Grundlegende Caenorhabditis elegans Methoden: Synchronisation und Observation

Die Einfachheit in der Pflege und Verbreitung des Nematoden

In diesem Video zeigen wir Ihnen, wie Sie C elegance in der ersten Phase synchronisieren können. Dies ist eine einfache, aber sehr verbreitete Methode, so dass sie sehr nützlich sein wird. Du bist immer noch ein Anfänger.

Wenn Sie ein C-Experte sind, finden Sie hier möglicherweise einige Tipps zur Optimierung dieses Protokolls. Die Grundlage der Synchronisation von Würmern beruht auf der relativen Resistenz von Clen und Embryonen gegenüber alkalischer Hypochloritlösung bei erwachsenen Kaninchen. Dass diese erwachsenen Würmer mit vielen Embryonen im Inneren mit einer Hypochloritlösung bebrütet werden, so dass sie abgetötet werden und nur Embryonen übrig bleiben.

Der zweite Teil der Synchronisation wird durch den Mangel an Nahrung erreicht, so dass sich die Embryonen, obwohl sie zu unterschiedlichen Zeiten fangen, nicht weiter als L eins entwickeln. Der erste Schritt, um ein Blitzing-Protokoll zu starten, besteht darin, Würmer in der Ei-Liegephase zu haben und dort mehrere Eier auf den Teller zu streuen. Verwenden Sie M neun, um die erwachsenen Tiere für die Ernte zu bergen.

Auch können die Embryonen bereits auf der Oberfläche der Platte mit einem weichen Material wie einem Stück Röntgenfilm abgeschabt werden, um die mit mehreren M neun Wäschen gewonnenen Bakterien wegzuspülen. Normalerweise reicht ein paar. Sobald die Würmer gewaschen sind, ist es an der Zeit, die frisch zubereitete Bleichlösung nach unseren Vorlieben hinzuzufügen.

Kontrollieren Sie die Inkubationszeit, während Sie das Röhrchen schütteln. Sie können die Zeugung der Erwachsenen unter dem Stereomikroskop überwachen. Sobald fast keine Schlachtkörper mehr ratsam sind, stoppen Sie die Reaktion durch Zugabe von M neun, bis das Röhrchen vollständig gefüllt ist.

Um das Protokoll abzuschließen, führen Sie mindestens drei Wäschen durch. Bei M nine werden die Eier mit ständigem Zögern über Nacht in M nine Puffer bebrütet, was das Schlüpfen ermöglicht, aber die weitere Entwicklung der Würmer verhindert. Obwohl die Synchronisierung bei jeder Temperatur zwischen 15 und 25 Grad durchgeführt werden kann, wird 15 Grad empfohlen.

Da die Entwicklung langsamer ist, wie wir während seiner Entwicklung erwähnt haben, durchläuft Elegan vor dem Erwachsenenalter vier Larvenstadien, die Zeit, abhängig von der Temperatur, bei der es aufgezogen wird. Während Typ C Elgan Wachstumstemperaturen zwischen 15 und 25 Grad verträgt. Die Wachstumsrate ist jedoch höher.

Bei der oberen Temperatur hier können Sie sehen, wie nach 24 Stunden die Stadien, in denen sich die Würmer befinden, unterschiedlich sind. Bei 15 und 25 Grad, nach 48 Stunden bei 25 Grad, beobachten wir bereits Embryonen. Wir müssen jedoch mehr als 80 Stunden warten, um Embryonen auf der Oberfläche der Platten zu sehen.

Bei Würmern, die bei 15 Grad gezüchtet werden, müssen bei einem Blitzexperiment mehrere Aspekte berücksichtigt werden, um optimale Ergebnisse zu erzielen. Es ist auch wichtig, Würmer zu erkennen, die das Wunschstadium für das Experiment darstellen. Wir zeigen Ihnen, wie Sie die Tische entweder nach Größe, differentieller Interferenz, Kontrastmikroskopie oder dieser Färbung unterscheiden können.

In dieser Grafik können Sie die Wachstumsrate von GaN-Würmern erkennen, je nach Temperatur, wie wir sagen, die bei 25 Grad viel schneller wachsen. Es besteht ein Zusammenhang zwischen der Größe der Tiere und der Entwicklung der Meereselemente. Mit der entsprechenden Software können Tiere vermessen und dann in den richtigen Entwicklungsstand eingeteilt werden.

Laut dieser Grafik ist der Standort jedoch ein grober Marker für Entwicklungsstadien. Eine besser vereinbarte Inszenierung kann durch die Beobachtung von Teilen der Meere erreicht werden, deren Anatomie entweder durch differentielle Interferenz, Kontrastmikroskopie oder DPI-Färbung verwendet und erkannt werden kann. In unserem Labor haben wir dieses Protokoll verwendet, um Würmer für verschiedene Experimente zu synchronisieren, wie z. B. Mikroeier in der Monofärbung, in situ Visualisierung und bis hin zur Färbung.

Darüber hinaus hilft Ihnen dieses Protokoll auch, Verunreinigungen loszuwerden. Zur Kontrastverstärkung kommt die differentielle Interferenzkontrast- oder Nomar-Mikroskopie zum Einsatz. In ungefärbten transparenten Proben werden die Tiere lebend auf einer Basis von 2 % montiert. Agros Agros kann zuvor vorbereitet und bei Bedarf bei vier Grad gelagert werden.

Es kann geschmolzen und bei 65 Grad gehalten werden. Sobald die Agros geschmolzen sind, kleben Sie etwas Klebeband auf eine Folie und platzieren Sie sie an beiden Seiten einer dritten Folie. Nehmen Sie vorsichtig etwas Agros und geben Sie einen Tropfen ohne Klebeband auf die Rutsche.

Decken Sie die Agros mit einer weiteren Rutsche ab, die quer gelegt wird. Sobald der Pfad fest ist, trenne die beiden Rutschen, indem du sie vorsichtig übereinander schiebst. Das Pad bleibt an einem von ihnen haften.

Füge etwas Amazon auf das Pad hinzu, um Würmer bewegungsunfähig zu halten. Pflücken Sie einige Würmer unter dem Präpariermikroskop und übertragen Sie sie auf den Leletropfen. Vermeiden Sie eine Beschädigung des Weges.

Nehmen Sie ein Deckblatt und tragen Sie etwas Nagellack an den Rändern auf. Legen Sie das Deckglas vorsichtig auf diese Folie, um Darmbildung zu verhindern. Das Präparat kann sofort unter dem Mikroskop betrachtet werden. Eine der einfachsten Eigenschaften der Anatomie von c Elgan ist Alva.

Zum Beispiel ist Aava mit einer Weihnachts-Dreier-Form charakteristisch für die L-Vier-Stufe. Detaillierte Informationen zur chemischen Anatomie durch die Entwicklung erhalten Sie von www.orla.org. Die Tapis-Färbung ist ein gängiges Verfahren zur Identifizierung einzelner Zellen.

Die Fixierung mit dem Tunnel ist eine schnelle Methode, um Würmer zu fixieren. Für die Färbung von Dappy geben Sie zunächst einen Tropfen M neun Puffer auf die Oberfläche eines Objektträgers. Pflücken Sie einige Würmer direkt vom Teller und geben Sie sie in den Tropfen M neun.

Beseitigen Sie überschüssiges M nine entweder mit einer Pfeife oder mit einem Weichgewebe. Füge einen Tunnel zu den Würmern hinzu. Mach es noch einmal.

Sobald der erste Tropfen getrocknet ist, fügen Sie etwas Eindeckmedium mit API und den Überschlaf hinzu, bevor Sie das Präparat zum Mikroskop bringen. Die Entwicklung des go lässt sich gut in einem warmen Stent mit api beobachten.