ゼブラフィッシュ光遺伝学:遺伝子組み換え体質体型感覚ニューロンを活性化し、幼虫行動応答を研究する

- ゼブラフィッシュの幼虫では、視覚刺激が体性感覚ニューロンを活性化し、脱出反応を引き起こす可能性があります。幼虫、三叉およびロホンビアードニューロンに見られるニューロンには2種類あります。

この技術を実行するには、背側をアガロースゲルに上に向けてトランスジェニック幼虫を取り付け、解剖顕微鏡の下に置きます。

ロホン・ビアードニューロンの細胞体が位置するトランクの近くに光ケーブルの先端を置く。青色光に曝されると、ニューロンの膜内のトランスジェニック光感受性イオンチャネルが開き、イオンが入り込み、脱出応答を引き起こす可能性を引き起こす。

このプロトコル例では、幼虫を取り付けてロホンビアードニューロンを活性化し、チャネルロドプシン変異体を発現させ、行動応答を観察します。

- 2倍蒸留水で1.5%低溶融アガロースを作り、固化を防ぐために摂氏42度の熱ブロックに保管してください。ガラス製のパスツールピペットを使用して、青い胚水をできるだけ少ない1.5%の低溶融アガロースのチューブに事前スクリーン幼虫の1つを移します。

解剖顕微鏡の下で幼虫背側を上に置いて、アガロースが固まったら、薄いカミソリの刃を使って幼虫の両側からアガロースを切り取り、アガロースを取り巻く領域を胚の青い水で満たします。

次に、黄身の両側に対角線を切り、幼虫をニックしないように気をつけなさい。その後、胴体と幼虫の尾部からアガロースを引き離します。

次に、高速カメラを解剖スコープに取り付け、カメラをコンピュータに接続します。その後、コンピュータと高速カメラをオンにし、カメラの設定を調整します。

次に、蛍光解剖顕微鏡を使用して、ChEF-tdTomato発現でニューロン細胞本体の近くに光ケーブルの先端を配置し、青色光のパルスを送り出して感覚ニューロンを活性化します。

幼虫を解放するには、アガロースを鉗子で引き離し、動物を傷つけないように注意してください。その後、新鮮な青い胚の水に移します。動物はさらに発達することができ、手順は古い段階で繰り返すことができます。