Summary
Foi desenvolvido um método utilizando frutas verdes de café (GFs) para testar a toxicidade de inseticidas contra o borer de café (CBB). Inseticidas ou substâncias tóxicas foram aplicadas a GFs desinfetados antes ou depois da infestação da CBB. Foram avaliadas a mortalidade, a repelência e a capacidade reprodutiva dos insetos, além de outros parâmetros.
Abstract
Antes de recomendar inseticidas para tratar o borer de café (CBB) Hypothenemus hampei, é valioso saber a mortalidade e repelência desses inseticidas contra insetos adultos ou seu impacto na produção reprodutiva. No entanto, os métodos disponíveis atualmente avaliam apenas a mortalidade adulta, limitando a seleção de novos inseticidas com um modo de ação diferente. Neste trabalho, foram examinados diferentes métodos experimentais para identificar os diversos efeitos sobre a CBB em condições laboratoriais. Para isso, foram coletadas e desinfetadas frutas de café verde (GFs) por imersão na solução de hipoclorito de sódio seguida de irradiação de luz UV. Paralelamente, os adultos da CBB de uma colônia foram desinfetados pela imersão na solução de hipoclorito de sódio. Para avaliar a proteção das frutas (pré-infestação), as frutas foram colocadas em caixas plásticas, e os inseticidas foram aplicados. Em seguida, os adultos da CBB foram liberados a uma taxa de dois CBBs por GF. Os GFs foram deixados em condições controladas para avaliar a infestação e a sobrevida da CBB após 1, 7, 15 e 21 dias. Para avaliar a eficácia do inseticida após a infestação do CBB (pós-infestação), os adultos da CBB foram liberados para os GFs em uma razão de 2:1 para 3h a 21 °C. Frutas infestadas que mostram adultos da CBB com abdômen parcialmente expostos foram selecionadas e colocadas em racks de 96 poços, e os CBBs chatos nas frutas foram tratados diretamente. Após 20 dias, as frutas foram dissecadas, e as etapas biológicas da CBB dentro de cada fruta foram registradas. Os GFs serviram como substratos que imitam condições naturais para avaliar inseticidas tóxicos, químicos e biológicos contra o CBB.
Introduction
O borer de café (CBB), Hypothenemus hampei, foi detectado pela primeira vez em 1988 na Colômbia e desde então tornou-se a espécie de praga mais importante da cultura do café. As fêmeas da CBB deixam o fruto natal já fertilizado, buscando novos frutos guiados pelos produtos químicos voláteis que emitem 1,2. Um ciclo completo é cumprido dentro de 23 dias3 a uma temperatura de 25 °C. O ciclo começa com a fêmea fundadora penetrando na semente e colocando ovos no endosperm de frutas. As larvas fechadas comem a semente. Se os frutos forem dissecados neste momento, seria possível observar tanto a fêmea fundadora quanto sua prole. Após 14 dias, as larvas se tornam pupas-geralmente, o estágio pupae dura 5 dias. Na fase adulta, as fêmeas copulam com seus irmãos, e as fêmeas recém-fertilizadas voam para longe das frutas danificadas em busca de novas frutas de café para iniciar um novo ciclo4.
Tanto o processo de penetração quanto o resultado da alimentação larval prejudicam a semente do café, diminuindo a qualidade da bebida do café e reduzindo significativamente a receita; maiores que 5% de infestação em plantações de café é geralmente considerado o limiar econômico.
O controle da CBB baseia-se em uma estratégia integrada de manejo de pragas (IPM), incluindo controle cultural e práticas agronômicas, agentes biológicos naturais e o uso de inseticidas químicos, que requer condições de segurança e aplicação oportuna4.
Para avaliar novos inseticidas para o controle da CBB, são necessárias metodologias de baixo custo que permitam a obtenção de resultados rápidos. Tanto procedimentos laboratoriais quanto de campo estão atualmente em uso, incluindo dietas artificiais contendo café em que os inseticidas são incorporados 5,6, ou pulverização dos inseticidas no café pergaminho seco 7,8,9. Além disso, foram relatados experimentos realizados no campo utilizando galhos de cafeicultos cobertos com mangas entomológicas, 10,11; no entanto, esses métodos requerem trabalho intenso e longos períodos de avaliação.
Uma condição que se assemelha às condições naturais do campo, que também é rápida e barata, é o uso de frutas de café verdes ou maduras. No entanto, essas frutas devem ser mantidas em condições adequadas para o desenvolvimento da CBB, evitando alterações e contaminantes por microrganismos para manter sua qualidade e propriedades. Para isso, foram utilizados diferentes desinfetantes, bem como procedimentos envolvendo calor e radiação 7,9,12,13,14,15,16.
Além disso, os métodos de avaliação de inseticidas em relação à CBB exigem simulações de fêmeas adultas voando em busca de frutas ou penetrando nessas frutas17,18. Para isso, foram realizadas infestações artificiais de frutas no campo 8,11,19, embora esse processo seja intensivo em mão-de-obra e dependa das condições ambientais.
Aqui, descrevemos uma metodologia padronizada para avaliação de produtos que podem ter diferentes efeitos sobre a CBB em condições ambientais controladas que se assemelham às condições do campo.
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Protocol
NOTA: Este protocolo aborda diferentes métodos para identificar diferentes efeitos sobre a CBB em condições laboratoriais.
1. Coleta de frutas
- Escolha GFs com uma idade de desenvolvimento de ~120-150 dias depois de florescer de árvores em uma plantação de café no início da manhã.
2. Desinfecção de frutas20
- Leve cerca de 300 GFs para o laboratório. Selecione GFs uniformemente dimensionados e saudáveis e retire os peduncles.
- Mergulhe os GFs em uma solução de sabão (2 mL de sabão líquido de lavagem de louça em 998 mL de água da torneira), seguido de esfregar para lavar os GFs. Em seguida, enxágue as frutas com água, trocando a água três vezes.
- Mergulhe os GFs em solução de hipoclorito de sódio de 0,5% (100 mL em 900 mL de água da torneira) e mexa em um agitador a 110 rpm por 15 min. Em seguida, enxágue os GFs com água mexendo em um agitador e trocando a água três vezes, a cada 10 minutos.
- Seque os GFs com toalhas de papel estéreis.
- Coloque os GFs em bandejas (33 cm x 25 cm x 2 cm) e irradie-os por 15 minutos, colocando os GFs a uma distância de 55 cm da fonte UV dentro de uma estação de fluxo horizontal laminar habilitada para UV.
- Durante o período de 15 minutos, a cada 5 minutos, mova os GFs para garantir a irradiação de toda a fruta.
3. Desinfecção de insetos21
- Use insetos CBB recém-emergido (no mesmo dia) para configurar os bioensagratos.
- Mergulhe os CBBs em 0,5% de solução de hipoclorito de sódio, agitando-os lentamente com uma escova por 10 minutos.
- Filtre os CBBs através de um pano de musselina e lave-os três vezes com água destilada estéril.
- Remova o excesso de água com toalhas de papel estéreis.
4. Avaliação de um produto com efeito protetor sobre as frutas (pré-infestação) (Figura 1)
- Use um grupo de GFs por unidade experimental. Geralmente, um grupo de 30 GFs são usados por unidade experimental.
- Coloque os GFs em caixas plásticas (unidade experimental).
- Aplique o produto de teste nas diferentes concentrações para avaliação. Realize a aplicação com uma unidade de pulverizador portátil. Aqui foram testadas emulsão alcaloides de 5% e 6%.
- Como controle, pulverize um grupo de GFs com água.
- Utilize pelo menos três repetições (unidade experimental) por tratamento, pulverizando uma após a outra.
- Em um capô estéril, solte dois adultos CBB por GFs (um total de 60 CBBs são introduzidos nas caixas plásticas). Depois de 30 min, cubra as caixas.
- Deixe as caixas plásticas com os GFs infestados em uma sala ou incubadora em condições controladas (escuras, 25 ± 2 °C, e umidade relativa 71% ± 5%).
- Após 1, 7, 15 e 21 dias, conte o número de frutas borer e insetos vivos e mortos fora das frutas em cada caixa.
- Em 20 dias pós-infestação, disseca cada GF sob um estereótipo, ampliação 10x.
- Conte o número de sementes saudáveis ou sementes danificadas pelos insetos em cada fruta.
- Conte os diferentes estágios biológicos da CBB22 observados e conte o número de insetos mortos em cada semente para determinar a mortalidade de insetos por unidade experimental.
5. Avaliação do efeito de um produto após a infestação da CBB (pós-infestação) (Figura 3)
- Use grupos de 200 frutas por tratamento.
- No capô asteril, solte adultos CBB (proporção 2:1 de adultos CBB para GFs) para os GFs anteriormente desinfetados, permitindo que a infestação prossiga por 3h a 21 °C.
- Examine os GFs. Após 3h, a maioria deve estar infestada, com o abdômen dos CBBs ainda exposto (posição A20), como mostrado na Figura 2.
- Selecione 46 GFs infestados (posição A) e coloque-os em racks de plástico de 96 poços (unidade experimental). Os frutos devem permanecer nesta posição para que o tratamento possa ser pulverizado diretamente na CBB perfurando a fruta.
- Pulverizar pelo menos três vezes (três racks) por tratamento, um após o outro, cobrindo os racks após 30 min.
- Deixe os racks com os GFs infestados em uma sala ou incubadora em condições controladas (escuro, 25 ± 2 °C, e umidade relativa 71% ± 5%).
- Após 20 dias, disseca os GFs sob um estereómico a 10x de ampliação.
- Conte o número de sementes saudáveis ou sementes danificadas pelos insetos em cada fruta.
- Conte os diferentes estágios biológicos da CBB22 e o número de insetos mortos em cada semente para determinar a mortalidade de insetos por unidade experimental.
6. Avaliação de um produto com efeito dissuasivo na CBB
- Siga os passos 4.1-4.6 delineados para avaliar um produto com efeito protetor sobre as frutas.
- Depois de liberar os adultos da CBB nas caixas plásticas, conte o número de CBBs que voam para longe das caixas e o número que infesta os GFs. Em seguida, siga os passos 4.7-4.11.
- Siga os passos 5.1-5.5 delineados para avaliação do produto após a infestação da CBB.
- Após pulverizar cada tratamento nos insetos na posição A, conte o número de CBBs que saíram do GF e/ou voaram para longe do GF. Em seguida, siga os passos 5.6-5.9.
7. Análise estatística
NOTA: As variáveis de resposta são percentuais de mortalidade ao longo do tempo e o percentual de sementes de café saudáveis não infestadas.
- Estime o desvio médio e padrão de cada variável de resposta para cada tratamento.
- Realize a análise de variância para cada variável de resposta com um modelo para um design completamente randomizado.
NOTA: O teste de comparação de 5% de Dunnett é realizado para comparar os tratamentos com o controle absoluto (controle de água). - Quando os tratamentos forem significativamente diferentes do controle absoluto, use um teste de diferença 5% menos significativa (LSD) para comparar os tratamentos.
- Avaliar o poder do teste; se for superior a 85%, os pressupostos de normalidade e homogeneidade das variâncias são atendidos.
Figura 1: Procedimento para avaliação dos efeitos de pré-infestação de inseticidas na CBB. Etapas para avaliar os efeitos de pré-infestação de inseticidas no Hypothenemus hampei (CBB) utilizando frutas verdes (GFs). (A) Seleção de frutas. (B) Pulverização dos inseticidas nas frutas do café. (C) Infestação de frutas de café cbb a uma proporção de 2:1 CBB por GF. (D) Frutas infestadas. (E) Incubação das frutas em condições controladas. (F) Dissecção de frutas. (G) Contando a população da CBB dentro das sementes. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Processar a infestação da CBB das frutas do café. As frutas infestadas contêm adultos CBB com abdômen parcialmente exposto (posição A). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Procedimento para avaliação dos efeitos posinfestation dos inseticidas na CBB. Etapas para avaliar os efeitos pós-infestação de inseticidas no CBB utilizando GFs. (A) Seleção de frutas. (B) Infestação das frutas com CBB em uma proporção de 2:1 CBB por GF. (C) Seleção de frutas infestadas. (D) Pulverização do inseticida nas frutas. (E) Incubação das frutas. (F) Dissecção de frutas. (G) Contando a população da CBB. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Representative Results
Os resultados mostraram que as fêmeas da CBB reconheceram os frutos e, dependendo das características da superfície da fruta e dos odores emitidos, as fêmeas da CBB começaram a penetrar ou dar os frutos dentro de 3h a 21 °C.
O efeito de um inseticida na CBB quando aplicado às frutas do café (procedimento de pré-infestação) após 24h e ao longo do tempo é mostrado na Figura 4. Os dois inseticidas (emulsão alcaloide a 5% e 6%) causaram alta mortalidade por insetos no dia 20 (Tabela 1) e apresentaram diferenças significativas em relação ao controle absoluto da água (P < 0,001), de acordo com o teste de LSD. Quanto aos percentuais de sementes saudáveis não infestadas (Tabela 1), também houve diferenças entre o controle e os grupos de inseticidas, de acordo com o teste de Dunnett em 5% (P < 0,001). No grupo controle, 37% das sementes não estavam infestadas, enquanto a aplicação de inseticidas protegia as sementes, com 94% das sementes permanecendo saudáveis quando se utilizava inseticida 2 e 89% com inseticida 1.
Figura 4: Efeitos de pré-infestação de inseticidas no controle versus dois grupos de inseticidas. Efeitos de pré-infestação dos inseticidas. Percentual de mortalidadepor H. hampei adulto avaliado nos dias 1, 7, 15 e 21 após infestação. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Tratamento | Unidade experimental | Mortalidade (%) | Sementes saudáveis (%) | ||||
| Média | Sd | Média | Sd | ||||
| Controle (água) | 5 | 12.4 | 8.3 | 37 | 6.3 | ||
| Inseticida 1 | 5 | 83.9 | *b | 3.9 | 89 | *b | 6 |
| Inseticida 2 | 5 | 94.2 | *a | 3.2 | 94.2 | *a | 3.7 |
| * Para cada variável, as diferenças em relação ao controle (água) de acordo com o teste de Dunnett em 5%. | |||||||
Tabela 1: Efeito do tratamento de pré-infestação na CBB. Por cento de mortalidade e sementes percentesas de saúde após 20 dias. * Para cada variável, as diferenças em relação ao controle (água) de acordo com o teste de Dunnett em 5%.
Os resultados da pré-infestação após 21 dias são mostrados na Tabela 1, e os resultados ao longo do tempo correspondem à Figura 4. Neste caso, as frutas do café foram cobertas com uma substância tóxica que causa a mortalidade de insetos. Os insetos ficam impregnados quando caminham sobre as frutas, provam as frutas com suas palpas, ou começam a mastigar a epiderme das frutas. Além disso, as substâncias aplicadas sobre a superfície da fruta podem alterar ou alterar o odor natural da fruta, de modo que os indivíduos da CBB podem parar o processo de infestação, voando para longe ou preferindo ser separados da fruta sem tocá-la ou infestá-la. Dependendo do tempo de ação do produto, a mortalidade por insetos ou evitar o comportamento de infestação pode persistir por 24h ou mais.
Por outro lado, se os produtos forem aplicados após os insetos começarem a dar o presente (pós-infestação), os produtos podem penetrar na cutícula de insetos, causando mortalidade por insetos (Tabela 2 e Figura 5). A maior mortalidade ocorreu com inseticida 2 (P < 0,01). Se a mortalidade ocorrer rapidamente, o inseto morrerá antes de entrar na semente, e nenhum ovo ou população de insetos será encontrado dentro das sementes.
Figura 5: Efeitos pós-infestação de inseticidas. Percentual de mortalidade por H. hampei adulto avaliado nos dias 1, 7, 15 e 21 após infestação. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Tratamento | Unidade experimental | Mortalidade (%) | Sementes saudáveis (%) | ||||
| Média | Sd | Média | Sd | ||||
| Controle (água) | 5 | 11.1 | 3.0 | 57.3 | 3. 9 | ||
| Inseticida 1 | 5 | 46.8 | *b | 6.6 | 79.2 | *b | 8.6 |
| Inseticida 2 | 5 | 77.8 | *a | 3.7 | 90.0 | *a | 2.9 |
| * Para cada variável, as diferenças em relação ao controle (água) de acordo com o teste de Dunnett em 5%. | |||||||
Tabela 2: Efeitos do tratamento pós-infestação na CBB. Por cento de mortalidade e por cento de sementes saudáveis após 20 dias. * Para cada variável, as diferenças em relação ao controle (água) de acordo com o teste de Dunnett em 5%. Para cada variável, letras diferentes indicam diferenças de acordo com LSD 5%.
Os efeitos dos inseticidas se refletem como o percentual de sementes saudáveis não infestadas no dia 20 de avaliação (Tabela 2). Devido à alta mortalidade de insetos, o inseto não penetrou nas sementes de café e as danificou. Aplicação dos produtos protegidos entre 79%-90% das sementes de café, apresentando diferenças em relação ao controle, em que 57% das sementes foram encontradas saudáveis (P < 0,01). Também foram observadas diferenças significativas entre os dois inseticidas (P < 0,01).
Em alguns casos, os insetos morreram muito rapidamente, mesmo antes de causar danos à semente. No entanto, se a morte do inseto demorou mais, o inseto poderia alcançar a semente e depositar alguns ovos, e mais tarde, o adulto morrerá. Neste caso, foi encontrada uma população reduzida de insetos dentro das sementes de café em comparação com a população de insetos encontrada no grupo controle pulverizado com água (Tabela 3).
| Tratamentos | População/semente média total de insetos | * Agrupamento duncan (alfa= 00,05) |
| Controle | 5 | um |
| Entomopatógeno | 2.5 | b |
| Substância repelente | 3.27 | b |
| Entomopatógeno + Repelente | 1.5 | c |
| Para cada variável, letras diferentes indicam diferenças de acordo com LSD 5%. | ||
Tabela 3: Efeitos pós-infestação após o tratamento com fungo entomopatômico e uma substância repelente. População de insetos dentro das sementes. Os GFs foram dissecados em 15 dias. * Para cada variável, as diferenças em relação ao controle (água) de acordo com o teste de Dunnett em 5%. Para cada variável, letras diferentes indicam diferenças de acordo com LSD 5%.
A Figura 6 mostra o efeito de um produto com efeitos pós-infestação, um entomopatógeno e o de uma substância repelente, bem como sua ação combinada.
Figura 6: Efeitos pós-infestação de um fungo entomopatômico e uma substância repelente. Por cento de mortalidade de adulto h. hampei e dano de sementes. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Essas metodologias permitem a rápida determinação de diferentes efeitos de produtos tóxicos na CBB.
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Discussion
Neste protocolo, a desinfecção dos frutos, bem como dos insetos, são passos críticos. Quando as frutas do campo são utilizadas em laboratório, elas frequentemente apresentam alta contaminação e desidratação, uma vez que microrganismos e ácaros estão presentes na epiderme 7,15,16. Portanto, o uso de frutas ou insetos que não são desinfetados causará a morte de insetos devido à contaminação causada por microrganismos, como bactérias ou fungos, interferindo assim nos resultados do bioensaio. Anteriormente, Tapias et al.20 avaliaram outros agentes antimicrobianos para desinfecção de frutas, como carbendazim e cloreto de benzalkonium; no entanto, embora a desinfecção das frutas tenha sido boa, esses compostos eram altamente tóxicos para a CBB ou para o meio ambiente.
O uso de hipoclorito de sódio de 0,5% foi avaliado por mergulhar as frutas na solução por 30 min e 15 min. Após os dois períodos de tempo, os microrganismos foram afetados, mas a CBB também foi afetada após 30 minutos de mergulho devido ao poder oxidante da solução23. A luz UV causa danos ao DNA24 dos microrganismos, diminuindo a contaminação. No entanto, em doses mais altas (maior tempo de exposição), ocorre dano à fruta, causando necrose e desidratação de sementes. A desinfecção com hipoclorito de sódio de 0,5% por 15 min seguido pela exposição à luz UV por 15 min foi considerada ótima neste procedimento.
A segunda consideração é a qualidade dos insetos. Para este estudo, os insetos foram fornecidos por uma unidade de criação de insetos chamada BIOCAFE25 (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). Insetos fracos ou criados de colônias de insetos pobres superestimarão os resultados de um produto tóxico. Além disso, o comportamento laboratorial, neste caso, não corresponderia às observações de campo de insetos do tipo selvagem com alta aptidão. Além disso, esses insetos podem conter um grande número de microrganismos que poderiam interferir com o bioensaio. Por isso, a desinfecção21 é um passo importante para garantir o sucesso da metodologia.
Com relação à infestação (dois insetos para uma fruta), foi previamente determinado que o uso de uma quantidade maior de insetos aumentaria o número de frutas de café com mais de uma perfuração de insetos, tornando a análise mais difícil20. Além disso, a temperatura na qual os experimentos são realizados é importante para obter frutas com insetos na posição A ou obter uma penetração normal de insetos quando os frutos são pulverizados. A temperatura de 21 °C por 3h permitiu que mais de 70% das frutas ficassem infestadas. Quando a temperatura aumentou para entre 25-27 °C, a maioria dos insetos atingiu a posição B em um período menor de tempo do que a 21 °C. A penetração mais rápida da CBB na fruta é consequência da maior atividade do inseto devido ao aumento da temperatura26. Assim, o inconveniente de usar uma temperatura de 25 °C por um período maior de tempo é que muitas frutas são encontradas com mais de uma perfuração, e com insetos em posições A e B.
Antes do desenvolvimento desse método, eram utilizadas dietas artificiais de insetos com café moído para avaliar os efeitos de substâncias tóxicas incorporando a substância na dieta 5,6; no entanto, essas dietas são caras devido aos seus componentes especiais27,28. O café pergaminho também tem sido utilizado para avaliação de inseticidas, onde os grãos de café são polvilhados ou mergulhados na substância a ser avaliada. Como a estrutura e a composição do pergaminho são diferentes das pericarp da fruta, espera-se que a interação entre o inseticida e o café seja diferente. Com o café pergaminho, a molécula de inseticida pode ser facilmente absorvida, gerando assim maior mortalidade do que a observada em condições naturais. Além disso, o café pergaminho é relativamente mais caro, pois tem que ser removido da polpa de frutas e depois seco. Além disso, não é o substrato natural para o crescimento de insetos.
Em conclusão, o uso de café verde real com nutrientes adequados para o crescimento de insetos é a maneira mais adequada de avaliar a toxicidade dos compostos para insetos em condições naturais simuladas.
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Disclosures
Nenhum dos autores tem conflitos de interesse para declarar.
Acknowledgments
Os autores agradecem à Federação Nacional dos Cafeicultores da Colômbia, aos assistentes do Departamento de Entomologia (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), à Estação de Experimentos Naranjal e a Jhon Félix Trejos.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Beaker with spout, low form 500 mL | BRAND PP | BR87826 | |
| Benchtop Shaker | New Brunswick Scientific Innova 4000 Incubator Shaker | ||
| Dishwashing liquid soap-AXION | Colgate-Palmolive | AXION | |
| Hood; Horizontal Laminar Flow Station | Terra Universal | Powder-Coated Steel, 1930 mm W x 1118 mm D x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html) | |
| Insects CBB | BIOCAFE | (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). | |
| Multi Fold White paper towels | Familia | 73551 | |
| Preval Spray unit | Preval Merck | Z365556-1KT | https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB |
| Reversible Racks 96-Well | heathrowscientific | HEA2345A | https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a |
| Scalpel blades N 11 | Merck | S2771-100EA | |
| Scalpel handles N3 | Merck | S2896-1EA | |
| Sodium Hypochloride | The clorox company | Clorox | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Stemi 508 | https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html |
References
- Mendesil, E., et al. Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).
- Jaramillo, J., et al. Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch. PLoS ONE. 8 (9), 74277 (2013).
- Giraldo-Jaramillo, M., Garcia, A. G., Parra, J. R. Biology, thermal requirements, and estimation of the number of generations of Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) in the state of São Paulo, Brazil. Journal of Economic Entomology. 111 (5), 2192-2200 (2018).
- Benavides, P., Góngora, C., Bustillo, A. IPM Program to Control Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei, with Emphasis on Highly Pathogenic Mixed Strains of Beauveria bassiana, to Overcome Insecticide Resistance in Colombia. IntechOpen. , (2012).
- Martínez, C. P., Echeverri, C., Florez, J. C., Gaitan, A. L., Góngora, C. E. In vitro production of two chitinolytic proteins with an inhibiting effect on the insect coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae) and the fungus Hemileia vastatrix the most limiting pests of coffee crops. AMB Express. 2, 1-11 (2012).
- Padilla, B. E., Acuña, Z., Velásquez, C. S., Rubio, G. J. D. Inhibitors of [alpha]-amylases from the coffee berry borer Hypothenemus hampei in different plant species. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 125-130 (2006).
- Alvarez, J. H., Cortina, H. A., Villegas, J. F. Methods to evaluate antibiosis to Hypothenemus hampei Ferrari in coffee under controlled conditions. Cenicafé. 52 (3), 205-214 (2001).
- Arcila, A., Duarte, A. F., Villalba, D. A., Benavides, P. New Product in the Integrated Management of the Coffee Berry Borer in Colombia. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477 (2014).
- Jaramillo, J., Montoya, E., Benavides, P., Góngora, C. Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the control of coffee brocade in fruits on the ground. Revista Colombiana de Entomología. 41, 95-104 (2015).
- Bastidas, A., Velásquez, E., Benavides, P., Bustillo, A., Orozco, C. Evaluation of preformulated Beauveria bassiana (Bálsam) Vuillemin, for the control of the coffee berry borer. Agronomia. 17, 44-61 (2009).
- Villalba-Gault, D., Bustillo, A., Chaves Cordoba, B. Evaluation of insecticides for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 46, 152-163 (1995).
- Bustillo, A. E., Orozco, J., Benavides, P., Portilla, M. Mass production and use of parasitoids for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 47 (4), 215-230 (1996).
- Celestino, F. N., Pratissoli, D., Machado, L. C., Santos Junior, H. J. G. D., Mardgan, L., Ribeiro, L. V. Adaptation of breeding techniques of the coffee berry borer [Hypothenemus hampei (Ferrari). Coffee Science. 11 (2), 161-168 (2016).
- Domínguez, L., Parzanese, M.
- Jaramillo, J., Chabi-Olaye, A., Poehling, H. M., Kamonjo, C., Borgemeister, C. Development of an improved laboratory production technique for the coffee berry borer Hypothenemus hampei, using fresh coffee berries. Entomologia Experimentalis et Applicata. 130 (3), 275-281 (2009).
- Pérez, J., Infante, F., Vega, F. E. Does the coffee berry borer (Coleoptera: Scolytidae) have mutualistic fungi. Annals of the Entomological Society of America. 98 (4), 483-490 (2005).
- Benavides, P., Gil, P., Góngora, C., Arcila, A. Integrated pest management. Cenicafe. Manual of the Colombian coffee grower: Research and technology for the sustainability of coffee growing. Manizales: FNC: Cenicafé. 3, 179-214 (2013).
- Bustillo, P. A review of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae), in Colombia. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 101-116 (2006).
- Arcila, A., Benavides, P., Mejia, J. New Chemical Control Alternative for the Integrated Management of the Coffee Berry Borer. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557 (2015).
- Tapias, L., Martinez, C., Benavides, P., Gongora, C. Laboratory method to evaluate the effect of insecticides on the coffee berry borer. Cenicafé. 68 (2), 76-89 (2017).
- Bustillo, A. E., Marín, P. How to reactivate the virulence of Beauveria bassiana to control the coffee berry borer. Manejo Integrado de Plagas. 63, (2002).
- Constantino, L. M., et al. morphological and genetic aspects of Hypothenemus obscurus and Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae). Revista Colombiana de Entomología. 37 (2), 173-182 (2011).
- Estrela, C., et al.
- Diffey, B. L. Solar ultraviolet radiation effects on biological systems. Physics in Medicine and Biology. 36 (3), 299-328 (1991).
- BIOCAFE. , Available from: http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html (2022).
- Bustillo, A. E., et al. Integrated Management of the Coffee Berry Borer: Hypothenemus hampei Ferrari in Colombia. , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848 (1998).
- Portilla, R. Development and evaluation of an artificial diet for the rearing of Hypothenemus hampei. Cenicafé. 50, 24-38 (1999).
- Portilla, R. M., Streett, D. A. New techniques for automated mass production of Hypothenemus hampei on the modified Cenibroca artificial diet. Cenicafé. 57, 37-50 (2006).
