Zebrafisch-Optogenetik: Aktivierung genetisch veränderter somatosensorischer Neuronen zur Untersuchung von Verhaltensreaktionen von Larven

- Bei Zebrafischlarven kann ein visueller Reiz somatosensorische Neuronen aktivieren und eine Fluchtreaktion auslösen. Es gibt zwei Arten solcher Neuronen, die in der Larve vorkommen: Trigeminus- und Rohon-Bart-Neuronen. Wir können die Aktivität dieser Neuronen manipulieren, indem wir sie so modifizieren, dass sie transgene lichtempfindliche Ionenkanäle exprimieren. Dieser Ansatz wird als Optogenetik bezeichnet.

Um diese Technik durchzuführen, montieren Sie eine transgene Larve mit der Rückenseite nach oben in Agarosegel und legen Sie sie unter ein Präpariermikroskop. Verwende eine Rasierklinge, um einen keilförmigen Teil der Agarose um das Eigelb und den Schwanz herum zu lösen. Füllen Sie diesen Bereich mit Eiwasser. Ziehe die Agarose vom Rüssel und Schwanz der Larve weg.

Positionieren Sie die Spitze eines optischen Kabels in der Nähe des Stammes, an dem sich der Zellkörper des Rohon-Beard-Neurons befindet. Geben Sie einen Impuls aus blauem Laserlicht ab. Bei Einwirkung des blauen Lichts öffnen sich die transgenen lichtempfindlichen Ionenkanäle in der Membran des Neurons, wodurch Ionen eindringen können, wodurch ein Aktionspotential ausgelöst wird, das die Fluchtreaktion auslöst.