Ein obstruktives Modell der chronischen Pankreatitis, das durch Elektrokoagulation etabliert wurde

Das vorliegende Protokoll beschreibt einen neuartigen Ansatz zur Modellierung der chronisch obstruktiven Pankreatitis, der die Visualisierung des Pankreasgangs und die Elektrokoagulation des Pankreasgangs beinhaltet, um eine Obstruktion des Pankreasgangs zu verursachen.

Es gibt viele Methoden zur Erstellung von Tiermodellen für chronische Pankreatitis, einschließlich der intraperitonealen Injektion von Natrium und der Ligatur des Pankreasgangs, die ihre Grenzen haben. Unser Team hat kürzlich ein neues Elektrokoagulationsmodell für chronische Pankreatitis bei Mäusen entwickelt, das den Vorteil hat, dass es keine lange Injektion von Medikamenten oder eine schwierige Methode erfordert, um es zu beherrschen. Und sie können leicht ein Modell für chronische Pankreatitis etablieren.

Die Verwendung der elektrischen Koagulation zur Induktion einer chronischen Pankreatitis bei Mäusen bietet ein bequemeres und experimentelleres Modell und bietet einen vielversprechenden Weg für zukünftige Forschungen auf diesem Gebiet. Legen Sie zunächst die betäubte Maus auf ein Heizkissen, um die Körpertemperatur zu halten. Rasieren Sie mit einem Trimmer die Haare zwischen Brust und Unterbauch.

Als nächstes machst du mit einer Schere einen zwei Zentimeter langen Schnitt im Mittelbauch, gefolgt von einem ein Zentimeter langen Schnitt zwischen dem Oberbauch und dem Xiphoid-Prozess. Verwenden Sie einen Bauchexpander, um den Bereich der Bauchspeicheldrüse für die Elektrokoagulation zu lokalisieren. Identifizieren Sie mit einem sterilen Wattestäbchen den Zwölffingerdarm von der Rückseite des linken Oberbauchs und drehen Sie ihn, um den Gallengang sichtbar zu machen, der die Leber verbindet.

Vorübergehender Verschluss des proximalen Gallengangs mit einem mikrovaskulären Clip, um eine retrograde Infusion in die Leber zu verhindern. Verbinden Sie das 0,25 x 0,35 Millimeter große Polyethylenrohr mit einer 0,25-Millimeter-Nadel und stechen Sie in den umgebenden Bereich der Ampulle, wobei Sie auf die große Zwölffingerdarmpapille abzielen. Führen Sie den Schlauch in die Papille ein und führen Sie ihn zur Hälfte in den Gallengang ein, dann stoppen Sie den Eintritt.

Starten Sie die Infusionspumpe und infundieren Sie 0,2%ige Methylenblaulösung, bis der Pankreasgang blau wird. Ziehen Sie nach der Infusion den Polyethylenschlauch heraus und entfernen Sie den mikrovaskulären Clip. Verwenden Sie sterile Wattestäbchen, um die Bauchspeicheldrüse zu fixieren, und richten Sie das Elektrokoagulationsmesser auf den blauen Bereich.

Nachdem Sie die Betriebsparameter der Elektrokoagulation eingestellt haben, verwenden Sie reines Kupfer als Elektrodenmaterial und behandeln Sie die Bauchspeicheldrüse zwei bis drei Sekunden lang, wobei Blutgefäße vermieden werden. Fahren Sie mit der Elektrokoagulation fort, bis sich der methylenblau gefärbte Bereich gelb oder braun verfärbt. Wenn die blaue Färbelösung in der Bauchspeicheldrüse nicht mehr sichtbar ist, stoppen Sie die Elektrokoagulation.

Legen Sie die Maus nach der Operation in eine mit Einstreu ausgekleidete Polyethylenbox. Nach der Elektrokoagulation des Pankreasgangs wird die Maus betäubt und auf eine Operationsplattform gelegt. Um Blut durch den Plexus orbitalis zu sammeln, halten Sie die Haut vorsichtig auf den Rücken, um einen leichten Vorsprung des Augapfels zu erzeugen.

Legen Sie dann das Ende eines Kapillarrohrs in den Augenwinkel und führen Sie es vorsichtig in einem Winkel von 30 bis 45 Grad unter den Augapfel ein. Drehen Sie die Kapillare, bis das Blut zu fließen beginnt. Nach der Blutentnahme schließen Sie die Augenlider, indem Sie sanften Druck mit Gaze ausüben.

Zentrifugieren Sie das Blut bei 1.200 g für 15 Minuten und sammeln Sie den Überstand in einem neuen Röhrchen. Messen Sie Amylase, Bilirubin und Hyaluronsäure mit handelsüblichen Kits gemäß den Empfehlungen des Herstellers. Legen Sie anschließend die euthanasierte Maus auf den Operationstisch, der auf vier Grad Celsius eingestellt ist.

Machen Sie mit einer Schere und einer Pinzette einen V-Schnitt in der Bauchdecke, um die Bauchhöhle freizulegen. Entferne die Bauchspeicheldrüse und teile sie zum Färben in drei Teile. Fixieren Sie die Bauchspeicheldrüse in einer 4%igen Polyformaldehydlösung und betten Sie die fixierte Bauchspeicheldrüse zum Schneiden in Paraffin ein.

Schneiden Sie die Paraffinblöcke in 0,5 Millimeter dicke Abschnitte und färben Sie sie mit Hämatoxylin und Eosin sowie mit Massons Färbung für die immunhistochemische Analyse. Betrachten Sie das verfärbte Bauchspeicheldrüsengewebe unter einem Lichtmikroskop. Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung zeigte verstreute Pankreas-Azinuszellen und Hinweise auf eine chronische Pankreatitis in der Elektrokoagulationsgruppe an Tag 14.

An Tag 28 wurden Anzeichen einer Gewebeerholung und einer Umkehrung der Pathologie in den Azinuszellen der Bauchspeicheldrüse beobachtet. Die Masson-Färbung zeigte signifikant mehr Fibrose in der Elektrokoagulationsgruppe im Vergleich zur Scheingruppe. Immunhistochemische Färbungen zeigten erhöhte Alpha-1-, Typ-1-Kollagen- und Alpha-Aktinspiegel der glatten Muskulatur in der Elektrokoagulationsgruppe, was auf einen höheren Grad an chronischer Pankreatitis hinweist.

Die Hyaluronsäurespiegel stiegen in der Elektrokoagulationsgruppe an und erreichten um den 21. Tag herum ihren Höhepunkt, während sie in der Scheingruppe stabil blieben. Die Bilirubinspiegel stiegen bis zum Tag 14 in der Elektrokoagulationsgruppe signifikant an und zeigten einen Höhepunkt um Tag 21, während die Scheingruppe keine Veränderungen zeigte. Die Amylase-Spiegel in der Elektrokoagulationsgruppe stiegen an Tag 14 an, gefolgt von einem Rückgang bis zum Tag 28, wobei die Scheingruppe nur geringe Unterschiede zeigte.