Einfache und Computergestützte Riechtests für Mäuse

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die angeborene olfaktorische Diskriminierung, die olfaktorische Präferenz oder -vermeidung und die olfaktorische Empfindlichkeit bei Mäusen zu testen. Dies wird erreicht, indem die Maus einem neuartigen Lockstoff oder Beschwerdeführer und einem neutralen Geruch, bei dem es sich um Wasser handelt, ausgesetzt wird. Währenddessen zeichnet eine Videokamera die Verhaltenssitzung auf.

Als nächstes wird das Video in Bild J mit den bereitgestellten Makros analysiert, um die Zeit zu erhalten, die in den Geruchs- und Wasserparametern verbracht wurde. Die Ergebnisse zeigen das Präferenz- bzw. Vermeidungsverhalten von Gerüchen im Vergleich zu Wasser bei verschiedenen Genotypen, basierend auf der post-hoc-computergestützten Analyse. Der Hauptvorteil des Geruchstests gegenüber der Verwendung von dedizierten Arenen und Gerüchen besteht darin, dass er eine vertraute Arena verwendet und daher schnell abgeschlossen und einfach eingerichtet werden kann.

Darüber hinaus wird kostengünstige Hardware verwendet, die das Verfahren von Emmanuel Abry, einem Studenten in meinem Labor, demonstriert. Verwenden Sie für dieses Experiment drei bis fünf Monate alte männliche, C 57 schwarze, sechs Wildtyp- und transgene Mäuse. In dieser Demonstration werden zwei Knockout-Linien und Wurfgeschwisterkontrollen verwendet.

Verwenden Sie für die Versuchsarenen saubere, sterilisierte Mäusekäfige mit drei Zentimetern Einstreu. Bereiten Sie als Nächstes die Kameraeinrichtung vor. Positionieren Sie ihn 58 Zentimeter über dem Käfigboden auf einer individuell angefertigten Stativhalterung.

Machen Sie einige Markierungen auf der Arbeitsplatte, um zu markieren, wo der Käfig stehen sollte. Stellen Sie für ein zentriertes Bild die Kamera so ein, dass sie ein Video mit 320 x 240 Pixeln und einer Geschwindigkeit von ca. 15 Bildern pro Sekunde aufzeichnet. Zur Vorbereitung hat der Testteilnehmer nach Möglichkeit Konzentrate von jedem Duft in Lösungsmittel gelagert.

Für den Präferenztest stellen Sie eine Lösung von 10 Vol.-% Erdnussbutter in Erdnussöl her. Für den Vermeidungstest ist eine Lösung von 98 % zu Methylbuttersäure zu verwenden. Für den Sensitivitätstest wird ein bis zwei Tage vor dem Test weiblicher Urin von einer Maus desselben Stammes gesammelt.

Fesseln Sie ein Weibchen mit dem Bauch über dem Käfiggitter und sammeln Sie Tropfen seines Urins in eine Plastikschale. Sammeln Sie Proben von mehreren Weibchen, um sie zu normalisieren. Für eine individuelle Variabilität ziehen Sie alle Proben in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen und lagern es bei minus 20 Grad Celsius.

Um mit der Gewöhnung zu beginnen, setzen die Tiere eines in einen gereinigten Käfig und lassen es erkunden. Fünf Minuten lang sollte die Umgebung des Prüfkäfigs der des Heimkäfigs entsprechen. Wiederholen Sie die Gewöhnungsphase einmal an jedem Testtag, wenn die Gewöhnungsphase beendet ist, starten Sie die Aufzeichnung und pipettieren Sie 60 Mikroliter eines angenehmen Duftes.

In diesem Fall Erdnussbutter auf eine Wand an der gegenüberliegenden Wand geben, die gleiche Menge Wasser pipettieren. Tragen Sie die Tropfen mit einem neutralen Duft etwa 10 Zentimeter an jeder Wand auf. Lassen Sie das Tier nun zwei Minuten lang erkunden, stoppen Sie dann die Aufzeichnung und bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück.

Wiederholen Sie den Vorgang mit jeder Maus, die getestet werden soll. Immer mit neuen Prüfkäfigen. Drei bis fünf Tage Nachdem Sie alle Präferenztests durchgeführt haben, führen Sie den Vermeidungstest mit einem neuen Testkäfig durch.

Führen Sie für jede Maus den Vermeidungstest durch. Ersetzen Sie wie beim Anziehungstest nur den angenehmen Duft durch den Vermeidungsduft, der aus den beiden Methylbuttersäure besteht. Für den Sensitivitätstest kann ein Käfig zwischen Versuchen für dieselbe Maus wiederverwendet werden.

Markieren Sie also die Wasserseite des Käfigs und bereiten Sie sich darauf vor, die kurzen Wände zwischen den Versuchen mit 70% Ethanol getränktem Papier zu reinigen. Am Tag des Experiments werden vier Konzentrationen des Urins mit der zehnfachen Verdünnungsreihe gebildet. Mit doppelt destilliertem Wasser wie beim Vermeidungstest gewöhnen Sie jedes Tier fünf Minuten lang an seinen Testkäfig.

Setzen Sie dann jede Maus zunächst dem Urin in der höchsten Verdünnung aus, die zwischen eins und 10.000 liegt. Tragen Sie während der Aufzeichnung die Urinverdünnung auf den Testkäfig auf und tragen Sie Wasser auf die gegenüberliegende Wand auf. Wie bei anderen Tests auch, lassen Sie das Tier erkunden.

Zwei Minuten lang. Bringen Sie das Tier danach in einen sauberen Mäusekäfig. Nachdem alle Tiere die niedrigste Konzentration festgestellt haben, reinigen Sie alle Wände des Testkäfigs und wiederholen Sie den Test an jeder Maus mit dem nächsthöheren Urin.

Setzen Sie diesen Vorgang fort, bis der reine Urin getestet ist. Nachdem Sie alle Daten für ein Experiment gesammelt haben, öffnen Sie die Videos in Bild J zur Anpassung und Verarbeitung von Details, die im Textprotokoll unter Verwendung der beschriebenen Protokolle bereitgestellt werden. Zwei verschiedene K.O.-Varianten.

Die Gruppen B und C wurden mit den Kontrollen der Gruppe A verglichen. Der T-Test eines ungerichteten Schülers mit gleicher oder ungleicher Varianz vergleicht die Zeit, die zwischen dem Geruch und dem Wasser innerhalb der Genotypen verbracht wird. Vergleichen Sie das Verhalten zwischen Genotypen mit einer unidirektionalen Inova. Beide Versuchsgruppen B und C zeigten keine Präferenz für den attraktiven Geruch Im Vermeidungstest war die Reaktion auf den abstoßenden Zwei-Methylbuttersäure-Geruch für die Gruppen A und B wie erwartet, aber Gruppe C zeigte kein Vermeidungsverhalten gegenüber diesem Geruch.

Im Sensitivitätstest wurde die Anziehungsschwelle ermittelt, indem die mit Urin verbrachte Zeit von der mit Wasser verbrachten Zeit subtrahiert wurde, wobei der Urin gegenüber Wasser bei einer Verdünnung von eins bis 1000 bevorzugt wurde. Während beide Versuchsgruppen, B und c, eine 100-fach höhere Konzentration benötigten, um eine Präferenz zu zeigen. Sobald Sie diese Technik beherrschen, kann sie in ein paar Stunden durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird, dann können nach diesem Verfahren andere Methoden wie olfaktorisches Lernen und Extinktion durchgeführt werden, um die olfaktorische Plastizität und das Lernen zu untersuchen.