. Int J Biochem Cell B. 43, 173-179 (2011).
- Falkowski, O., et al. Regeneration of hepatocyte 'buds' in cirrhosis from intrabiliary stem cells. Journal of hepatology. 39, 357-364 (2003).
- Yoon, S. M., et al. Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) Marks Hepatocytes Newly Derived from Stem/Progenitor Cells in Humans. Hepatology. 53, 964-973 (2011).
- Michalopoulos, G. K.
- Michalopoulos, G. K. Liver Regeneration after Partial Hepatectomy Critical Analysis of Mechanistic Dilemmas. Am J Pathol. 176, 2-13 (2010).
- Yanger, K., et al. Adult hepatocytes are generated by self-duplication rather than stem cell differentiation. Cell stem cell. 15, 340-349 (2014).
- Schaub, J. R., Malato, Y., Gormond, C., Willenbring, H. Evidence against a Stem Cell Origin of New Hepatocytes in a Common Mouse Model of Chronic Liver Injury. Cell reports. 8, 933-939 (2014).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II alpha is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and cellular biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator, uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Cox, A. G., et al. S-nitrosothiol signaling regulates liver development and improves outcome following toxic liver injury. Cell reports. 6, 56-69 (2014).
- North, T. E., et al. PGE2-regulated wnt signaling and N-acetylcysteine are synergistically hepatoprotective in zebrafish acetaminophen injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 17315-17320 (2010).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236, 1025-1035 (2007).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies. Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).
- Choi, T. Y., Ninov, N., Stainier, D. Y., Shin, D. Extensive conversion of hepatic biliary epithelial cells to hepatocytes after near total loss of hepatocytes in zebrafish. Gastroenterology. 146, 776-788 (2014).
- Huang, M., et al. Antagonistic interaction between Wnt and Notch activity modulates the regenerative capacity of a zebrafish fibrotic liver model. Hepatology. , (2014).
- He, J., Lu, H., Zou, Q., Luo, L. Regeneration of liver after extreme hepatocyte loss occurs mainly via biliary transdifferentiation in zebrafish. Gastroenterology. 146, 789-800 (2014).
- Sakaguchi, T. F., Sadler, K. C., Crosnier, C., Stainier, D. Y. Endothelial signals modulate hepatocyte apicobasal polarization in zebrafish. Curr Biol. 18, 1565-1571 (2008).
- Ninov, N., Borius, M., Stainier, D. Y. R. Different levels of Notch signaling regulate quiescence, renewal and differentiation in pancreatic endocrine progenitors. Development. 139, 1557-1567 (2012).
- Lorent, K., Moore, J. C., Siekmann, A. F., Lawson, N., Pack, M. Reiterative use of the notch signal during zebrafish intrahepatic biliary development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 239, 855-864 (2010).
- Itoh, T., Miyajima, A. Liver Regeneration by Stem/Progenitor Cells. Hepatology. 59, 1617-1626 (2014).
- Mathias, J. R., Zhang, Z., Saxena, M. T., Mumm, J. S. Enhanced cell-specific ablation in zebrafish using a triple mutant of Escherichia coli nitroreductase. Zebrafish. 11, 85-97 (2014).
- Stueck, A. E., Wanless, I. R. Regression of cirrhosis: The maturation sequence of buds arising from hepatocyte progenitor cells. Hepatology. 58, 235A (2013).
