Summary
ここでは、子宮内膜脱落膜化の研究分野における古典的な子宮内膜脱落膜化実験である卵巣摘出マウスを用いた人工脱落膜モデルの生成方法について述べる。
Abstract
子宮内膜脱落膜化は子宮内膜の独特の分化過程であり、月経および妊娠と密接に関連しています。脱落膜化の障害は、不妊症、流産の再発、早産などのさまざまな子宮内膜障害を引き起こします。生殖研究における子宮内膜脱落膜モデルの開発と使用は、長い間生殖研究者にとってハイライトでした。マウスは、生殖と脱落膜化の研究に広く使用されています。脱落膜化に関しては、自然妊娠脱落膜化(NPD)、人工脱落膜化(AD)、および in vitro 脱落膜化(IVD)の3つの確立されたマウスモデルがあります。その中で、ADはマウス脱落膜化の信頼できるモデルと考えられており、実装が容易でNPDに近い。本稿では,卵巣摘出術によるマウス人工脱落膜モデルの生成と適用過程を改変し,卵巣外の影響を回避し,群内分散の少ない再現性の高い結果を得る方法に着目した。この方法は、子宮内膜脱落膜化の研究のための良好で信頼性の高い動物モデルを提供する。
Introduction
ヒト補助生殖技術の開発により、体外受精胚移植(IVF-ET)の現在の臨床妊娠率は自然妊娠のそれに達するか、それを超えています。それにもかかわらず、生殖補助医療の多くの患者は依然として複数の胚移植を受けていますが、希望する妊娠を達成できません。しかし、その具体的な分子メカニズムはまだ不明であるため、臨床介入は効果がなく、生殖医療が直面している重要な課題の1つです1,2。
子宮内膜因子は、体外受精不全の原因の約3分の2を占めています3。ヒト胚着床は、ポジショニング、接着、侵襲の3つの段階に分けられます4,5,6。母体の子宮内膜は、胚の到着に合わせて一連の変化を受けます。着床「ウィンドウ期間」を形成することは、胚着床に好ましい条件を提供する7,8。
ほとんどの哺乳類では、胚盤胞が子宮の管腔上皮に付着した後、胚盤胞を取り巻く間質細胞が急速に増殖および分化し始め、間葉の急速なリモデリングがその形状と機能を変化させ、胚着床につながります5,9,10。部位の体積と重量の急速な増加により、胚盤胞が子宮間質に埋め込まれるようになり、脱落膜化11として知られるプロセスが可能になります。子宮内膜間質は妊娠に備えて分化およびリモデリングしますが、間質細胞の移行は、脱落膜細胞がその機能を果たすためのスペースと新しいシグナル伝達接続を提供します12,13。間質細胞は脱落膜細胞に変化し、プロラクチン(PRL)、インスリン様成長因子結合タンパク質1(Igfbp1)などの多くの象徴的な因子を分泌します。研究によると、異常な脱落膜化が胚着床失敗の主な理由の1つであることが示されていますが、異常な脱落膜化の原因はまだ不明であり、さらに解明する必要があります1,14。
マウス人工脱落膜モデルは、脱落膜化の根底にある生理学的プロセスと分子メカニズムを研究するために不可欠です。人工脱落膜化(AD)は、主に妊娠または月経周期をシミュレートするための人工的な方法によって確立された子宮内膜脱落膜化のプロセスを指します。形態に関しては、妊娠脱落膜化と人工脱落膜化の間に全体的な違いはほとんどありません15,16。子宮腺は脱落膜が形成される前に子宮内膜に存在し、脱落膜化後に消えます。遺伝子発現に関しては、自然妊娠脱落膜化(NPD)とAD15の間にわずかな違いが確認されています。その結果、マウスの人工脱落膜化モデルは、妊娠脱落膜化をシミュレートして、未知の病因とヒト生殖疾患の新しい治療法を探索することができます。
NPD、AD、および in vitro 脱落膜化(IVD)は、マウス脱落膜化を達成するための3つの方法です。NPDモデルは自然妊娠に依存し、胚の影響を含む母体の生理学的状態に最も近い。移植部位と非移植部位の違いを比較することは、脱落膜化を研究するためのより生理学的で便利なアプローチです。ADモデルは、胚の影響を避けるために、精管切除された雄と交配した偽妊娠雌マウスに脱落膜を誘発するための刺激剤としてゴマ油の子宮内注射を使用することによって開発されました。NPDモデルとADモデルはどちらも異なる研究目的で重要な役割を果たしますが、母体ホルモン代謝の異なる活動によって引き起こされる交配の失敗やグループ内の違いを避けることはできません。IVDは、細胞レベルでのエストロゲンとプロゲステロンの併用治療に依存する方法であり、より厳しい実験条件と操作能力が必要です。しかし、 in vitro モデルは、生理学的条件下での脱落膜応答を完全にシミュレートすることはできません15。そこで我々は、脱落膜化に対する内因性ホルモンの影響を低減するために、従来のADから修正された簡便で改良された誘導法を提案する。脱落膜誘導の成功を確実にすることに基づいて、それは生理学的状態に近く、胚因子を排除する必要がある実験により適しています。
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Protocol
記載されているすべての動物実験は、南京大学医学部の動物の使用と世話に関する委員会(第20171202号)の附属ドラムタワー病院によって承認されました。すべての操作は、適切な動物の世話と使用の機関と国のガイドラインに従います。
注:マウスは、温度22°C±1°C、相対湿度50%±1%、明暗サイクル12時間/12時間、および食物と水への自由なアクセスを備えた、特定の病原体のない(SPF)環境で飼育されました。
1.マウス卵巣摘出術
- 手術の1日前に高温高圧滅菌器で手術器具を滅菌してください。
- 8週齢のC57BL / 6マウスの体重を量り、腹腔内(i.p)に応じて1%ペントバルビタールナトリウムを注射してマウスに麻酔をかけます。使用される用量は40 mg / kg17です。この用量は40〜60分の鎮静を提供し、これは卵巣摘出術の要件を満たす。術前鎮痛のために、マウスに5 mg / kgメロキシカム(s.c.)を注射します。.
注:マウスの麻酔の成功は、深部筋反射の消失と安定した呼吸によって示されます。麻酔が成功した兆候には、内側の眼窩に触れてもまばたきがない、舌を引っ張るときに飲み込むこと、つま先の間に皮膚をつまむときに脚が曲がらないこと、尾を針で刺すときに跳ね返らないことが含まれます。 - 麻酔中の乾燥を防ぐために、眼球に保護眼軟膏を塗布します。
- マウスが完全に麻酔をかけられたら手術を開始します。マウスを手術面の腹臥位に置き、石鹸水で濡らした後、背中の毛を剃ります。剃毛後、70%エタノールで皮膚を消毒します。
- 脊椎に平行な両後肢の大腿根の上端の0.5 cm(または肋骨下1.0 cm)に手術切開部位を見つけます(図1A)。
注:卵巣をすばやく局在化するには、正しい切開位置が不可欠です。 - 切開部位を中心にヨードフォア3倍で切開部を消毒し、切開部の周りに手術用ドレープを置きます。
- ハサミを使用して約0.5〜1.0 cmの縦方向の切開を行います。筋膜を切り、ピンセットで筋肉を受動的に分離します。
- 薄い筋肉層を通して腎臓の下極近くの切開野で白い脂肪パッドの一部を見つけます(図1B)。
注:白い脂肪パッドは卵巣の位置の最も明白な指標です。 - 脂肪塊を止血クリップで固定し、脂肪パッドで包まれた卵巣を切開部から引き出します。
- 卵巣と卵管の接合部を湾曲したピンセットで固定し、ハサミで卵巣茎に沿って卵巣を取り除きます。電気凝固ペンまたはアルコールランプで加熱した1mLシリンジの針を使用して出血を止めます。
注:その後の子宮角へのゴマ油の注射のための解剖学的ランドマークである卵管を必ず保存してください。 - 外科的切開部を生理食塩水で洗い流して組織の癒着を防ぎ、4-0縫合糸を使用して筋肉と皮膚をそれぞれ縫い合わせ、手術切開部を再度ヨードフォアで消毒します。
- マウスをケージ内の腹臥位に置き、光源と換気システムを備えた25°Cのインキュベーターで約2時間蘇生させます。
- 手術後のマウスに注意を払い、完全に回復するまで元の給餌場所に一人で戻し、十分な水と餌を与えます。
2.術後の休息とエストロゲンとプロゲステロンの処方
- 卵巣摘出術後、マウスが2週間休むことを確認してください。
- 超クリーンなキャビネットで、エストロゲン(2 ng / μL)とプロゲステロン(0.2 ng / μL)をRNA酵素フリー遠沈管のゴマ油に加えます。
- 遠沈管を37°Cの恒温槽に入れ、連続的に振って溶解を促進します。
- 完全に溶解した後、ゴマ油溶液を100μLのアリクアウトに分けて使用に便利です。調製したエストロゲンとプロゲステロンの溶液を4°Cの冷蔵庫に保管します。
3. 人工脱落膜誘発モデル
- 皮下(s.c)50μLのゴマ油中の100ngのエストロゲンを各マウスに3日間注射し、続いて2日間の休息15。
注意: エストロゲンとプロゲステロンが処方され、異なる場所に配置されていることを確認してください。プロゲステロンによるエストロゲンの汚染は失敗につながる可能性があります。 - 1 mgのプロゲステロンと10 ngのエストロゲンを50 μLのゴマ油に各マウスにさらに3日間注射します15。
- マウスを操作して、3回目のエストロゲン・プロゲステロン併用注射の6時間後に人工脱落膜モデルを15 から誘導する。
- 卵管の下端にある子宮角を見つけ、子宮角と一緒に20μLのゴマ油をゆっくりと注入し、組織を押し戻し、切開部を縫合し、マウスを回復させます。手術のアプローチは、マウス卵巣摘出術15と同様である。
注:卵巣摘出術が成功した場合にのみ、2回目の手術を進めてください(皮膚切開は十分に治癒し、卵巣は完全に切除され、卵管の残留端は周囲の組織に接着されません)。
注:ADモデルを誘導するには、20μLのゴマ油が適切です。20μL以上のゴマ油が反対側に容易に浸透します。 - 1 mgのプロゲステロンと10 ngのエストロゲン(H.)を含むゴマ油50 μLをさらに4日間注射します。図215,18の詳細を参照してください。
4. サンプル収集
- 二酸化炭素窒息によりマウス(n=6)を安楽死させ、子宮を採取する。両側の子宮の形状を観察し、写真を撮り、子宮角の重さを量ります(図3A、B)。
- 子宮組織の3〜5 mmを10%ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋して切片化します。切片をヘマトキシリンとエオジンで染色して、形態学的変化を観察します19 (図4A)。
- 子宮組織のさらに3〜5 mmを最適な切断温度コンパウンド(OCT)に埋め込み、液体窒素で凍結し、-80°Cの冷蔵庫に保管します。この組織を10μmに凍結切片し、アゾカップリング法20 により子宮組織中のアルカリホスファターゼ活性を検出した(図4B)。
注:パラフィン切片ではなく、凍結切片を使用してALP含有量を検出すると、満足のいく結果が得られます。 - Trizol試薬で子宮の全RNAを抽出し、qPCRマスターミックス(材料表)を使用したリアルタイムPCRシステム(材料表)で定量的リアルタイムPCR(qPCR)を実行して、プロラクチンファミリー8サブファミリーメンバー2(Prl8a2)、アルカリホスファターゼ肝臓/骨/腎臓(Alpl)、およびインスリン様成長因子結合タンパク質1(Igfbp1)15の相対mRNA発現を18S mRNAレベルに正規化して検出します(図4C-E).PCR条件に従ってください:ステージ1、95°Cで30秒間;ステージ2、95°Cで10秒、60°Cで30秒。サイクルを40回繰り返します。プライマー配列の完全なリストを表1に示します。
- 適切なソフトウェアで統計解析を行うための2-ΔΔCT 法およびt検定法を使用してqPCRデータを解析します。この研究では、p < 0.05が統計的に有意であると考えられた。
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Representative Results
マウス脱落膜モデルの指標には、子宮の一般的な形態、脱落膜化子宮と非脱落膜化子宮の質量比、子宮内膜の組織学的形態、および脱落膜化マーカー分子の発現レベルが含まれます。油によって誘発されたマウスの人工脱落膜子宮の一般的な形態は、妊娠中の子宮の形態に近い。子宮体は厚くなり、子宮腔は非誘発側よりも小さくなります。誘発された子宮角の体積と重量は、非誘発側のそれよりも有意に高い(図3A、B)。子宮組織のHE染色は、腺が消失し、誘導された角の子宮内膜間質細胞が、細胞境界が不明瞭な大きな丸い細胞質および多核の脱落膜細胞に分化することを示しました。非誘導側切片は、正常な生理学的状態下での子宮内膜組織形態を示す(図4A)。アゾカップリング法の結果は、油誘起側のアルカリホスファターゼ含量が非誘導側よりも有意に高いことを示した(図4B)。qPCRの結果、誘導された角におけるPrl8a2、Alpl、およびIgfbp1のmRNA発現は、非誘導の角のそれよりも有意に高いことが示され、オイルがマウスの人工脱落膜化を誘導できることが示唆されました(図4C-E)。
図1:マウス卵巣摘出術の手術切開 。 (A)マウス卵巣摘出術の位置。(B)卵巣摘出術中のマウス卵巣の位置。(C)卵巣摘出術中の卵巣の部位。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:操作の手順。 手順全体には、卵巣摘出術、術後の休息、人工脱落膜化モデルの誘導、および表現型の検証が含まれます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:マウス人工脱落膜モデルの生成 。 (A)油による人工脱落膜の代表写真。右側の子宮には、オイル(-)という名前のオイルは注入されませんでした。左側の子宮にオイル(+)という名前のオイルを注入しました。(B)オイルの有無にかかわらず注射された子宮の重量。p < 0.001 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:マウス人工脱落膜モデルの検証 。 (A)油による人工脱落膜の代表的なHE画像。スケールバー= 1mmおよび100μm。 (B)アゾカップリング法により、人工脱落膜のアルカリホスファターゼ活性を検出した。スケールバー= 200 μmおよび50 μm。 (C) Prl8a2 mRNAの発現量をqPCRで検出した。* p < 0.05。(d) Alpl mRNAの発現量。** p < 0.01。(e) Igfbp1 mRNAの発現量。** p < 0.01。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| Igfbp1 マウス qPCR-F | GCCCACAACAGAAAGAGAGATG |
| Igfbp2 マウス qPCR-R | GTAGACACACACCAGAGGTCCA |
| Prl8a2 マウス qPCR-F | ACCACAACCACCTCAGCTGG |
| Prl8a2 マウス qPCR-R | TGTTCAGGTCCATGAGCTGGTG |
| アルプルマウス qPCR-F | CCAGAAAGACACCTTGACTGTGG |
| アルプルマウス qPCR-R | TCTTGTCCGTGTCGCTCACCAT |
| 18s マウス qPCR-F | ATGGCCGTTCTTAGTTGGTG |
| 18s マウス qPCR-R | CGGACATCTAAGGGCATCAC |
表1:プライマー配列のリスト。
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Discussion
マウスの脱落膜化は、胚の存在に応じた自発的なプロセスであり、ヒトとは異なります。しかし、ガラスビーズの子宮注入や子宮裂傷などの人工刺激は、胚の代わりに子宮内膜の脱落膜化を誘発できることがわかっています。さらに、研究者らは、ステロイドホルモン、プロスタグランジン、および子宮腔への成長阻害因子の注射など、多くの要因が脱落膜を誘発するか、脱落膜化に関与する可能性があることを発見しました21。上記のモデリング方法と比較して、ここで詳述した卵巣摘出術のマウスモデルは、ゴマ油を覚醒剤として使用して、内因的に産生されるエストロゲンおよびプロゲステロンの影響を排除することができる。したがって、経済的で操作が簡単です。
卵巣は、その後の脱落膜化の誘発に影響を与える卵巣組織の残留を防ぐためにきれいに除去する必要があります。このステップは、卵巣によって産生される内因性エストロゲンとプロゲステロンの影響を減らすことを目的としています。卵管の損傷は、ゴマ油を子宮腔に注入するときに子宮を探すための兆候として使用できるため、避ける必要があります。腹部癒着または卵管除去が発生した場合、オペレーターは子宮と腸を区別することに注意を払わなければなりません。
皮下注射の過程で油漏れが発生しやすくなります。皮下注射部位として腹部の皮膚を選択し、乳首を避ける必要があります。オイルを注入し、ゆっくりと針を引き抜く必要があります。マウスがアクティブなときに針を引き抜くことができない場合、漏れやすくなります。漏れを防ぐために、綿球で針の部位をしばらく押す必要があります。この手術では、脱落膜化操作を誘発する前にマウスのホルモンレベルを安定させるために、外因性エストロゲンおよびプロゲステロン注射が使用されました。この注射方法は、マウスの着床周辺期におけるホルモン変化を模擬した。ここでは、第2のエストロゲンピーク後に脱落膜を誘導した。
この操作の成功の鍵は、注入されるゴマ油の量です。ゴマ油が多すぎると、子宮の他の角の空洞に浸透します。ゴマ油が不十分な場合、脱落膜反応の低下や子宮に沿った不均一な脱落膜化につながり、予期しない実験の違いが生じます。手術中、ゴマ油を注入するときに注射針を子宮腔に挿入し、針が子宮腔内にあることを確認するためにゆっくりと前後に引っ張る必要があります。子宮腔の一部は、注射に成功すれば透明に見えます。ピン刺しをピンセットで約10秒間そっとクランプして閉じていることを確認し、針を抜いた後のゴマ油の漏れを防ぐことができます。同時に、ゴマ油が子宮腔内に均等に広がるように、針で子宮体をそっと下に押します。
術後の治療と蘇生は、このモデルの成功の他の鍵です。まず、手術中の切開のための無菌環境を維持することが不可欠です。マウスが蘇生する前に、手術切開部をヨードフォアで消毒し、感染の発生率を減らすために医療用ガーゼで覆います。手術後、マウスは回復するために2〜3時間麻酔薬を代謝する必要があります。この期間中、マウスをより早く回復させ、70%アルコールとヨードフォアによる消毒によって引き起こされる低体温を避けるために、マウスを25°Cのインキュベーターに入れる必要があります。手術後数日以内に治癒に注意を払い、切開のひび割れ、腫れ、潰瘍などの手術上の合併症の種類を時間内に処理する必要があります。
Prl8a2とAlplは、最も古典的な脱落膜マーカーです。Igfbp1は、マウスの脱落膜細胞の主要なタンパク質でもあり、マウスの脱落膜化の特異的マーカーと考えられています。油誘発子宮角における Prl8a2、 Alpl、 およびIgfbp1 mRNAの発現レベルは、オイル注入なしの対照側と比較して有意に増加しています。さらに、油誘導側のアルカリホスファターゼ活性は、対照側のアルカリホスファターゼ活性よりも有意に高い。これらの結果はいずれも、人工脱落膜モデル15の成功を示す。
マウス人工脱落膜化モデルは、病原性不妊症分子を検証するために使用でき、異常な子宮内膜脱落膜化に関連する不妊症を診断および治療するための優れた検証モデルを提供できます。このモデルは、繰り返しの中絶や繰り返しの着床失敗などの生殖疾患の研究に役立ちます。胚の着床と浸潤における母性因子の役割を研究するために使用されます。このADモデルは、安全性が高く、成功率が高く、内因性ホルモンの影響を解決します。ただし、これは時間がかかり、非常に要求の厳しいプロセスです。実験手法をさらに最適化し、研究を円滑に進めていきます。
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Disclosures
著者は開示するものは何もありません。
Acknowledgments
著者らは、中国国家自然科学基金会(82001629、XQS)、江蘇省自然科学基金会青年プログラム(BK20200116、XQS)、および江蘇省ポスドク研究資金(2021K277B、XQS)からの支援に感謝したいと思います。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Estrogen | Sigma | E2758 | Hormone supplement |
| Progesterone | Sigma | P0130 | Hormone supplement |
| Sesame oil | Sigma | S3547 | Hormone supplement |
| Sodium pentobarbital | Dainippon Sumitomo Pharma Co.,Ltd. | Anaesthesia | |
| Meloxicam injection | Qilu Animal Health Products Co., Ltd | Analgesia | |
| Alkaline phophatase stain kit(kaplow's/azo coupling method) | Solarbio | G1480 | Alkaline phophatase stain |
| Eosin | Servicebio | G1005-2 | HE stain |
| Hematoxylin | Servicebio | G1005-1 | HE stain |
| ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | Q711-02 | qPCR |
| 70% ethanol | Lircon | ZH1120090 | Disinfect |
| Iodophor | Runzekang | RZK-DF | Disinfect |
| Erythromycin Eye Ointment | Guangzhou Baiyunshan | Mice eyeball protect | |
| 4-0 suture | Ethicon | W329 | Incision suture |
| 10% formalin | Yulu | L25010118 | Tissue fix |
| Optimal cutting temperature compound | Sakura | 4583 | Ssection |
| Trizol reagent | Ambion | 15596018 | qPCR |
References
- Carson, S. A., Kallen, A. N. Diagnosis and management of infertility: A review. JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).
- Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. Genetics of human female infertility dagger. Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).
- Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).
- Ng, S. W., et al. Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health. International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092 (2020).
- Birgit, G., Brosens, J. J. Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure. Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).
- Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function. Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).
- Paulson, E. E., Comizzoli, P. Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species. Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).
- Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success. Nature Communications. 9 (1), 2435 (2018).
- Tian, J., et al. Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger. Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).
- Large, M. J., DeMayo, F. J. The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling. Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).
- Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation. Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).
- Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions. Gene. 551 (1), 1-14 (2014).
- Jose, R. M., et al. Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity. Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).
- Pan-Castillo, B., et al. Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization. Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).
- Wang, C., et al. Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level. Genes. 11 (8), 935 (2020).
- De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization. Journal of Visualized Experiments. (121), e55168 (2017).
- Kerger, H., et al. Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia. Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).
- Filant, J., Spencer, T. E. Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus. Biology of Reproduction. 88 (4), 93 (2013).
- Sheng, X., et al. The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals. EBioMedicine. 75, 103790 (2022).
- Grogg, E., Pearse, A. G. Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase. Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).
- Labarta, E., et al. Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity. Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).
