Auswertung der Prozedur für die Durchführung einer wachen Zystometrie in einem Mausmodell

Das übergeordnete Ziel dieses mikrochirurgischen Eingriffs ist es, einen intravesikalen Schlauch in die Harnblase zu implantieren und die Funktion der unteren Harnwege bei einer wachen Maus zu erfassen. Diese Methode kann bei der Gewinnung reproduzierbarer experimenteller Daten aus der Wachzystometrie und der Überprüfung der Blasenfunktion in gesunden und kranken Mausmodellen helfen. Das Hauptziel dieser Technik ist es, eine standardisierte Methode auf der Grundlage experimenteller Daten für die Durchführung der Füllungszystometrie in einem Mausmodell bereitzustellen.

Um den Schlauch für die Implantation vorzubereiten, schneiden Sie zuerst ein sieben Zentimeter langes Stück PE10-Schlauch ab und schieben Sie ein Ende langsam in Richtung einer offenen Flamme, um ein Aufflackern zu erzeugen, und ziehen Sie das Rohr schnell zurück, sobald sich das Aufflackern entwickelt. Verwenden Sie dann die niedrige Hitzeeinstellung einer Klebepistole, um drei Tropfen Allzweck-Heißkleber in 4,5, 5 und 5,5 Zentimetern Entfernung vom ausgestellten Ende der Tube aufzutragen. Schneide mit einer Schere Unregelmäßigkeiten aus den Klebeblasen.

Tragen Sie Heißkleber auf ein Ende einer 30-Gauge-Nadel auf, die zum Verstopfen des PE10-Schlauchs nach der Implantation verwendet wird. Bestätigen Sie als Nächstes, dass Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren, und tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Nachdem Sie den oberen Rücken und den Unterbauch mit Alkohol und Betadin sterilisiert haben, machen Sie einen 1,5 Zentimeter langen Schnitt zwischen den Skalpellen und legen Sie das Tier in Rückenlage auf ein 37 Grad Celsius heißes Heizkissen, das mit sterilen Vorhängen bedeckt ist, unter einem Präpariermikroskop.

Machen Sie nun einen 1,5 Zentimeter tieferen Schnitt in der unteren Mittellinie. Gefolgt von einem passenden Schnitt durch die Faszie entlang der Linea alba und des Muskels, um die Kuppel und die obere Hälfte der Harnblase freizulegen. Halten Sie die Baucheingeweide mit warmer physiologischer Kochsalzlösung feucht und drehen Sie das Tier auf die Seite, um an den Schnitt im Nacken zu gelangen.

Schieben Sie ein schmales Blutstillungsmittel subkutan durch den Schnitt, um einen subkutanen Kanal auf dem Rücken zu beginnen und sich an der Seite des Tieres fortzusetzen. Sobald die Spitze des Instruments die Unterseite des Brustkorbs erreicht, drehen Sie die Spitze in Richtung der Mittellinie in der Innenseite des Bauches und schieben Sie das Blutstillen weiter vor, bis die Spitze am Bauchschnitt unter der Muskelschicht freiliegt. Sobald sich die hämostatische Spitze im Schnitt befindet, kneifen Sie die Haut über der Schulter zusammen und üben Sie eine Traktion aus, um das Tier zu stabilisieren, bis die Instrumentenspitze am Bauchschnitt zu sehen ist.

Fassen Sie nun mit dem Blutstillstand das nicht ausgestellte Ende des Schlauchs und ziehen Sie den Blutkörper langsam zurück, indem Sie das Ende des Schlauchs aus dem Schnitt im Nacken ziehen und das ausgestellte Ende des Schlauchs so einstellen, dass es direkt über der Blasenkuppel liegt. Stabilisieren Sie die Blase mit einer kleinen Rolle fusselfreiem Gewebe. Legen Sie ein locker gebundenes, nicht resorbierbares monofiles 6-O-Nahtmaterial auf die Blasenkuppel.

Fassen Sie mit der nicht-dominanten Hand und der Dumont-Mikrozange mit der Nummer sieben die Kuppel der Blase und verwenden Sie eine 21-Gauge-Nadel in der dominanten Hand, um eine Zystotomie in der Kuppelspitze durchzuführen. Sondieren Sie die Zystotomie vorsichtig mit einem geschlossenen Paar gebogener Mikrozangen mit der Nummer fünf, um sicherzustellen, dass der Katheter leicht durch das Loch geführt werden kann, und platzieren Sie das aufgeweitete Ende des PE10-Katheters in der Blase, indem Sie das Fackel nach unten zum Blasenhals drücken, damit es beim Sichern nicht herausrutscht. Wenn der monofile Binder vor dem Schlauch platziert wird, ziehen Sie die 6-O-Naht um die Kuppel der Blase und den Schlauch so hoch wie möglich an der Blase fest, um eine künstliche Verringerung der Blasenkapazität zu vermeiden.

Alternativ können Sie eine lose Naht an der Blase anlegen, eine Zystotomie wie gerade gezeigt durchführen und das aufgeweitete Ende des Katheters in die Punktion einführen. Binden Sie dann die Naht um die Kuppel und den Schlauch, wie für die flache Naht gezeigt. Achten Sie in jedem Fall darauf, den Schlauch zu sichern, ohne die Blasenwand stark zu verletzen.

Wird zu viel Gewebe entnommen, verringert sich die Blasenkapazität. Wird zu wenig genommen, wird die Verbindung undicht. Um die Dichtheit und Position des Schlauchs in der Blase zu testen, befestigen Sie eine 0,5-Milliliter-Insulinspritze mit einer 30-Gauge-Nadel am distalen Ende des Schlauchs und füllen Sie die Blase langsam mit 0,1 bis 0,2 Millilitern 0,9%igem Natriumchlorid, bis ein Tropfen an der Harnröhrenöffnung erscheint.

Wenn die Versiegelung unvollständig ist, schlingen Sie die Nahtenden um die Blase und binden Sie sie wieder zusammen. Entleeren Sie dann die Blase durch Aspiration. Wenn keine Lecks an der Kuppel auftreten, stützen Sie die Blase mit einer gebogenen Mikrozange ab und ziehen Sie vorsichtig an den Schläuchen, bis die Fackel an der Innenseite der Blasenkuppel anliegt.

Testen Sie die Dichtung erneut mit der zuvor beschriebenen Methode. Schneiden Sie die Enden der Naht ab, entfernen Sie die Geweberolle und bringen Sie die Blase wieder in ihre normale Position. Verwenden Sie dann eine verlaufende 6-O-Naht, um die Bauchdecke in zwei Schichten zu schließen.

Und drehen Sie das Tier vorsichtig auf seinen Bauch. Führen Sie den subkutanen Teil des Metallankers in den intraskopulären Schnitt ein und verwenden Sie ein 6-O-Monofilament, um den Schlauch und die Verankerung mit einer vertikalen Matratzennaht zu sichern. Vergewissern Sie sich, dass eine Klebeblase über und unter der Haut verbleibt, um zu verhindern, dass sich die Röhre herauszieht, und schneiden Sie die Röhre etwa zwei Zentimeter über der Haut ab.

Führen Sie dann vorsichtig einen 30-Gauge-Stopfen in das Ende des Schlauchs ein, um zu verhindern, dass Urin austritt. Bevor Sie die Messung durchführen, verwenden Sie einen pe50-Schlauch, um die Infusionspumpe, den Druckmessumformer und den 22-Gauge-Wirbel anzuschließen. Setzen Sie dann das betäubte Versuchstier in die Bauchlage und entfernen Sie den 30-Gauge-Stecker.

Verbinden Sie den Haltegurt mit dem Anker, schieben Sie den Blasenkatheter in das Ende des PE50 und verwenden Sie Heißkleber, um einen wasserdichten Verschluss zu bilden. Platzieren Sie die Maus auf dem Drahtboden. Und starten Sie die Aufnahme.

Wenn sich das Tier von der Narkose erholt hat und sich der Blasendruck stabilisiert hat, beginnen Sie mit der Infusion von 0,9 % Natriumchlorid mit einer Rate von 0,6 Millilitern pro Stunde. Typischerweise entwickelt sich am zweiten Tag nach dem Einführen des Katheters eine schwere submuköse Schwellung, die die Hälfte des Blasenquerschnitts einnimmt, die zu einer Obstruktion des Lumens führt. Am fünften Tag verschwindet das Ödem vollständig und hinterlässt die submukösen Bereiche, die mit Entzündungszellen infiltriert sind, die teilweise in die Muscularis eingedrungen sind.

Das größte Ausmaß der an den Tagen zwei und drei beobachteten Gewebeschwellungen korreliert mit der entsprechenden Verhaltensentleerung, wobei die Tiere zu diesen Zeitpunkten eine signifikant beeinträchtigte Blasenfunktion zeigten. Wie aus den histologischen Daten zu erwarten ist, normalisiert sich die Entleerungshäufigkeit bis zum fünften postoperativen Tag. Der intravesikale Druck bei einem wachen, sich frei bewegenden Tier mit minimalen Bewegungsartefakten ist durch einen Ausgangsdruck von 10 bis 15 Zentimetern Wasser gekennzeichnet, der während des Füllzyklus unverändert bleiben oder allmählich um nicht mehr als 10 Zentimeter Wasser ansteigen kann.

Gefolgt von einem plötzlichen Druckanstieg und -abfall während der Entleerung. Einmal gemeistert, kann diese Technik in 30 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, daran zu denken, die Schädigung der Blase zu minimieren, um die Physiologie des Gewebes zu erhalten.

Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden, wie z. B. die Einzyklus-Füllzystometrie, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zur funktionellen Blasenkapazität zu beantworten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man einen Schlauch mikrochirurgisch in die Harnblase implantiert und die Wachfüllungszystometrie verwendet, um die Funktion der unteren Harnwege bei Mäusen zu beurteilen.