Summary
En metod med gröna kaffefrukter (GFs) utvecklades för att testa toxiciteten hos insekticider mot kaffebärsborraren (CBB). Insekticider eller giftiga ämnen applicerades på desinficerade GFs före eller efter CBB-angrepp. Insektsdödlighet, avstötningsförmåga och reproduktionskapacitet, förutom andra parametrar, utvärderades.
Abstract
Innan du rekommenderar insekticider för att behandla kaffebärborraren (CBB) Hypothenemus hampei är det värdefullt att känna till dödligheten och avstötningen hos dessa insekticider mot vuxna insekter eller deras inverkan på reproduktionsproduktionen. För närvarande tillgängliga metoder bedömer dock endast vuxendödlighet, vilket begränsar urvalet av nya insekticider med ett annat verkningssätt. I detta arbete undersöktes olika experimentella metoder för att identifiera de olika effekterna på CBB under laboratorieförhållanden. För detta samlades gröna kaffefrukter (GFs) och desinficerades genom nedsänkning i natriumhypokloritlösning följt av UV-ljusbestrålning. Parallellt desinficerades CBB-vuxna från en koloni genom nedsänkning i natriumhypokloritlösning. För att bedöma fruktskydd (preinfestation) placerades frukterna i plastlådor och insekticiderna applicerades. Sedan släpptes CBB-vuxna med en hastighet av två CBB per GF. GFs lämnades under kontrollerade förhållanden för att utvärdera CBB-angrepp och överlevnad efter 1, 7, 15 och 21 dagar. För att utvärdera insekticideffekten efter CBB-angrepp (postinfestation) frisattes vuxna CBB till GFs i förhållandet 2:1 i 3 timmar vid 21 °C. Infekterade frukter som visar CBB-vuxna med buken delvis exponerade valdes ut och placerades i 96-brunnsställ, och CBB: erna som borrade sig in i frukterna behandlades direkt. Efter 20 dagar dissekerades frukterna och CBB-biologiska stadier inuti varje frukt registrerades. GFs fungerade som substrat som efterliknar naturliga förhållanden för att utvärdera giftiga, kemiska och biologiska insekticider mot CBB.
Introduction
Kaffebärsborraren (CBB), Hypothenemus hampei, upptäcktes första gången 1988 i Colombia och har sedan dess blivit den viktigaste skadedjursarten i kaffeskörden. CBB-kvinnor lämnar födelsefrukten redan befruktad och söker nya frukter styrda av de flyktiga kemikalierna som de avger 1,2. En fullständig cykel uppfylls inom 23 dagar3 vid en temperatur av 25 °C. Cykeln börjar med att grundarkvinnan tränger in i fröet och lägger ägg i fruktens endosperm. De ekloserade larverna äter fröet. Om frukterna dissekeras vid denna tidpunkt skulle det vara möjligt att observera både grundarkvinnan och hennes avkommor. Efter 14 dagar blir larverna puppar - i allmänhet varar puppstadiet 5 dagar. I vuxenstadiet kopulerar honorna med sina syskon, och de nybefruktade honorna flyger bort från de skadade frukterna och letar efter nya kaffefrukter för att starta en ny cykel4.
Både penetrationsprocessen och resultatet av larvmatning skadar kaffefröet, minskar kaffedryckens kvalitet och minskar intäkterna avsevärt. mer än 5% angrepp i kaffeplantager anses i allmänhet vara den ekonomiska tröskeln.
CBB-bekämpningen baseras på en strategi för integrerat växtskydd (IPM), inklusive kulturell bekämpning och agronomiska metoder, naturliga biologiska agenser och användning av kemiska insekticider, vilket kräver säkerhetsförhållanden och snabb tillämpning4.
För att utvärdera nya insekticider för kontroll av CBB behövs billiga metoder som gör det möjligt att snabbt uppnå resultat. Både laboratorie- och fältprocedurer används för närvarande, inklusive konstgjorda dieter som innehåller kaffe där insekticiderna ingår 5,6, eller sprutning av insekticiderna på torrt pergamentkaffe 7,8,9. Dessutom har experiment utförda i fält med kaffeträdgrenar täckta med entomologiska ärmar rapporterats10,11; dessa metoder kräver dock intensivt arbete och långa utvärderingsperioder.
Ett tillstånd som liknar naturliga fältförhållanden, som också är snabbt och billigt, är användningen av gröna eller mogna kaffefrukter. Dessa frukter måste dock bibehållas under förhållanden som är lämpliga för att utveckla CBB, för att undvika förändringar och föroreningar av mikroorganismer för att bibehålla deras kvalitet och egenskaper. För detta ändamål har olika desinfektionsmedel använts, liksom förfaranden som involverar värme och strålning 7,9,12,13,14,15,16.
Dessutom kräver metoderna för insekticidutvärdering mot CBB simuleringar av vuxna honor som flyger på jakt efter frukt eller tränger in i dessa frukter17,18. För detta har konstgjorda fruktangrepp utförts i fältet 8,11,19, även om denna process är arbetsintensiv och beror på miljöförhållandena.
Här beskriver vi en standardiserad metod för utvärdering av produkter som kan ha olika effekter på CBB under kontrollerade miljöförhållanden som liknar fältförhållanden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Detta protokoll behandlar olika metoder för att identifiera olika effekter på CBB under laboratorieförhållanden.
1. Fruktsamling
- Plocka GFs med en utvecklingsålder på ~ 120-150 dagar efter blommande från träd i en kaffeplantage tidigt på morgonen.
2. Desinfektion av frukt20
- Ta med cirka 300 GFs till laboratoriet. Välj enhetligt stora och friska GFs och dra tillbaka pedunclesna.
- Doppa GFs i en tvållösning (2 ml flytande diskmedel i 998 ml kranvatten), följt av gnidning för att tvätta GFs. Skölj sedan frukterna med vatten och byt vatten tre gånger.
- Sänk ner GFs i 0,5% natriumhypokloritlösning (100 ml i 900 ml kranvatten) och rör om i en shaker vid 110 rpm i 15 min. Skölj sedan GFs med vatten genom att röra i en shaker och byta vatten tre gånger, var 10: e minut.
- Torka GFs med sterila pappershanddukar.
- Placera GFs i brickor (33 cm x 25 cm x 2 cm) och bestråla dem i 15 minuter och placera GFs på ett avstånd av 55 cm från UV-källan inuti en UV-aktiverad horisontell laminär flödesstation.
- Under 15 min-perioden, var 5: e minut, flytta GFs för att säkerställa bestrålning av hela frukten.
3. Desinfektion av insekter21
- Använd nyuppkomna (samma dag) CBB-insekter för att ställa in bioassays.
- Sänk ner CBB: erna i 0,5% natriumhypokloritlösning, rör dem långsamt med en borste i 10 minuter.
- Filtrera CBB: erna genom en muslinduk och tvätta dem tre gånger med sterilt destillerat vatten.
- Ta bort överflödigt vatten med sterila pappershanddukar.
4. Utvärdering av en produkt med skyddande effekt på frukterna (preinfestation) (figur 1)
- Använd en grupp GFs per experimentell enhet. I allmänhet används en grupp på 30 GFs per experimentell enhet.
- Placera GFs i plastlådor (experimentell enhet).
- Applicera testprodukten i de olika koncentrationerna för utvärdering. Utför applikationen med en bärbar sprutanhet. Här testades en alkaloidemulsion vid 5% och 6%.
- Som en kontroll, spraya en grupp GFs med vatten.
- Använd minst tre repetitioner (experimentell enhet) per behandling, spraya den ena efter den andra.
- I en steril huva, släpp två CBB-vuxna per GFs (totalt 60 CBB införs i plastlådorna). Efter 30 min täcker du lådorna.
- Lämna plastlådorna med de angripna GIF-värdena i ett rum eller en inkubator under kontrollerade förhållanden (mörk, 25 ± 2 °C och relativ luftfuktighet 71 % ± 5 %).
- Efter 1, 7, 15 och 21 dagar räknar du antalet borrfrukter och levande och döda insekter utanför frukterna i varje låda.
- Vid 20 dagar efter angrepp, dissekera varje GF under ett stereomikroskop, förstoring 10x.
- Räkna antalet friska frön eller frön som skadas av insekterna i varje frukt.
- Räkna de olika CBB-biologiska stadierna22 som observerats och räkna antalet döda insekter i varje frö för att bestämma insektsdödligheten per experimentell enhet.
5. Utvärdering av effekten av en produkt efter CBB-angrepp (efter angrepp) (figur 3)
- Använd grupper om 200 frukter per behandling.
- I asteril huva, släpp CBB-vuxna (2: 1-förhållandet mellan CBB-vuxna och GFs) till de tidigare desinficerade GFs, så att angreppet kan fortsätta i 3 timmar vid 21 ° C.
- Undersök GFs. Efter 3 timmar bör de flesta vara angripna, med buken på CBB fortfarande exponerad (position A20), som visas i figur 2.
- Välj 46 angripna GFs (position A) och placera dem i 96-brunnars plastställ (experimentell enhet). Frukterna bör förbli i denna position så att behandlingen kan sprutas direkt på CBB som perforerar frukten.
- Spraya minst tre gånger (tre rack) per behandling, en efter en, och täck ställen efter 30 min.
- Lämna racken med de angripna GFs i ett rum eller en inkubator under kontrollerade förhållanden (mörk, 25 ± 2 °C och relativ luftfuktighet 71% ± 5%).
- Efter 20 dagar dissekerar du GFs under ett stereomikroskop med 10x förstoring.
- Räkna antalet friska frön eller frön som skadas av insekterna i varje frukt.
- Räkna de olika CBB-biologiska stadierna22 och antalet döda insekter i varje frö för att bestämma insektsdödligheten per experimentell enhet.
6. Utvärdering av en produkt med avskräckande effekt på CBB
- Följ stegen 4.1-4.6 som beskrivs för att utvärdera en produkt med en skyddande effekt på frukterna.
- Efter att ha släppt CBB-vuxna i plastlådorna, räkna antalet CBB som flyger bort från lådorna och antalet som infekterar GFs. Följ sedan steg 4.7-4.11.
- Följ stegen 5.1-5.5 som beskrivs för att utvärdera produkten efter CBB-angreppet.
- Efter att ha sprayat varje behandling på insekterna i position A, räkna antalet CBB som flyttade ut ur GF och / eller flög bort från GF. Följ sedan steg 5.6-5.9.
7. Statistisk analys
OBS: Responsvariablerna är dödlighetsprocent över tid och andelen friska oinfekterade kaffefrön.
- Uppskatta medelvärdet och standardavvikelsen för varje responsvariabel för varje behandling.
- Utföra variansanalys för varje svarsvariabel med en modell för en helt randomiserad design.
OBS: Dunnetts 5% jämförelsetest utförs för att jämföra behandlingarna mot den absoluta kontrollen (vattenkontroll). - När behandlingarna skiljer sig avsevärt från den absoluta kontrollen, använd ett 5% minst signifikant skillnadstest (LSD) för att jämföra behandlingarna.
- Utvärdera testets kraft; om de är större än 85% uppfylls antagandena om variansernas normalitet och homogenitet.
Figur 1: Förfarande för utvärdering av insektsmedlens preinfektionseffekter på CBB. Steg för att utvärdera preinfestationseffekterna av insekticider på Hypothenemus hampei (CBB) med gröna frukter (GFs). (A) Val av frukt. (B) Sprutning av insekticiderna på kaffefrukterna. (C) CBB-angrepp av kaffefrukter i förhållandet 2:1 CBB per GF. (D) Angripna frukter. (E) Inkubation av frukterna under kontrollerade förhållanden. (F) Dissektion av frukt. (G) Räkna CBB-populationen inuti fröna. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Bearbeta kaffefrukternas CBB-angrepp. De angripna frukterna innehåller CBB-vuxna med buken delvis exponerad (position A). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Förfarande för utvärdering av insektsmedlens effekter på CBB. Steg för att utvärdera effekterna efter angrepp av insekticider på CBB med hjälp av GFs. (A) Fruktval. (B) Angrepp av frukterna med CBB i förhållandet 2:1 CBB per GF. (C) Urval av angripna frukter. (D) Sprutning av insekticiden på frukterna. (E) Inkubation av frukterna. (F) Dissektion av frukt. (G) Räkna CBB-befolkningen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Resultaten visade att CBB-honorna kände igen frukterna, och beroende på fruktytans egenskaper och den avgivna lukten började CBB-honorna tränga in eller bära frukterna inom 3 timmar vid 21 ° C.
Effekten av en insekticid på CBB när den appliceras på kaffefrukterna (preinfestationsförfarande) efter 24 timmar och över tiden visas i figur 4. De två insektsmedlen (alkaloidemulsion vid 5% och 6%) orsakade hög insektsdödlighet på dag 20 (tabell 1) och visade signifikanta skillnader jämfört med vattnets absoluta kontroll (P < 0,001), enligt LSD-testet. När det gäller procentandelen oinfekterade friska frön (tabell 1) fanns det också skillnader mellan kontroll- och insekticidgrupperna enligt Dunnetts test på 5% (P < 0,001). I kontrollgruppen var 37% av fröna inte angripna, medan insekticidapplikationen skyddade fröna, med 94% av fröna kvar friska vid användning av insektsmedel 2 och 89% med insektsmedel 1.
Figur 4: Preinfestationseffekter av insekticider i kontroll jämfört med två insekticidgrupper. Preinfestationseffekter av insekticiderna. Procentuell dödlighethos vuxna H. hampei utvärderad på dag 1, 7, 15 och 21 efter angrepp. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Behandling | Experimentell enhet | Dödlighet (%) | Friskt utsäde (%) | ||||
| Genomsnitt | Sd | Genomsnitt | Sd | ||||
| Kontroll (vatten) | 5 | 12.4 | 8.3 | 37 | 6.3 | ||
| Insektsmedel 1 | 5 | 83.9 | *b | 3.9 | 89 | *b | 6 |
| Insektsmedel 2 | 5 | 94.2 | *a | 3.2 | 94.2 | *a | 3.7 |
| * För varje variabel, skillnader med avseende på kontrollen (vatten) enligt Dunnetts test på 5%. | |||||||
Tabell 1: Effekt av preinfestationsbehandling på CBB. Procent dödlighet och procenthälsosamma frön efter 20 dagar. * För varje variabel, skillnader med avseende på kontrollen (vatten) enligt Dunnetts test på 5%.
Resultaten före angrepp efter 21 dagar visas i tabell 1 och resultaten över tid motsvarar figur 4. I detta fall täcktes kaffefrukterna med en giftig substans som orsakar insektsdödlighet. Insekterna blir impregnerade när de går över frukterna, smakar frukterna med sina palps eller börjar tugga fruktens epidermis. Dessutom kan de ämnen som appliceras över fruktytan förändra eller förändra fruktens naturliga lukt, så CBB-individerna kan stoppa angreppsprocessen, antingen flyga iväg eller föredra att separeras från frukten utan att röra vid den eller angripa den. Beroende på produktens verkningstid kan insektsdödlighet eller undvikande av angreppsbeteende kvarstå i 24 timmar eller längre.
Å andra sidan, om produkterna appliceras efter att insekterna börjar bära frukterna (postinfestation), kan produkterna tränga in i insektskutikeln och orsaka insektsdödlighet (tabell 2 och figur 5). Den högsta dödligheten inträffade med insekticid 2 (P < 0,01). Om dödligheten inträffar snabbt kommer insekten att dö innan den kommer in i fröet, och inga ägg eller insektspopulationer kommer att hittas inuti fröna.
Figur 5: Effekter efter angrepp av insekticider. Procentuell dödlighet hos vuxna H. hampei utvärderad på dag 1, 7, 15 och 21 efter angrepp. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Behandling | Experimentell enhet | Dödlighet (%) | Friskt utsäde (%) | ||||
| Genomsnitt | Sd | Genomsnitt | Sd | ||||
| Kontroll (vatten) | 5 | 11.1 | 3.0 | 57.3 | 3. 9 | ||
| Insektsmedel 1 | 5 | 46.8 | *b | 6.6 | 79.2 | *b | 8.6 |
| Insektsmedel 2 | 5 | 77.8 | *a | 3.7 | 90.0 | *a | 2.9 |
| * För varje variabel, skillnader med avseende på kontrollen (vatten) enligt Dunnetts test på 5%. | |||||||
Tabell 2: Effekter av behandling efter angrepp på CBB. Procent dödlighet och procent friska frön efter 20 dagar. * För varje variabel, skillnader med avseende på kontrollen (vatten) enligt Dunnetts test på 5%. För varje variabel indikerar olika bokstäver skillnader enligt LSD 5%.
Effekterna av insekticiderna återspeglas som procentandelen friska oinfekterade frön på dag 20 i utvärderingen (tabell 2). På grund av hög insektsdödlighet trängde insekten inte in i kaffefrön och skadade dem. Applicering av de produkter som skyddas mellan 79%-90% av kaffefröna, vilket visar skillnader i förhållande till kontrollen, där 57% av fröna befanns vara friska (P < 0,01). Signifikanta skillnader observerades också mellan de två insektsmedlen (P < 0,01).
I vissa fall dog insekterna mycket snabbt, även innan de skadade fröet. Men om insektens död tog längre tid kunde insekten nå fröet och deponera några ägg, och senare kommer den vuxna att dö. I detta fall hittades en minskad insektspopulation inuti kaffefröna jämfört med insektspopulationen som hittades i kontrollgruppen besprutad med vatten (tabell 3).
| Behandlingar | Total genomsnittlig insektspopulation / frö | * Duncan gruppering (alfa= 00,05) |
| Kontroll | 5 | a |
| Entomopatogen | 2.5 | b |
| Avvisande ämne | 3.27 | b |
| Entomopathogen + Repellent | 1.5 | c |
| För varje variabel indikerar olika bokstäver skillnader enligt LSD 5%. | ||
Tabell 3: Postinfestationseffekter efter behandling med en entomopatogen svamp och en repellent substans. Insektspopulation inuti fröna. GFs dissekerades vid 15 dagar. * För varje variabel, skillnader med avseende på kontrollen (vatten) enligt Dunnetts test på 5%. För varje variabel indikerar olika bokstäver skillnader enligt LSD 5%.
Figur 6 visar effekten av en produkt med postinfestationseffekter, en entomopatogen och effekten av ett avvisande ämne, liksom deras kombinerade verkan.
Figur 6: Postinfestationseffekter av en entomopatogen svamp och en repellent substans. Procent dödlighet hos vuxna H. hampei och fröskador. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Dessa metoder möjliggör snabb bestämning av olika effekter av giftiga produkter på CBB.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I detta protokoll är desinfektion av frukterna såväl som insekterna kritiska steg. När frukter från fältet används i laboratoriet visar de ofta hög förorening och uttorkning eftersom mikroorganismer och kvalster finns i epidermis 7,15,16. Därför kommer användning av frukter eller insekter som inte desinficeras att orsaka insektsdöd på grund av kontaminering orsakad av mikroorganismer, såsom bakterier eller svampar, vilket stör bioassayresultaten. Tidigare utvärderade Tapias et al.20 andra antimikrobiella medel för fruktdesinfektion, såsom karbendazim och bensalkoniumklorid; Men även om fruktdesinfektion var bra, var dessa föreningar mycket giftiga för CBB eller miljön.
Användningen av 0,5% natriumhypoklorit utvärderades genom att doppa frukterna i lösningen i 30 min och 15 min. Efter båda tidslängderna påverkades mikroorganismer, men CBB påverkades också efter 30 minuters doppning på grund av lösningens oxidationskraft23. UV-ljus orsakar skador på mikroorganismernas DNA24, vilket minskar föroreningen. Men vid högre doser (längre exponeringstid) uppstår fruktskador, vilket orsakar nekros och uttorkning av frö. Desinfektion med 0,5% natriumhypoklorit i 15 minuter följt av UV-ljusexponering i 15 minuter visade sig vara optimal i denna procedur.
Det andra övervägandet är insektskvalitet. För denna studie tillhandahölls insekterna av en insektsuppfödningsenhet som heter BIOCAFE25 (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). Svaga eller inavlade insekter från fattiga insektskolonier kommer att överskatta resultaten av en giftig produkt. Dessutom skulle laboratoriebeteendet i detta fall inte motsvara fältobservationerna av vildtypsinsekter med hög kondition. Dessutom kan sådana insekter innehålla ett stort antal mikroorganismer som kan störa bioassay. Därför är desinfektion21 ett viktigt steg för att säkerställa metodens framgång.
När det gäller angrepp (två insekter till en frukt) bestämdes det tidigare att användning av en större mängd insekter skulle öka antalet kaffefrukter med mer än en insektsperforering, vilket gjorde analysen svårare20. Dessutom är temperaturen vid vilken experimenten utförs viktig för att erhålla frukter med insekter i position A eller få en normal insektspenetration när frukterna sprutas. Genom att använda en temperatur på 21 °C i 3 timmar kunde mer än 70 % av frukterna angripas. När temperaturen ökade till mellan 25-27 °C nådde de flesta insekterna position B på kortare tid än vid 21 °C. Den snabbare penetrationen av CBB i frukten är en följd av insektens större aktivitet på grund av temperaturökning26. Således är besväret med att använda en temperatur på 25 ° C under en längre tid att många frukter finns med mer än en perforering och med insekter i både A- och B-positioner.
Före utvecklingen av denna metod användes konstgjorda insektsdieter med malet kaffe för att utvärdera effekterna av giftiga ämnen genom att införliva ämnet i eller över kosten 5,6; dessa dieter är dock dyra på grund av deras speciella komponenter 27,28. Bakplåtskaffe har också använts för insekticidutvärdering, där kaffebönorna strös med eller doppas i ämnet som ska utvärderas. Eftersom pergamentets struktur och sammansättning skiljer sig från fruktens perikarp, skulle det förväntas att interaktionen mellan insekticiden och kaffet är annorlunda. Med pergamentkaffe kan insekticidmolekylen lätt absorberas, vilket genererar större dödlighet än den som observerats under naturliga förhållanden. Dessutom är pergamentkaffe jämförelsevis dyrare eftersom det måste tas bort från fruktmassan och sedan torkas. Dessutom är det inte det naturliga substratet för insektstillväxt.
Sammanfattningsvis är användning av äkta grönt kaffe med näringsämnen som är tillräckliga för insektstillväxt det mest lämpliga sättet att utvärdera föreningarnas toxicitet för insekter under simulerade naturliga förhållanden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen av författarna har några intressekonflikter att deklarera.
Acknowledgments
Författarna uttrycker sitt tack till National Federation of Coffee Growers of Colombia, assistenterna vid Institutionen för entomologi (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Experiment Station Naranjal och Jhon Félix Trejos.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Beaker with spout, low form 500 mL | BRAND PP | BR87826 | |
| Benchtop Shaker | New Brunswick Scientific Innova 4000 Incubator Shaker | ||
| Dishwashing liquid soap-AXION | Colgate-Palmolive | AXION | |
| Hood; Horizontal Laminar Flow Station | Terra Universal | Powder-Coated Steel, 1930 mm W x 1118 mm D x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html) | |
| Insects CBB | BIOCAFE | (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). | |
| Multi Fold White paper towels | Familia | 73551 | |
| Preval Spray unit | Preval Merck | Z365556-1KT | https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB |
| Reversible Racks 96-Well | heathrowscientific | HEA2345A | https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a |
| Scalpel blades N 11 | Merck | S2771-100EA | |
| Scalpel handles N3 | Merck | S2896-1EA | |
| Sodium Hypochloride | The clorox company | Clorox | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Stemi 508 | https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html |
References
- Mendesil, E., et al. Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).
- Jaramillo, J., et al. Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch. PLoS ONE. 8 (9), 74277 (2013).
- Giraldo-Jaramillo, M., Garcia, A. G., Parra, J. R. Biology, thermal requirements, and estimation of the number of generations of Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) in the state of São Paulo, Brazil. Journal of Economic Entomology. 111 (5), 2192-2200 (2018).
- Benavides, P., Góngora, C., Bustillo, A. IPM Program to Control Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei, with Emphasis on Highly Pathogenic Mixed Strains of Beauveria bassiana, to Overcome Insecticide Resistance in Colombia. IntechOpen. , (2012).
- Martínez, C. P., Echeverri, C., Florez, J. C., Gaitan, A. L., Góngora, C. E. In vitro production of two chitinolytic proteins with an inhibiting effect on the insect coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae) and the fungus Hemileia vastatrix the most limiting pests of coffee crops. AMB Express. 2, 1-11 (2012).
- Padilla, B. E., Acuña, Z., Velásquez, C. S., Rubio, G. J. D. Inhibitors of [alpha]-amylases from the coffee berry borer Hypothenemus hampei in different plant species. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 125-130 (2006).
- Alvarez, J. H., Cortina, H. A., Villegas, J. F. Methods to evaluate antibiosis to Hypothenemus hampei Ferrari in coffee under controlled conditions. Cenicafé. 52 (3), 205-214 (2001).
- Arcila, A., Duarte, A. F., Villalba, D. A., Benavides, P. New Product in the Integrated Management of the Coffee Berry Borer in Colombia. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477 (2014).
- Jaramillo, J., Montoya, E., Benavides, P., Góngora, C. Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the control of coffee brocade in fruits on the ground. Revista Colombiana de Entomología. 41, 95-104 (2015).
- Bastidas, A., Velásquez, E., Benavides, P., Bustillo, A., Orozco, C. Evaluation of preformulated Beauveria bassiana (Bálsam) Vuillemin, for the control of the coffee berry borer. Agronomia. 17, 44-61 (2009).
- Villalba-Gault, D., Bustillo, A., Chaves Cordoba, B. Evaluation of insecticides for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 46, 152-163 (1995).
- Bustillo, A. E., Orozco, J., Benavides, P., Portilla, M. Mass production and use of parasitoids for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 47 (4), 215-230 (1996).
- Celestino, F. N., Pratissoli, D., Machado, L. C., Santos Junior, H. J. G. D., Mardgan, L., Ribeiro, L. V. Adaptation of breeding techniques of the coffee berry borer [Hypothenemus hampei (Ferrari). Coffee Science. 11 (2), 161-168 (2016).
- Domínguez, L., Parzanese, M.
- Jaramillo, J., Chabi-Olaye, A., Poehling, H. M., Kamonjo, C., Borgemeister, C. Development of an improved laboratory production technique for the coffee berry borer Hypothenemus hampei, using fresh coffee berries. Entomologia Experimentalis et Applicata. 130 (3), 275-281 (2009).
- Pérez, J., Infante, F., Vega, F. E. Does the coffee berry borer (Coleoptera: Scolytidae) have mutualistic fungi. Annals of the Entomological Society of America. 98 (4), 483-490 (2005).
- Benavides, P., Gil, P., Góngora, C., Arcila, A. Integrated pest management. Cenicafe. Manual of the Colombian coffee grower: Research and technology for the sustainability of coffee growing. Manizales: FNC: Cenicafé. 3, 179-214 (2013).
- Bustillo, P. A review of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae), in Colombia. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 101-116 (2006).
- Arcila, A., Benavides, P., Mejia, J. New Chemical Control Alternative for the Integrated Management of the Coffee Berry Borer. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557 (2015).
- Tapias, L., Martinez, C., Benavides, P., Gongora, C. Laboratory method to evaluate the effect of insecticides on the coffee berry borer. Cenicafé. 68 (2), 76-89 (2017).
- Bustillo, A. E., Marín, P. How to reactivate the virulence of Beauveria bassiana to control the coffee berry borer. Manejo Integrado de Plagas. 63, (2002).
- Constantino, L. M., et al. morphological and genetic aspects of Hypothenemus obscurus and Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae). Revista Colombiana de Entomología. 37 (2), 173-182 (2011).
- Estrela, C., et al.
- Diffey, B. L. Solar ultraviolet radiation effects on biological systems. Physics in Medicine and Biology. 36 (3), 299-328 (1991).
- BIOCAFE. , Available from: http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html (2022).
- Bustillo, A. E., et al. Integrated Management of the Coffee Berry Borer: Hypothenemus hampei Ferrari in Colombia. , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848 (1998).
- Portilla, R. Development and evaluation of an artificial diet for the rearing of Hypothenemus hampei. Cenicafé. 50, 24-38 (1999).
- Portilla, R. M., Streett, D. A. New techniques for automated mass production of Hypothenemus hampei on the modified Cenibroca artificial diet. Cenicafé. 57, 37-50 (2006).
