Therapeutische Wirksamkeit des 308-nm-Excimer-Lasers in Kombination mit Matrin im Vitiligo durch Modulation von Serum-Immunglobulinen und entzündlichen Zytokinen

Zusammenfassung

Die kombinierte Verwendung eines 308-nm-Excimer-Lasers und oraler Matrine verbesserte die Repigmentierung im Vitiligo deutlich, indem sie die Melanozytenregeneration förderte und das Immungleichgewicht wiederherstellte. Diese dualmodale Therapie reduzierte proinflammatoriske Zytokine, normalisierte Immunglobuline, erhöhte IL-10 und erreichte eine überlegene klinische Wirksamkeit mit ausgezeichneter Sicherheit und Patiententoleranz.

Zusammenfassung

Vitiligo ist eine chronische autoimmune Depigmentierungsstörung, die durch den Verlust funktioneller Melanozyten und eine abweichende Immunaktivierung gekennzeichnet ist. Trotz Fortschritten in der Phototherapie bleiben die klinischen Reaktionen inkonsistent, hauptsächlich aufgrund anhaltender Entzündungsaktivität und unzureichender Immunregulation. Diese Studie untersuchte die therapeutische Wirksamkeit und immunologischen Mechanismen der Kombination von 308-nm-Excimer-Laser-Phototherapie mit oralem Matrin, einem natürlichen Alkaloid mit entzündungshemmenden und immunregulatorischen Eigenschaften. Insgesamt wurden 232 Patienten mit nicht-segmentalem Vitiligo prospektiv entweder einer Excimerlaser-Monotherapie oder einer Kombinationstherapie für 12 Wochen zugeteilt. Die klinische Verbesserung wurde mit dem Vitiligo Area Scoring Index (VASI) bewertet, und Serumimmunglobuline sowie Zytokine wurden analysiert, um die systemische Immunmodulation zu bewerten. Beide Behandlungsregimes führten zu einer signifikanten Repigmentierung, dennoch erzielte die Kombinationstherapie eine ausgeprägtere VASI-Reduktion (von 9,72 ± 3,24 zu Beginn auf 5,76 ± 2,18 nach der Behandlung) als der Excimer-Laser allein (von 9,68 ± 3,37 bis 6,63 ± 2,34, S. < 0,001). Der Anteil der Patienten, die eine ausgezeichnete oder gute Repigmentierung zeigten, war mit der kombinierten Behandlung deutlich höher (76,7 %) im Vergleich zur Monotherapie (58,7 %). Parallel dazu sanken die Serum-IgG-Werte deutlich (13,72 ± 2,64 g/L auf 11,85 ± 2,18 g/L, p < 0,001), während die IgA-Werte moderat stiegen (2,07 ± 0,68 g/L auf 2,23 ± 0,61 g/L, p = 0,041). Pro-inflammatoire Zytokine, darunter IFN-γ und IL-17, waren signifikant reduziert (beide p < 0,001), während das entzündungshemmende IL-10 von 8,3 ± 3,2 auf 12,9 ± 3,5 pg/mL (p < 0,001) stieg. Die VASI-Verbesserung korrelierte umgekehrt mit den Veränderungen von IFN-γ (r = –0,482, p < 0,05) und IL-17 (r = –0,451, p < 0,001) sowie positiv mit der IL-10-Erhöhung (r = 0,503, p < 0,001). Diese Ergebnisse zeigen, dass Matrine die Wirksamkeit des Exzimerlasers verbessert, indem es die Melanozytenregeneration fördert und das Immungleichgewicht wiederherstellt, wodurch eine biomarkerbasierte Dualmodalitätsstrategie für eine präzise und dauerhafte Behandlung von Vitiligo etabliert wird.

Einleitung

Vitiligo ist eine chronische, erworbene depigmentierende Hauterkrankung, die durch die selektive Zerstörung oder Dysfunktion der Epidermalmelanozyten gekennzeichnet ist, was zur Entwicklung gut definierter weißer Makulen unterschiedlicher Größe und Verbreitung führt. Sie betrifft etwa 0,5 % bis 2 % der Weltbevölkerung, ohne Geschlechts- oder Rassenpräferenz, und tritt oft vor dem 30. Lebensjahr^auf. Obwohl die Krankheit nicht lebensbedrohlich ist, stellt sie eine erhebliche psychosoziale und emotionale Belastung dar, die das Selbstwertgefühl, die soziale Funktion und die Lebensqualität erheblich beeinträchtigt³. Die Pathogenese des Vitiligo bleibt multifaktoriell und unvollständig aufgeklärt, was genetische Veranlagung, oxidativen Stress, Autoimmunreaktionen und neurohumorale Faktoren⁴ umfasst. Jüngste Erkenntnisse haben insbesondere die entscheidende Rolle der Immundysregulation sowohl bei der Initiierung als auch bei der Persistenz der Melanozytenzerstörung^{hervorgehoben 5,6}. In der Epidermis erkennen autoreaktive CD8⁺-zytotoxische T-Lymphozyten Melanozytenantigene wie Tyrosinase und gp100 und setzen Perforin und Granzym B frei, um Apoptose⁷ auszulösen. Gleichzeitig verstärken proinflammatoriske Zytokine, darunter Interferon-γ (IFN-γ), Tumornekrosefaktor-α (TNF-α), Interleukin-1β (IL-1β), IL-6 und IL-17, die entzündliche Kaskade, beeinträchtigen das Überleben der Melanozyten und hemmen die Pigmentzellmigration⁸. Das Ungleichgewicht zwischen regulatorischen T-Zellen (Tregs) und Effektor-T-Zellen trägt zudem zu anhaltender Immunaktivierung und Melanozytenverlust^bei. Daher sind therapeutische Strategien, die sowohl die Melanozytenregeneration fördern als auch die Immunhomöostase wiederherstellen, von großer klinischer Bedeutung.

Über lokale Immunabomalien hinaus deuten zunehmende Hinweise darauf hin, dass Vitiligo eine systemische Autoimmunerkrankung darstellt. Veränderte Serumspiegel von Immunglobulinen (IgG, IgA und IgM) wurden bei Patienten dokumentiert, was eine generalisierte B-Zell-Aktivierung und eine abnormale humorale Immunität^10,11 widerspiegelt. Eine dysregulierte Immunglobulinproduktion kann die Bildung von Autoantikörpern gegen melanozytenspezifische Antigene fördern und so Gewebeschäden verschärfen. Darüber hinaus zeigt das Zytokinmilieu bei Vitiligo-Patienten häufig erhöhte IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-17 und IL-23, was auf systemische Immunaktivierung jenseits der läsionalen Haut^12,13 hindeutet. Diese Immunmediatoren dienen nicht nur als pathogene Treiber, sondern korrelieren auch mit der Krankheitsaktivität und der therapeutischen Antwort, wodurch sie als potenzielle Biomarker für die Behandlungsüberwachung positioniert^werden. Daher können Interventionen, die das Immungleichgewicht wiederherstellen können – indem sie sowohl zelluläre als auch humorale Immunantworten modulieren – überlegene und dauerhafte klinische Ergebnisse bieten. Trotz der Verfügbarkeit von topischen Kortikosteroiden, Calcineurininhibitoren, systemischen Immunsuppressiva und Phototherapie bleibt die Wirksamkeit der Behandlung für viele Patienten, insbesondere für solche mit extensiven oder refraktären Erkrankungen¹⁵, weiterhin unbefriedigend. Folglich haben Kombinationsansätze, die mehrere pathophysiologische Mechanismen ansprechen, in den letzten Jahren an Bedeutung gewonnen.

Phototherapie ist seit langem ein Grundpfeiler im Vitiligo-Management. Unter verschiedenen Modalitäten hat sich der 308-nm-Excimer-Laser (EL) als eine der gezieltesten und wirksamsten Optionen für lokalisierten Vitiligo^16,17 erwiesen. Es liefert monochromatische UVB-Strahlung bei 308 nm direkt an depigmentierte Läsionen und stimuliert so die Melanozytenproliferation und Migration aus den Haarfollikeln und minimiert die Exposition des umliegenden gesunden^{Gewebes 18}. Im Vergleich zu herkömmlichem schmalbandigen UVB bietet der Excimerlaser Vorteile wie schnellen Beginn der Repigmentierung, kürzere kumulative Belichtungszeit und ein verbessertes Sicherheitsprofil^{von 19,20}. Mechanistisch induziert eine niedrig dosierte 308-nm-Bestrahlung eine lokale Immunmodulation, indem sie die epidermale Langerhans-Zellaktivität reduziert, die Treg-Infiltration erhöht und die Melanogenese durch Hochregulation von Tyrosinase und mikrophthalmisch-assoziiertem Transkriptionsfaktor (MITF)²¹ verbessert. Die Reaktionen bleiben jedoch variabel, und viele Patienten erreichen keine vollständige Repigmentierung. Übermäßige oder verlängerte Bestrahlung kann paradoxerweise die Entzündungsfreisetzung von Zytokinen – wie IL-1β, IL-6 und TNF-α – auslösen und eine weitere Melanozytenschädigung^22,23 verursachen. Daher stimuliert die Excimer-Laserbehandlung zwar effektiv die Regeneration der Melanozyten, ihre Wirksamkeit kann jedoch durch gleichzeitige Entzündungsaktivierung eingeschränkt sein. Diese Dualität unterstreicht die Notwendigkeit zusätzlicher Therapien, die Entzündungen mindern und die Immuntoleranz während der Phototherapie verbessern können.

Matrine, ein natürliches Quinolizidin-Alkaloid, das aus Sophora flavescens (Ku Shen) gewonnen wird, hat kürzlich als immunmodulierendes und entzündungshemmendes Mittel mit niedriger Toxizität^24,25 große Aufmerksamkeit erregt. Experimentelle Studien haben gezeigt, dass Matrine die NF-κB- und JAK/STAT-Signalwege unterdrücken, die Produktion proinflammatorischer Zytokine (einschließlich IFN-γ, TNF-α und IL-6) herunterregulieren und die Expression entzündungshemmender Mediatoren wie IL-10²⁶ fördern kann. Bei immunbezogenen Erkrankungen hat Matrin Wirksamkeit bei der Modulation der Th1/Th17-Differenzierung, der Verbesserung der regulatorischen T-Zellfunktion und der Normalisierung von Immunglobulinprofilen^{gezeigt 27,28}. Darüber hinaus zeigt Matrin antioxidative und anti-apoptotische Effekte, die Melanozyten vor oxidativem Stress verursachten Verletzungen schützen^{können 29}. Obwohl diese Eigenschaften Matrin zu einem attraktiven Kandidaten für Autoimmunerkrankungen machen, haben nur wenige Studien seine Rolle bei Vitiligo untersucht. Die Kombination von Matrine mit Phototherapie bietet einen neuartigen therapeutischen Ansatz: Matrin könnte die entzündliche Mikroumgebung abschwächen, die Melanozytenhomöostase stabilisieren und die laserinduzierte Melanogenese verstärken. Darüber hinaus kann die systemische immunregulatorische Aktivität der Matrine die lokalen Effekte des Excimer-Lasers ergänzen, was zu einem synergistischen klinischen Nutzen führt. Soweit wir wissen, hat keine frühere klinische Studie die kombinierte Anwendung von 308-nm-Excimer-Laser und Matrin im Vitiligo umfassend untersucht oder ihre immunologischen Korrelate mittels Serum-Biomarkerprofilierung bewertet.

Auf Grundlage dieser Begründung stellten wir die Hypothese auf, dass die Kombination aus 308-nm-Excimer-Laser und Matrin eine bessere therapeutische Wirksamkeit im Vergleich zur Excimerlaser-Monotherapie bieten würde, indem sie gleichzeitig die Melanozytenregeneration fördert und aberrante Immunaktivierung unterdrückt. Konkret postulierten wir, dass die adjunktive Matrinengabe die klinische Repigmentierungsrate erhöhen, die Serum-Immunglobulinspiegel (IgG, IgA und IgM) in Richtung physiologisches Gleichgewicht modulieren und pro-inflammatorische Zytokine wie IFN-γ, TNF-α und IL-17 reduzieren würde, während die entzündungshemmenden Zytokine erhöht werden. In dieser Studie evaluierten wir systematisch klinische Ergebnisse, immunologische Parameter und deren Korrelationen bei Patienten mit Vitiligo, die mit dieser Kombinationstherapie behandelt wurden. Die Neuheit dieser Untersuchung liegt in ihrem doppelten mechanistischen Schwerpunkt – lokaler photobiologischer Stimulation und systemischer Immunmodulation – sowie in der Integration quantitativer Biomarker-Analyse zur Aufklärung therapeutischer Mechanismen. Indem wir die immunregulatorische Wirkung von Matrin in Kombination mit gezielter Phototherapie klären, zielt unsere Arbeit darauf ab, eine evidenzbasierte Grundlage für ein neues therapeutisches Paradigma im Vitiligo-Management zu schaffen. Letztlich könnten diese Erkenntnisse das Fachgebiet in Richtung präziser, immungesteuerter Phototherapiestrategien vorantreiben, die nicht nur Repigmentierung, sondern auch langfristige Krankheitsstabilisierung und Rückfallprävention erreichen.

Protokoll

Diese Studie wurde gemäß den ethischen Grundsätzen der Helsinkier Erklärung und den institutionellen Vorschriften für die Humanforschung durchgeführt. Die Studie wurde gemäß den ethischen Grundsätzen der Helsinkier Erklärung durchgeführt und vom Ethikkomitee des Volkskrankenhauses Xingtai, Abteilung für Dermatologie, genehmigt (Genehmigungs-ID: 2021[029]). Alle Teilnehmer gaben vor der Teilnahme eine schriftliche informierte Einwilligung ab.

Patientenauswahl
Insgesamt wurden über einen Zeitraum von 3 Jahren von Januar 2021 bis Dezember 2023 232 Patienten mit klinischer Vitiligo eingeschrieben. Alle Teilnehmer wurden mit nicht-segmentalem Vitiligo (generalisierter oder lokalisierter Typ) diagnostiziert und aufgrund des Fehlens oder Vorhandenseins neuer Läsionen innerhalb von 3 Monaten vor der Einschreibung als stabil oder progressiv klassifiziert. Krankheitsdauer und Verteilung der Läsion wurden zu Beginn erfasst. Die Aufnahmekriterien umfassten Personen im Alter von 18 bis 65 Jahren mit stabilem oder fortschreitendem Vitiligo, der von Dermatologen durch klinische Untersuchung, Wood's-Lampenbeleuchtung und Dermoskopie bestätigt wurde. Ausschlusskriterien waren Schwangerschaft, Laktation, photoallergische Störungen, systemische Autoimmunerkrankungen, schwere Leber- oder Nierenfunktionsstörungen sowie vorherige Anwendung von systemischen Kortikosteroiden, Immunsuppressiva oder Phototherapie innerhalb von 3 Monaten. Alle Eingriffe wurden unter kontinuierlicher ethischer Aufsicht durchgeführt, um den Komfort und die Sicherheit der Patienten während des gesamten Behandlungsverlaufs zu gewährleisten.

Studienübersicht und Behandlungsablauf
Der gesamte Arbeitsablauf der Studie, einschließlich Patientenaufnahme, Gruppenzuteilung, Nachuntersuchungen und Biomarker-Analyse, ist in Abbildung 1 dargestellt. Geeignete Teilnehmer wurden im Verhältnis 1:1 einer von zwei parallelen Studiengruppen zugeteilt: der 308-nm-Excimer-Laser-Monotherapiegruppe (Excimer-Laser allein; n = 116) und der Kombinationstherapiegruppe (308-nm Excimer-Laser plus orale Matrine; n = 116). Die Gruppenzuweisung erfolgte mit einer computergenerierten Zufallssequenz, die von einem unabhängigen Forschungsmitarbeiter erstellt wurde, der nicht an der Ergebnisbewertung beteiligt war; Die Zuweisungen wurden in fortlaufend nummerierte, versiegelte Umschläge gelegt und nach der Einschreibung geöffnet, um die Behandlungszuteilung zu bestimmen. Der therapeutische Arbeitsablauf bestand aus drei Hauptphasen: (1) Baseline-Bewertung und -dokumentation, (2) 12 Wochen aktive Behandlung gemäß dem zugewiesenen Regime und (3) Nachbehandlungsbewertung, einschließlich Labortests von Serumimmunglobulinen und entzündlichen Zytokinen. Jeder Patient erhielt einen standardisierten Behandlungsplan, identische Nachsorgeintervalle und einheitliche Laboranalyseverfahren. Klinische Fotografien und VASI-Bewertung wurden von Dermatologen durchgeführt, die für die Behandlungszuweisung blind waren. Alle Eingriffe wurden in der dermatologischen Phototherapie-Suite des Xingtai People's Hospital unter kontrollierten Umgebungsbedingungen durchgeführt (Raumtemperatur 22–24 °C, relative Luftfeuchtigkeit 40%–60%).

Vorbereitung des Behandlungsbereichs
Vor jeder Lasersitzung wurden die depigmentierten Zielbereiche vorsichtig mit steriler physiologischer Kochsalzlösung gereinigt und mit fusselfreiem medizinischem Gaze trocken getupft. Die läsionelle Haut wurde untersucht, um das Fehlen einer Infektion, Exkoriation oder Kruste zu bestätigen. Wenn bei einem einzigen Besuch mehr als eine Läsion behandelt wurde, wurde jede Läsion nacheinander vorbereitet und behandelt. Läsionen, die ein einziges Bestrahlungsfeld überstiegen, wurden in benachbarte Bestrahlungsfelder unterteilt, und die umliegende normale Haut wurde für jedes Feld mit einer undurchsichtigen, UV-blockierenden Schicht abgeschirmt, um unnötige Exposition zu minimieren. Patienten wurden angewiesen, topische Mittel, photosensibilisierende Kosmetika oder Parfüms für 24 Stunden vor der Behandlung zu vermeiden. Während des gesamten Eingriffs wurden sowohl vom Patienten als auch vom Bediener eine Schutzbrille getragen.

308-nm-Excimer-Laserbestrahlungsverfahren
Ein monochromatisches 308-nm-Xenonchlorid-(XeCl)-Excimer-Lasersystem wurde verwendet. Alle Lasersitzungen wurden von zwei ausgebildeten dermatologischen Ärzten nach einem standardisierten Protokoll durchgeführt, um eine konstante Energieausbeute, Bestrahlungsdistanz und Reproduzierbarkeit sicherzustellen. Die Geräteausgabe wurde vor jedem Behandlungstag mit einem kalibrierten UV-Leistungsmesser überprüft, und alle Systeme wurden wöchentlich von einem zertifizierten Techniker kalibriert, um eine Fehlermarge unter ±5 % zu halten. Vor der ersten Bestrahlung wurde die minimale Erythema-Dosis (MED) für jeden Patienten bestimmt, indem inkrementelle Dosen (100–400 mJ/cm^²) auf kleine Testflächen am inneren Unterarm angewendet und die Erythemantwort nach 24 Stunden bewertet wurden; Die Ergebnisse wurden fotografiert und in Patientenakten festgehalten. Eine repräsentative MED-Dokumentation und eine Dosisanpassungstabelle von Sitzung zu Sitzung sind in ergänzender Tabelle 1 bereitgestellt. MED wurde definiert als die niedrigste Testdosis, die bei 24 Stunden ein klar erkennbares, gleichmäßiges Erythem erzeugt. Die Anfangsdosis der Behandlung wurde auf 80–90 % des individuellen MEDs festgelegt, und die anschließenden Dosisänderungen folgten einem vordefinierten Algorithmus basierend auf der vorherigen 24-Stunden-Erythemantwort (Erhöhung um 10–20 % bei fehlendem oder leichtem Erytheme, gleichbleibende Dosis bei moderatem Erythem und Reduzierung um 10%–20 % bei Blasen oder starken Schmerzen). Die anfängliche therapeutische Dosis wurde auf 150–250 mJ/cm² festgelegt (etwa 80 %–90 % des individuellen MED). Jede Sitzung begann damit, dass der Patient bequem auf einem verstellbaren Stuhl saß. Das Laserhandstück wurde senkrecht (90°) zur Haut in einem Abstand von 10–15 cm gehalten, und kreisförmige oder rechteckige Bestrahlungsfelder wurden so ausgerichtet, dass depigmentierte Bereiche mit minimaler Überlappung vollständig bedeckt wurden. Die Bestrahlung dauerte je nach Fluenz 1–3 Sekunden pro Expositionsfeld. Die Dosen wurden anschließend um 10–20 % pro Sitzung entsprechend der vorherigen Erythemantwort erhöht; Bei moderatem Erythem wurde die vorherige Dosis beibehalten, während Blasen oder Schmerzen eine Reduktion von 10–20 % rechtfertigten. Die maximale Dosis überschritt nicht 2.000 mJ/cm². Jede Sitzung umfasste alle sichtbaren Läsionen und dauerte je nach Ausmaß 10–20 Minuten. Die Behandlungen wurden zweimal wöchentlich mit mindestens 72 Stunden zwischen den Sitzungen über einen Zeitraum von insgesamt 12 Wochen (24 Sitzungen) durchgeführt. Nach der Bestrahlung wurde eine dünne Schicht steriles, aloebasierten Gels aufgetragen, um das lokale Erythem zu lindern. Die Patienten wurden angewiesen, 48 Stunden lang keine Sonneneinstrahlung zu verwenden und während der gesamten Behandlung einen Breitband-Sonnenschutz (SPF >30) zu verwenden. Läsionen mit >50 % Repigmentierung setzten sich unter denselben Parametern fort, bis stabile Pigmentierung erreicht war.

Orale Matrinenverabreichung
In der Kombinationsgruppe wurde ein steriler wässriger Extrakt aus Sophora-flavescens-Wurzeln gemäß der Chinesischen Artikhabok (Ausgabe 2020) ³⁰ hergestellt und auf eine Konzentration von 5 mg/mL mit ≥98 % Reinheit standardisiert, verifiziert durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC). Die Lösung wurde bei 4 °C in bernsteinfarbenen Glasflaschen gelagert, um Photodegradation zu verhindern. Zufällige Chargentests bestätigten Alkaloidkonzentration (5 ± 0,3 mg/mL) und mikrobielle Sterilität. Jeder Patient erhielt die matrine Lösung durch orale Verabreichung in einer Dosis von 0,3 g (60 ml) zweimal täglich für 12 Wochen, synchronisiert mit dem Laserbehandlungsplan. Die Dosierung wurde auf Grundlage früherer pharmakologischer Daten ausgewählt, die eine wirksame Immunmodulation mit einem günstigen Sicherheitsprofil bei chronisch entzündlichen Dermatosen^31,32 zeigten. Die Patienten wurden angewiesen, die Lösung 30 Minuten nach den Mahlzeiten einzunehmen, um Magen-Darm-Beschwerden zu minimieren und während der Therapie auf Alkohol, starken Tee und scharfes Essen zu verzichten, um die Leberbelastung zu verringern. Leichte Übelkeit oder Müdigkeit wurde durch die Verabreichung einer kleinen Menge warmes Wasser behandelt. Die Therapietreue wurde durch ein Medikamententagebuch und die Rückgabe der Flasche bei jedem Nachsorgetermin bewertet. Die Sicherheit wurde bei jedem Besuch durch strukturierte Symptomuntersuchungen und die Dokumentation von unerwünschten Ereignissen bewertet, darunter gastrointestinale Beschwerden, Müdigkeit und alle Anzeichen, die auf eine Leberintoleranz hindeuten. Während der Beobachtungszeit waren keine zusätzlichen systemischen Medikamente, topische Kortikosteroide oder Immunsuppressiva erlaubt, um störende Effekte zu verhindern.

Bewertung der klinischen Reaktion
Die Pigmentänderungen wurden zu Beginn und in den Wochen 4, 8 und 12 von zwei erfahrenen Dermatologen untersucht, die auf Behandlungsinformationen verblindet waren. Standardisierte digitale Fotografien wurden unter identischer Beleuchtung und Kameraeinstellungen (Entfernung 60 cm, Belichtung 1/60 s, ISO 200) aufgenommen. Der Grad der Repigmentierung wurde mit dem Vitiligo Area Scoring Index (VASI) quantifiziert. Die Läsionen wurden zusätzlich in vier Kategorien eingeteilt: Ausgezeichnet (≥75 % Repigmentierung), Gut (50 %–74 %), Mäßig (25 %–49 %), Schlecht (<25 %). Die Patienten füllten außerdem eine 10-Punkte-Visual Analogue Scale (VAS) zur Zufriedenheit und Symptomlinderung aus. Bei jedem Besuch wurden unerwünschte Ereignisse wie Erythem, Brennen, Pruritus, Blasenbildung und Hyperpigmentierung dokumentiert.

Serumprobenentnahme
Für die Biomarkeranalyse wurde von jedem Patienten zu Beginn und am Ende der 12. Woche nüchterndes peripheres Blut (5 ml) mit Serumtrennungsröhrchen entnommen. Die Proben durften 30 Minuten bei Raumtemperatur gerinnen und wurden bei 800 x g für 10 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Das Supernatant-Serum wurde in 0,5 mL Kryoviale aliquotiert und bis zur Analyse bei −80 °C gelagert. Alle Proben wurden innerhalb von 2 Stunden nach der Entnahme verarbeitet, um den Zytokinabbau zu minimieren.

Quantifizierung von Serumimmunglobulinen
Die Serum-IgG-, IgA- und IgM-Konzentrationen wurden mittels automatisierter Immunnephelometrie gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt. Kalibrierungskurven wurden mit seriellen Verdünnungen von Referenzstandards erstellt. Jeder Test enthielt Qualitätskontrollserum in hohen und niedrigen Konzentrationen. Die Messungen wurden in g/L angegeben und zweimal wiederholt, um eine intraassay-Variation < 5 % sicherzustellen. Die Präzision und Kalibrierung des Instruments wurden täglich mit rückverfolgbaren Steuerungsstandards überprüft. Die Ergebnisse wurden elektronisch aufgezeichnet und von zwei unabhängigen Technikern überprüft, die auf Patientendaten verblindet waren.

Messung entzündlicher Zytokine
Die Zytokinprofilierung umfasste IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17 und IL-10, quantifiziert mit einer multiplex-enzymgebundenen Immunsorbent-Assay-(ELISA)-Plattform. Die Herstellung der Reagenz folgte dem Standardprotokoll des Herstellers. Kurz gesagt wurden 100 μL verdünntes Serum zu jedem antikörperbeschichteten Brunnen hinzugefügt und 2 Stunden bei 37 °C inkubiert. Nach dem Waschen mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung, die 0,05 % Tween-20 (PBST) enthält, wurden 100 μL biotinylierter Nachweisantikörper hinzugefügt und 1 Stunde lang inkubiert. Anschließend wurden die Brunnen 30 Minuten lang mit Streptavidin-Meerrettichperoxidase inkubiert, gefolgt von einer Farbentwicklung mit Tetramethylbenzidin (TMB)-Substrat für 10 Minuten im Dunkeln. Die Reaktion wurde mit 50 μL 2 mol/L Schwefelsäure gestoppt, und die Absorption wurde bei 450 nm mit einem Mikroplattenmesser gemessen. Standardkurven wurden aus seriellen Verdünnungen rekombinanter Zytokine erzeugt, und die Konzentrationen wurden als pg/mL angegeben. Alle Proben wurden doppelt gemessen. Um die Reproduzierbarkeit zu gewährleisten, wurde der Interassay-Variationskoeffizient (CV) unter 10 % gehalten. Leerwellen enthielten einen Assay-Puffer ohne Serum, und die Negativkontrollwellen enthielten zytokinfreie Matrix, die identisch mit den Proben verarbeitet und dem 0-pg/mL-Standard entspricht, um die Assay-Spezifität zu bestätigen. Alle hämolysierten oder lipämischen Proben wurden aus der Endanalyse ausgeschlossen.

Statistische Analyse
Die Daten wurden in eine eigene elektronische Datenbank eingegeben und von zwei unabhängigen Datenmanagern auf Genauigkeit überprüft. Die Stichprobengröße wurde anhand der erwarteten Effektgröße geschätzt (Cohens d = 0,5), wobei α = 0,05 und Potenz (1–β) = 0,8 sind, was mindestens 100 Teilnehmer pro Gruppe ergibt. Um mehrere Vergleiche über Zytokine hinweg zu kontrollieren, wurde die Bonferroni-Korrektur bei Bedarf angewendet. Multivariate lineare Regression wurde, wo nötig, angewendet, um potenzielle Störfaktoren wie Alter, Geschlecht, Krankheitsdauer und Ausgangsbereich der Läsion zu berücksichtigen. Die Normalverteilung stettiger Variablen wurde mit dem Shapiro–Wilk-Test überprüft. Deskriptive Statistiken wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) für normalverteilte Daten oder als Median (Interquartilbereich, IQR) für schiefe Daten präsentiert. Veränderungen vor und nach der Behandlung wurden mittels gepaarter T-Tests analysiert, während Vergleiche zwischen den Gruppen mit unabhängigen Proben-Tests oder Mann–Whitney-U-Tests je nach Bedarf analysiert wurden. Kategoriale Daten wurden mit dem Chi-Quadrat- oder Fisher-Exakt-Test verglichen. Korrelationen zwischen Zytokinspiegeln, Immunglobulinen und der Verbesserung der Pigmentierung wurden anhand des Pearsonschen Korrelationskoeffizienten bewertet. Alle Analysen wurden mit SPSS v26,0 (RRID: SCR_002865) durchgeführt, und ein zweiseitiges p < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

Ergebnisse

Klinische Ausgangsmerkmale zeigten vergleichbare demografische und Krankheitsprofile zwischen den Gruppen
Insgesamt wurden 232 Patienten mit nicht-segmentalem Vitiligo aufgenommen und gleichmäßig der Excimergruppe (n = 116) oder der Kombinationstherapiegruppe mit Laser plus oralem Matrin (n = 116) zugeordnet. Basis-demografische und klinische Parameter, darunter Alter (35,8 ± 6,0 vs. 35,4 ± 5,6 Jahre), Geschlechtsverteilung (männlich/weiblich: 59/57 vs.

Diskussion

Diese Studie stellt einen kombinierten therapeutischen Ansatz vor, der einen 308-nm-Excimer-Laser mit oralem Matrin zur Behandlung von nicht-segmentalem Vitiligo integriert. Die zentrale Annahme ist, dass die duale Modulation – lokale photobiologische Stimulation von Melanozyten in Verbindung mit systemischer Immunregulation – eine robustere und anhaltendere Repigmentierung als die Excimergruppe erreichen kann. Die Ergebnisse stützen diese Hypothese: Die Kombinationstherapie führte zu fr...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
308-nm XeCl Excimer-Lasersystem	STRATA Hautwissenschaften (XTRAC)	Velocity 400 (Modell)	Ziel des 308-nm-UVB-Lasers für Vitiligoläsionen; Verifizieren Sie das Modell an Ihrem Standort; oder ein gleichwertiges Gerät
– 80 & Grad; C Ultra-Low Gefrierschrank	Thermowissenschaftlich	Forma 900er Serie (Modell 980)	Langzeitlagerung von Serum
96-Well-ELISA-Platten (Hochbinder)	Corning-Costar	9018	Wenn Sie hausinterne Beschichtungen oder Single-Plex-Workflows verwenden
Verstellbarer medizinischer Stuhl	Midmark	641 Verfahrensvorsitzender	Patientenpositionierung für eine konstante Bestrahlungsdistanz
Aloe-basiertes Beruhigungsgel	3M	9236	Dünne Post-Bestrahlungsschicht zur Erythemenlinderung; oder gleichwertiges medizinisches Gel
Bernsteinglasflasche (500 mL)	Fisherbrand	02-897-2J	Lichtgeschützte Speicherung bei 4 & Grad; C steht für die matrine Lösung
Analytische Bilanz (0,1 mg)	METTLER TOLEDO	ME104E	Gravimetrische Vorbereitung und Qualitätskontrolle
Automatisiertes Immunonephelometer	Siemens Healthineers	BN ProSpec System	Quantifiziert IgG/IgA/IgM pro Hersteller' s IFU
Barcode-Etiketten (Kryo-sicher)	Diversifizierte Biotechnologie	CRY-1000	Probenverfolgung und Beweiskette
Biotinyliertes Detektionsantikörper-Set	MSD	Enthalten mit dem Panel	Abgestimmt zum Fangen von Antikörpern
Breitband-Sonnencreme SPF ≥ 30	Neutrogena	070501017052 (Ultra Sheer SPF 50)	Fotoschutz nach der Sitzung; Ambulante Beratung
Kalibratoren für Immunglobuline	Siemens Healthineers	N-Protein-Standard SL	Rückverfolgbare Kalibrierung für die Nephelometrie
Control Sera (High/Low) für Ig-Assays	Siemens Healthineers	N/T-Proteinkontrolle	Tägliche QC der nephelometrischen Durchläufe
Kryogene Fläschchen, 0,5 ml	Thermowissenschaftlicher Nunc	375418	Serum-Aliquots; externer Thread; DNase/RNase-frei
Dermatoskop	DermLite	DL4	Polarisiertes Handdermatoskop zur Läsion-Inspektion
Dermoskopie-/Foto-Skalenkarte	3Gen	Skalen-/Farbreferenzkarte	Gewährleistet Farbkonsistenz über Zeitpunkte hinweg
Digitalkamera für standardisierte Bilder	Kanon	EOS 80D	Fester Abstand 60 cm; Belichtung 1/60 Sekunde; ISO 200; Stativ empfohlen
Kühlzentrifuge mit festem Winkel	Eppendorf	5810 R	800 & Times; g, 10 Min, 4 & Deg; C-Serumtrennung
HPLC-Säule (C18, 4,6 & Mal; 250 mm, 5 & Mikro; m)	Agilent	ZORBAX Eclipse Plus C18, 959990-902	Routinemäßige Alkaloidtrennung; oder äquivalent
HPLC-System	Agilent	1260 Infinity II (G7111B)	Reinheitsverifikation und Batch-Standardisierung von Matrin
Bildanalyse / Messung	ImageJ (NIH)	1,54 (RRID:SCR_003070)	Optionale Quantifizierung der Läsionsfläche anhand von Fotografien
Fusselfreie medizinische Gaze (steril)	Johnson & Johnson	546112	Trocknungsbehandlungsbereich nach der Reinigung
Matrine (≥ 98 %, HPLC)	MedChemExpress	HY-N0156	Oral Lösungsvorbereitung; Überprüfen Sie die Einhaltung lokaler Lieferanten und der Pharmakopei
Mikroplattenleser (450 nm)	BioTek (Agilent)	Synergie H1	Absorption bei 450 nm; Weglängenkorrektur
Mikroplatten-Unterleger	BioTek (Agilent)	ELx405	Automatisierte Waschzyklen; Verringert die Variabilität
Multiplex-Human-Zytokin-Panel (Custom 6-plex)	Meso-Maßstabs-Entdeckung (MSD)	U-PLEX Plattform (K15067L)	Umfasst IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17A, IL-10; oder äquivalent
PBS-Tablets	Gibco	18912-014	PBS-Vorbereitung für Washes/Buffers
Plattenversiegelungsfilme	Bio-Rad	MSB1001	Verhindert Verdunstung während der Inkubation
Schützende UV-Brille (Bediener)	Uvex (Honeywell)	S0360X Ultra-Spec 2000	Augenschutz des Bedieners; Verwenden Sie dediziertes Paar
Schützende UV-Brille (Patient)	Uvex (Honeywell)	S0360X Ultra-Spec 2000	UV-blockierende Brillen für die Patientensicherheit während der Bestrahlung
Serumtrennrohre (SST II Advance)	BD Vacutainer	367955	Nüchternblutentnahme zu Beginn und in Woche 12
Statistische Software	IBM	SPSS Statistik v26.0 (RRID:SCR_002865)	Analyse primärer Daten nach Protokoll
Sterile physiologische Kochsalzlösung (0,9 %)	Baxter	2B1324 (500 mL)	Läsionreinigung vor jeder Lasersitzung
Stopplösung (2 M H2SO4)	Sigma-Aldrich	258105	Stoppt die TMB-Reaktion
Streptavidin-HRP	Thermowissenschaftlich	N100	Detektionsreagenz; Kit-kompatibel
TMB-Substrat (ELISA)	Thermowissenschaftlich	34028	Chromogene Entwicklung; 10 Minuten im Dunkeln
Stativ mit Distanzmarker	Manfrotto	MKCOMPACTLT-BK	Sorgt für einen konstanten Abstand zwischen Kamera und Motiv
Tween-20 (für PBST 0,05 %)	Sigma-Aldrich	P1379	Waschpuffer-Tensid
UV-Radiometer / Leistungsmesser	Internationale Lichttechnologien	ILT2400	Für die tägliche Ergebnisverifikation und MED-Tests; mit SED240/NS254-Detektor oder gleichwertigem Detektor
UV-blockierender undurchsichtiger Draper/Folie	Thorlabs	BK5 Blackout-Stoff	Bedeckt die normale Haut, um unbeabsichtigte Exposition zu vermeiden; oder äquivalent
VASI-Wertungsbögen (gedruckt)	Intern	NA-VASI-2025	standardisierte klinische Bewertungsformulare; Archiv mit Betreffs-ID
Wood' s Lampe (UV-A, 365 nm)	Spektrolin	ENF-260C	Klinische Diagnose und Beurteilung der Läsionkante
Wood' s Lampen-Schildhaube	DermLite	DL Hood	Verbessert den Kontrast bei UV-A-Untersuchung