Ein neuer Ansatz, die Handhabung für ein Studium Aggression Eliminiert und die "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Während Fruchtfliege Kämpfe, die Verhaltensmuster beobachtet, kämpfen Dynamik, und die damit verbundenen Lern- und Gedächtnis werden von experimentellen Bedingungen beeinflusst. Die hier vorgestellte Protokoll beschreibt ein neues Verfahren, das vollständig eliminiert Handhabung von Fliegen während der Experimente. Dies verbessert Kampf Dynamik und ermöglicht die Bildung von starken "Verlierer" Effekte.

Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, die Bildung von Verlierer- und Gewinnereffekten bei Drosophila, Melanin und Gaster einzuführen, indem der Umgang mit der Fliege aus dem Verhaltensverfahren eliminiert wird. Die meisten Verhaltensstudien an Tieren, die in einer Laborumgebung durchgeführt werden, beinhalten den Umgang mit den Tieren. Der Umgang mit den Tieren wiederum führt in der Regel zu Stress bei den Tieren, und Stress kann die Verhaltensstudien beeinträchtigen, die Sie durchzuführen versuchen, um den stressigen Umgang mit Tieren zu beseitigen.

Für unsere Aggressionsstudien an Fruchtfliegen haben wir eine neue Kammer entwickelt, die den Umgang mit den Tieren vor, während oder nach den Experimenten vollständig überflüssig macht. Mit diesen neuen Kammern haben sich alle Verhaltensparameter, die wir gemessen haben, als besser erwiesen. Mit dieser Methode minimieren wir die Verhaltensfähigkeit von Individuen.

Wir verkürzen die Zeit, die notwendig ist, um eine klare Dominanzbeziehung zu erzeugen, und wir waren in der Lage, starke Verlierer- und Gewinnermentalitäten zu induzieren. Diese Kammern sind einfach zu bedienen und können vielseitig verwendet werden, um das Verhalten verschiedener Fruchtfliegen zu untersuchen. Um das Experiment zu beginnen, ziehen und pflegen Sie die Fliegenbestände in einem 12-stündigen Inkubator mit hellem Dunkelzyklus bei 25 Grad Celsius und 50 % relativer Luftfeuchtigkeit.

Bereiten Sie anschließend Isolationsfläschchen vor, indem Sie frisches Fliegenfutter erhitzen, bis es geschmolzen ist. Mit einer Pasti-Pipette ca. 1,5 Milliliter geschmolzenes Fliegenfutter in einzelne leere Glasreagenzgläser umfüllen und mit einem feinen Pinsel fest werden lassen. Nehmen Sie vorsichtig eine männliche Puppe im Spätstadium aus der Durchstechflasche und legen Sie sie auf die Seite eines Reagenzglases mit frisch zubereitetem Futter.

Verschließen Sie die Isolationsfläschchen mit Watte, lagern Sie die Isolationsfläschchen im Inkubator. Nach der Isolierung sind die Fliegen bereit, bemalt zu werden. Betäuben Sie die Fliege mit Kohlendioxid, dann mit einem feinen Zahnstocher.

Lege einen kleinen Punkt Acrylfarbe auf den Brustkorb und vermeide es, den Kopf, die Flügel, den Bauch oder die Beine zu bemalen. Lassen Sie die Farbe ca. 10 Sekunden trocknen und geben Sie die Fliegen vorsichtig zurück in ihre ursprünglichen Isolationsfläschchen. Setzen Sie die Isolationsfläschchen wieder in den Inkubator ein.

Fahren Sie mit der Gerätevorbereitung fort, indem Sie frisches Fliegenfutter erhitzen, bis es geschmolzen ist. Füllen Sie mit einer hinteren Pipette 0,8 Milliliter Lebensmittel in den Deckel des Fläschchens mit Schraubverschluss und lassen Sie die Lebensmittel abkühlen. Sobald das Essen abgekühlt ist.

Tragen Sie einen kleinen Tropfen frische Hefepaste auf die Mitte der Oberfläche des Futterbechers auf. Waschen Sie das Gerät und die einzelnen Kampfkammern vor jedem Gebrauch mit Wasser und trocknen Sie sie mit einem Papiertuch ab. Tragen Sie anschließend einen Tropfen Kitt auf den Futterbecher auf und geben Sie ihn in die Mitte jeder Kampfkammer.

Decken Sie die Kampfkammern mit dem Gerätedeckel ab. Stellen Sie das abgedeckte Gerät unter eine Lichtquelle und installieren Sie eine Videokamera über der Struktur. Beginnen Sie mit Verhaltensexperimenten, indem Sie Plastiktrennwände in jede Kampfkammer einsetzen.

Entfernen Sie den Wattestopfen vom Isolationsschlauch und positionieren Sie den Schlauch unter einem offenen Loch an der Seite des Geräts. Lassen Sie die Fliege über die negative Geoachse in die Kampfkammer eindringen. Schließen Sie dann die Schiebewand Nachdem die Fliege in die Kammer eingedrungen ist, wiederholen Sie den Vorgang, um die zweite Fliege in die Kampfkammer auf der anderen Seite des Geräts einzuführen.

Bringen Sie dann das Gerät wieder in die Position der beleuchteten Videoaufnahme. Starten Sie die Videoaufzeichnung und entfernen Sie die Plastiktrennwand, damit die Fliegen für Experimente mit dem Verlierereffekt interagieren können. Nehmen Sie die ersten Kämpfe 20 Minuten lang auf, um sicherzustellen, dass starke Dominanzbeziehungen entstehen.

Setzen Sie nach 20 Minuten die Kunststofftrennwand vorsichtig wieder in die Kampfkammern ein, um die Fliegen zu trennen und das Video zu stoppen. Um also eine starke Verlierermentalität zu induzieren, stellen Sie sicher, dass die Fliegen während des ersten Kampfes eine Dominanzbeziehung aufbauen und aufrechterhalten, und minimieren Sie dann die Störung des Tieres beim Einsetzen der Trennwände, um die Fliegen zu trennen. Beginnen Sie nach einer 10-minütigen Ruhephase mit der Aufnahme und entfernen Sie vorsichtig die Kunststofftrennwand.

Lassen Sie die Fliegen weitere 20 Minuten interagieren. Beenden Sie die Aufzeichnung nach 20 Minuten, um das Experiment abzuschließen. Entfernen Sie die Fliegen aus den Verhaltenskammern durch negative Geoachse, indem Sie das beschriebene Verfahren umkehren, bevor die neue Methode zur Beobachtung erster Kämpfe verwendet wurde.

Im Durchschnitt wird die erste Begegnung nach zwei Minuten beobachtet. Der erste Ausfallschritt erfolgt nach vier Minuten, und Fliegen bauen nach acht Minuten eine Dominanzbeziehung auf. Während der restlichen 12 Minuten wird das Dominanzverhältnis verstärkt.

Während die Gewinner immer mehr ausfallen und die Verlierer sich immer mehr zurückziehen. Der neue Ansatz wurde verwendet, um den Verlierereffekt zu quantifizieren, d. h. den Prozentsatz der Verlierer, die während des zweiten Kampfes zweite Kämpfe verlieren. Ein signifikanter Effekt ist zu beobachten, wenn frühere Verlierer in ihren zweiten Kämpfen mit bekannten Siegern oder mit unbekannten Siegern gepaart wurden.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, Aggressionen mit sechs bis sieben Tage alten männlichen Fliegen durchzuführen, die in sozialer Isolation aufgestiegen sind. Einmal gemeistert, ermöglichen diese Kammern eine einfache Einführung, Überwachung, Interaktion und Trennung der Fliegen ohne jegliche Handhabung, und das führt zu einem starken Verlierer-Effekt. Die Verwendung von Trennwänden, um die Fliegen nach dem ersten Kampf zu trennen, ermöglicht eine Variation des Versuchsprotokolls.

Wir können die Sieger behalten und sie im zweiten Kampf mit verschiedenen Gegnern paaren, um einen Gewinnereffekt zu erzielen. Mit kleinen Anpassungen können dieselben Kammern verwendet werden, um die Balz, Fortbewegung und andere soziale Verhaltensweisen der Fruchtfliege zu untersuchen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Aggressionsassays durchführt und wie man vor und während der Experimente einen lockereren Effekt ohne Manipulation der Fliegen induziert.