Name: Verfahren zur Identifizierung von Infektions Prionen Nach Passage durch das Verdauungssystem von eine Vogelart (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Erfahren Sie, wie infektiöse Prionen nach Passage durch das Verdauungssystem von Amerikanischen Krähen identifiziert werden. Diese Methode nutzt Mäuse-Bioassays und Western Blot zur Bestätigung der Infektiosität.

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Wir möchten S. Werner für die Bereitstellung der in dieser Studie verwendet und USDA Krähen danken, APHIS, WS, NWRC Tierpfleger für Tierpflege und-überwachung. Erwähnen oder die Verwendung eines Produkts nicht USDA Billigung. Die Finanzierung für diese Studie wurde von USDA APHIS, Veterinary Services zur Verfügung gestellt.

Unser Protokoll wird von einem zuvor veröffentlichten wir 7 angepasst. Alle Verfahren, die Tiere wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss des United States Department of Agriculture (USDA), Tier-und Pflanzengesundheit Kontrolle Service (APHIS), Wildlife Services (WS), National Wildlife Research Center (NWRC) zugelassen. 1. Crow Gavaging <ol><li> Schätzen Durchlaufzeit &quot;Pseudo Hirnmaterial&quot; durch den Verdauungstrakt der amerikanischen Krähen. <ol><li> Mix 5 ml gekocht und Rührei ganzes Ei mit blauen Farbstoff und eine Magensonde ein Krähe mit einer 2 in der Schlundsonde Nadel (Abbildung 1). </li><li> Überprüfen Krähe alle 30 min bis blau / grün-gefärbten Kot werden nicht mehr ausgeschieden. </li></ol></li><li> Erhalten infizierten und unheilbar krank RML (Chandler Stamm)-infizierten C57BL / 6 Maus Gehirne. </li><li> Generieren Sie einen 20% wt / vol normal und infizierten Maus-Hirn-Homogenat in einer Kugel Mixer Homogenisator mit 1xPhosphat-gepufferte Salzlösung (PBS) und Glasperlen, dann Zentrifugieren bei 3.000 × g für 1 min, um größere Partikel zu entfernen. Überstand entfernen und verdünnt mit einem gleichen Volumen an 1 × PBS, um eine 10% w / v in steriler PBS zu erzeugen. Einfrieren bei -80 ° C, bis sie benötigt. </li><li> 17 Stunden vor der Magensonde zu entfernen Essen, aber nicht Wasser, von Luftfedern. </li><li> Zufällig zuordnen Krähen Behandlungsgruppen und der Schlundsonde oral jede Krähe mit 5 ml entweder normal oder infizierten Mausgehirnhomogenat mit einer 2 in der Schlundsonde Nadel. </li><li> Über kräht auf einzelne Käfige und sammeln und bündeln alle Kot in jedem Käfig für 4 Stunden nach der Magensonde (Abbildung 2). </li><li> Homogenisieren gepoolten Fäkalien für jede Krähe in einem Kugel-Homogenisator Mixer mit Glasperlen, bis eine gleichmäßige Struktur erzielt wird. * Crow Kot sind meist flüssig und kann leicht gemischt werden. </li><li> Für jede Krähe, verdünnte 500 ul der fäkalen Homogenat in 9,5 ml 1x PBS für ein Gesamtvolumen von 10 ml. </li><li> Zentrifugieren Sie die fäkale homogenate für 15 min bei 1.400 xg und extrahieren Sie den Überstand. </li><li> Um der Gefahr eines sekundären mikrobiellen Infektion zu minimieren, behandeln Stand mit 1 ul von 100 Einheiten / ml Penicillin und 100 ug / ml Streptomycin (Invitrogen, NY) pro 100 ul Homogenat dann unter UV-Licht bei Raumtemperatur für 20 min reduzieren Risiko viraler und bakterieller Kontamination. Nach der UV-Belichtung, beschallen Proben in einem Beschallungsgerät 3000 Mp bei Einstellung 70 für 30 Sekunden, um die Membran der verbleibenden Mikroorganismen stören. </li></ol> 2. Maus-Impfung <ol><li> Zufällig Mäuse zuweisen, um die folgenden Behandlungsgruppen (Tabelle 1): <ol><li> Gruppe 1 - Positive Behandlung Mäusen intraperitoneal geimpft (IP) mit 1 ml der fäkalen Homogenat von Krähen oral mit 5ml infizierten Mäusehirnen zwangsernährt. </li><li> Gruppe 2 - Negative Behandlung Mäuse geimpft IP mit 1 ml der fäkalen Homogenat von Krähen oral mit 5ml normalen Gehirn der Maus zwangsernährt. </li><li> Verdünnen infected und Normal Mausgehirnhomogenat für Gruppen 3 und 4 bis 1:100 w / v in 1x PBS. </li><li> Gruppe 3 - Positive Kontrollmäusen eingeimpft IP mit 1 ml der infizierten Maus-Hirn-Homogenat. </li><li> Gruppe 4 - Negative Kontrollmäusen eingeimpft IP mit 1 ml normalen Maus-Hirn-Homogenat. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Treatment Group </td><td> Anzahl der Tiere </td></tr><tr><td> Gruppe 1 </td><td> Scrapie + Crow Kot </td><td> 100 </td></tr><tr><td> Gruppe 2 </td><td> Scrapie - Krähen-Kot </td><td> 25 </td></tr><tr><td> Gruppe 3 </td><td> Scrapie + Maus Gehirn </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Gruppe 4 </td><td> Scrapie - Maus Gehirn </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . Tabelle 1 Scrapie Status des Inokulums (positive + negative -) und Anzahl der verwendeten Tiere 7. <ol start="2"><li> Intraperitoneal impfen Maus: <ol><li> Scruff Maus durch dorsalen Nackenfell mit Daumen und Zeigefinger und sanft drehen, um Bauchseite aus. </li><li> Elevate hinteren Ende der Maus, so Kopf ist etwas niedriger. </li><li> Legen Sie 25 G-Nadel 1 cm durch die Haut, 1 cm lateral der Mittellinie, und 1-2 cm vor dem Iliosakralgelenk mit einer Nadel sichernde Spritze. </li><li> Spritzen 1 ml langsam in Maus impfen Körperhöhle. </li></ol></li></ol> 3. Maus-Überwachung <ol><li> Überwachung der Mäuse täglich, bis sie klinische Zeichen der Maus Scrapie auszudrücken. Klinische Symptome können sein: Kyphose, Ataxie, steifen Schwanz, mangelnde Pflege, Abmagerung und Lethargie. </li><li> Ergebnis Mäuse für jede der sechs klinischen Zeichen, wenn sichtbare Anzeichen sind offensichtlich, wobei 0 = keine sichtbar, 1 = mäßig, und 2 = schwere. </li><li> Euthanize Mäuse, wenn die gesamte tägliche Punktzahl für jedes Zeichen zu erreichen ≥ 8 für 1 Tag, ≥ 6 kontinuierlich für 3 Tage, oder bei 365 Tage nach der Inokulation (dpi). </li><li> Ernte Gehirn unmittelbar nach euthanasien und bei -70 ° C </li><li> Scrapie, eine Diagnose zu bestätigen, Digest Gehirnproben mit 3 ul einer 50 ug / ml Proteinase-K-Lösung (PK) wie folgt verdünnt: 3,1. PK ul, 12,5 ul 500 mM EDTA, pH 8, 109,39 ul 1x PBS für 30 min bei 45 ° C, dann inaktivieren PK durch Zugabe von 8 &amp;mgr; l Ladepuffer und Inkubation Proben bei 95 ° C für 5 min. Last Proben auf ein 12% SDS-PAGE-Gel Elektrophorese und Übertragung auf Immobilon-PVDF-Membran und Block mit 5% fettfreier Milch in 0,2% Tween 20 in PBS für 1 h bei Raumtemperatur. Sonde dann mit BAR224 anti-PrP monoklonaler Antikörper, der mit Meerrettich-Peroxidase, verdünnt in Superblock, für 1 Stunde bei Raumtemperatur konjugiert. Spülen Membran für 1 Stunde mit PBS-Tween 20 0,2%. Um zu visualisieren, Inkubation Western-Blot 5 min mit Chemilumineszenzsubstrat und Bild auf einem G-Feld-Gel-Dokumentationssystem. </li></ol>

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Horizontal prion transmission in mule deer.</a> Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).</li>
<li>Sigurdson, C. J., Adriano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Wasting+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Chronic Wasting Disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of prion transmission in mule deer.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).</li>
<li>Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+prions+in+pre-clinical+deer+and+transmission+of+chronic+wasting+disease+solely+by+environmental+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure.</a> PLoS ONE. 4 (6), e5916(2009).</li>
<li>VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+remains+infectious+after+passage+through+digestive+system+of+American+crows+%28Corvus+crachyrhunchos%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos).</a> PLoS ONE. 7 (10), e45774(2012).</li>
<li>Imran, M., Mahmood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+animal+prion+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">An overview of animal prion diseases.</a> Virology Journal. 8 (493), (2011).</li>
<li>Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expanding+universe+of+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+PATHOGENS%22%5BJournal%5D)">The expanding universe of prion disease.</a> PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26(2006).</li>
<li>Bruce, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmissions+to+mice+indicate+that+%27new+variant%27+CJD+is+caused+by+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent.</a> Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).</li>
<li>Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+lateral+transmission+of+scrapie+between+sheep+kept+under+natural+conditions+using+lymphoid+tissue+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy.</a> Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).</li>
<li>Collinge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+prion+zoonoses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The risk of prion zoonoses.</a> Science. 335 (6067), 411-413 (2012).</li>
<li>Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+agent+diversity+and+species+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Prion agent diversity and species barrier.</a> Veterinary Research. 39 (47), (2008).</li>
<li>Harrington, R. D., Baszler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+species+barrier+limits+transmission+of+chronic+wasting+disease+to+mink+%28Mustela+vison%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison).</a> The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).</li>
<li>Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mites+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mites as vectors for scrapie.</a> Lancet. 347 (9008), 1114(1996).</li>
<li>Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fly+larvae+and+pupae+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fly larvae and pupae as vectors for scrapie.</a> Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).</li>
<li>Matthews, D., Cooke, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+for+transmissible+spongiform+encephalopathies+in+non-ruminant+livestock+and+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+Scientifique+Et+Technique-Office+International+Des+Epizooties%22%5BJournal%5D)">The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).</li>
<li>Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deer+carcass+decomposition+and+potential+scavenger+exposure+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).</li>
<li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+%28PrPSc%29+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li>
<li>Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transportation+of+prion+protein+across+the+intestinal+mucosa+of+scrapie+susceptible+and+scrapie-resistant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep.</a> Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).</li>
<li>Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+sheep+scrapie+brain+homogenate+to+rumen-simulating+conditions+does+not+result+in+a+reduction+of+PrP%28Sc%29+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels.</a> Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).</li>
<li>Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+of+BSE+and+scrapie+prions+in+stools+from+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models.</a> Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).</li>
<li>Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+shedding%2C+alimentary+clearance+and+intestinal+spread+of+prions+in+hamsters+fed+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie.</a> Veterinary Research. 40 (1), 4(2009).</li>
<li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li>
<li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores%2C+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li>
<li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li>
<li>Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feed+intake%2C+digestion+and+passage+of+proboscis+monkey+%28Nasalis+larvatus%29+in+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity.</a> Primates. 33 (3), 399-405 (1992).</li>
<li>Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+feeding+strategies+and+potential+disease+transmission+in+Wisconsin+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer.</a> Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).</li>
<li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+%28Cervus+elaphus+nelsoni%29+using+protein+misfolding+cyclic+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li>
<li>Hicks, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guano+deposition+in+an+Oklahoma+crow+roost%5BTitle%5D)+AND+%22Condor%22%5BJournal%5D)">Guano deposition in an Oklahoma crow roost.</a> Condor. 81 (3), 247-250 (1979).</li>
<li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Wir zeigen ein Verfahren um den Durchgang von PrP Res Material durch das Verdauungssystem von Krähen zu dokumentieren. Wir verwendeten konventionellen Methoden, um festzustellen, ob Krähen haben die Fähigkeit, PrP Res Material, um die krankheitsfreie geografischen Gebieten transloziert. Andere Widerstand von PrP Res ausgewertet 19-21 und Nagetier 22,23 Verdauungsflüssigkeiten, die beide nicht zu beseitigen Wiederkäuer. Die künftige Anwendung dieser Techniken auf and...

Übertragbare spongiforme Enzephalopathien (TSE) sind tödliche Infektions neurodegenerative Erkrankungen, die Tierwelt auswirken, Haustieren und Menschen. Der Erreger der TSE-Erkrankungen scheint falsch gefaltete oder pathogenen Isoformen (PrP Res) von Prion-Proteinen 1 sein. Tier TSE-Erkrankungen gehören Chronic Wasting Disease (CWD) in Maultierhirsch (Odocoileus hemionus), Weißwedelhirsche (Odocoileus virginianus), Elch (Cervus elaphus) und Elch (Alces alces), Scrapie bei Schafen und Ziegen, die bovine spongiforme Enzephalopathie ( BSE) in Hausrinder; tragbare Nerz Enzephalopathie bei Zucht Nerz, Feline Spongiforme Enzephalopathie bei Katzen, exotische Huftiere spongiforme Enzephalopathie in exotischen Zoo sinniert der Familie Hornträger und spongiforme Enzephalopathie in nicht-menschlichen Primaten 8. Der einzelne Mensch TSE-Erkrankung, Variante der Creutzfeldt-Jakob-Krankheit ist selten und vermutlich durch den Verzehr von PrP Res-Contamin erworben werdenATED Essen 9. Ebenso BSE Menschen infizieren können, wenn verseuchtes Rindfleisch verbraucht 10. Von all den TSE-Erkrankungen, Scrapie und CWD sind nur zwei mit sich selbst erhaltende Epidemien und Quellen für die Infektion sind vermutlich von Tier zu Tier 2,3,11 sowie aus Umweltquellen 4-6 sein. Forschung schlägt vor, dass die meisten TSE-Erkrankungen erfordern bemerkenswerte längere Inkubationszeiten aus natürlichen Belichtung Ereignisse des PrP Res Material zur Manifestation klinischer Symptome 2-4,6,8 und Scheinspeziesbarrieren zu minimieren, aber nicht das Potenzial für die, Übertragung zwischen 12-14 beseitigen . Identifizieren Mechanismen für die Ausbreitung von Infektions Prionen (PrP Res) Material ist für die Beantwortung von Fragen, wie TSE-Erkrankungen durch die Landschaft bewegen extrem wichtig. Experimentelle Untersuchungen haben ergeben, dass 15,16, Geflügel und Schweine 17, und amerikanische Krähen (Corvus brac Insektenhyrhynchos) 7,18 passive Träger oder Dispergatoren von PrP Res Material. Passage von PrP Res Material durch das Verdauungssystem von Krähen hat kürzlich dokumentiert, was die Rolle, die sie in Ausbreitung von TSE-Erkrankungen 7 zu spielen. Diese Ergebnisse machen es plausibel, dass Krähen, ein Aasfresser, auftreten können, zu konsumieren und zu transportieren infektiösem Material über Kot Abscheidung, um seuchenfreie Gebiete. Die Verfahren, die wir hier zeigen, wurden verwendet, um den Durchgang von PrP Res Material durch das Verdauungssystem von Krähen zu dokumentieren und die Anwendung dieser Methoden auf andere Fänger und Raubtierarten spezifische Modelle in verwandten zukünftige Forschung erheblich erleichtern. In dieser Studie wurden konventionelle Methoden verwendet werden, um eine unkonventionelle Mittel des Menschenhandels PrP Res Material, das für die Verbreitung und der Gesamtbelastung von PrP Res Material beitragen könnten, zu untersuchen.

<table><tbody><tr><td>RML Chandler-Stamm mausangepasste Scrapie</td><td>Rocky Mountain Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC57BL/6 Mäuse</td><td>Hilltop Labortiere</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amerikanische Krähen</td><td>wild gefangen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stift/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschallgerät</td><td>Misonix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinase-K Lösung</td><td>Roche</td><td>3115887001</td><td></td></tr><tr><td>Ladepuffer</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007 und 0009</td><td></td></tr><tr><td>Bis-tris SDS PAGE 12% Gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0342</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon PVDF-Membran</td><td>Millipore</td><td>1SEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Bullet Mixer-Homogenisator</td><td>Braintree Scientific</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>2,3 mm Zirkonoxid/Kieselsäure-Kügelchen</td><td>BioSpec Products</td><td>11079125Z</td><td></td></tr><tr><td>Bar224 monoklonaler Anti-PrP-Antikörper</td><td>Cayman Chemical 10009035</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Superblock</td><td>Thermo Scientific</td><td>37517</td><td></td></tr><tr><td>chemilumineszierendes</td><td>Substrat Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>G-Box Gel-Dokumentationssystem</td><td>Syngene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

verfahren zur identifizierung von infektions prionen nach passage durch das verdauungssystem von eine vogelart

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Infektiöse Prionen (PrP Res) Material ist wahrscheinlich die Ursache der tödlichen, neurodegenerative übertragbare spongiforme Enzephalopathie (TSE) Krankheiten ein. Übertragung von TSE-Erkrankungen wie Chronic Wasting Disease (CWD), wird vermutet, von Tier zu Tier 2,3 sowie aus Umweltquellen 4-6 sein. Reiniger und Fleischfresser haben Potenzial, PrP Res Material durch Konsum und die Ausscheidung von CWD-kontaminierten Aas transloziert. Neuere Arbeiten haben Gang von PrP Res Material durch das Verdauungssystem der amerikanischen Krähen (Corvus brachyrhynchos), einer gemeinsamen nordamerikanischen Schnitzel 7 dokumentiert. Wir beschreiben Verfahren verwendet werden, um Durchgang von PrP Res Material durch amerikanische Krähen zu dokumentieren. Krähen wurden mit RML-Dehnungs-Maus-adaptierten Scrapie zwangsernährt und ihren Kot gesammelt wurden 4 Stunden nach der Magensonde. Crow Kot wurden dann gesammelt und in intraperitonealC57BL / 6 Mäusen. Die Mäuse wurden täglich überwacht, bis sie ausgedrückt klinischen Zeichen der Maus Scrapie und wurden danach getötet. Asymptomatische Mäuse wurden bis zu 365 Tage nach der Impfung überwacht. Western-Blot-Analyse wurde durchgeführt, um Krankheitsstatus zu bestätigen. Ergebnisse zeigten, dass Prionen infektiös bleiben nach einer Reise durch das Verdauungssystem von Krähen und im Kot vorhanden sind, was zu Krankheit in Versuchsmäusen.

Die angewendeten Verfahren zeigen, dass das Verdauungssystem von Krähen nicht PrP Res Infektiosität 4 Stunden nach orale Gabe von Scrapie Hirnhomogenat 7 zu beseitigen. Alle zwanzig Krähen, die mit PrP Res Material zwangsernährt wurden anschließend PrP Res Material, um Mäuse übertragen über Kot. Kranke Mäuse wurden durch klinische Manifestation der Maus-Scrapie-Krankheit Anzeichen und Bestätigung wurde durch Western-Blot-Analyse abgeschlossen identifiziert. <p class="jove_...

Aasfresser haben Potenzial, infektiöse Prionen übertragbaren spongiformen Enzephalopathie in ihren Kot zu krankheitsfreien Gebieten transloziert. Wir detailliert Methoden verwendet werden, um festzustellen, ob der Maus-adaptierten Scrapie-Prionen bleiben nach dem Durchgang aber den Verdauungstrakt der amerikanischen Krähen (Corvus brachyrhynchos), einer gemeinsamen Verbraucher toter Tiere ansteckend.

Verfahren zur Identifizierung von Infektions Prionen Nach Passage durch das Verdauungssystem von eine Vogelart

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Passage von infektiösem PreOn-Material durch das Verdauungssystem von Amerikanischen Krähen zu dokumentieren. Dies wird erreicht, indem die Krähen zunächst mit infektiösem PreOn-Material gemessen werden. Der zweite Schritt besteht darin, den Krähenkot vier Stunden nach der Sonde zu sammeln und für die Injektion in Mäuse vorzubereiten.Als nächstes werden die Mäuse intraperitoneal mit einem Milliliter Krähenkothomogenat inokuliert. Der letzte Schritt besteht darin, die Mäuse täglich zu überwachen, bis sie klinische Anzeichen von Mauskratzen zeigen. Letztendlich wird die Western-Blot-Analyse verwendet, um das Vorhandensein von infektiösem PreOn im Mausmodell zu bestätigen und die Krankheitsübertragung zu verifizieren.Die Idee, dass Krähen transportieren könnten. CWD kam eines Wintertages zu uns, als wir nach der Fahrt zu einer Elchanlage in Gefangenschaft, wo wir einige Nachforschungen anstellten, und sahen, wie Elche von Krähen gefüttert wurden, und später an diesem Tag Krähen, die aus dem Nichts aus dem Himmel kamen, in diesen Futtertrögen landeten, direkt neben dem Elch fraßen, auf das Getreide koteten, das die Elche fraßen, zusä

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Hier beschreiben wir eine neuartige Assays für die Überwachung der Prion-Aufnahme und-handel durch Immunzellen sofort nach intraperitonealer Inokulation durch Reinigung und Fluoreszenzmarkierung aggregierte Prion Stangen aus infizierten Gehirn Material dann die Überwachung ihrer Aufnahme und Bewegung an der Injektionsstelle und Charakterisierung der Zellen Vermittlung dieser Ereignisse.

Überwachung Immunzellen Trafficking Fluorescent Prion Rods Stunden nach intraperitonealer Infektion

Diese Studie beschreibt Diagnose der Aviären Influenza bei Wildvögeln mit einem tragbaren rRT-PCR-System. Die Methode nutzt die Vorteile der gefriergetrockneten Reagenzien auf Wildvögel in einem Nicht-Labor-Einstellung, die typisch für einen Ausbruch Szenario Bildschirm. Verwenden von molekularen Werkzeugen bietet genaue und empfindliche Alternativen für eine schnelle Diagnose.

Schnelle Diagnose der Aviären Influenza Virus bei Wildvögeln: Verwendung eines tragbaren rRT-PCR und gefriergetrocknet Reagenzien in das Feld

Eine Methode, um zu bewahren, zu erkennen und Sequenz der RNA von Vogelgrippeviren wurde validiert und erweitert mit natürlichen Kotproben von Vögeln. Diese Technik beseitigt die Notwendigkeit der Aufrechterhaltung einer Kühlkette und Handhabung von infektiösen Viren und kann in einer 96-well High-Throughput-Setup verwendet werden.

Avian Influenza Surveillance mit FTA-Karten: Field Methods, Biosafety-und Transportprobleme gelöst

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

Dieses Video demonstriert eine Technik zum Nachweis von fehlgefaltetem Prionprotein in Gehirnschnitten mittels Immunhistochemie. Nach der Behandlung des Hirnschnitts mit Ameisensäure zur Denaturierung von Prionen und zur Minimierung des Infektionsrisikos sowie der Demaskierung der Prionenaggregate durch hitzeinduzierte Epitopgewinnung werden die Schnitte immunmarkiert für die fehlgefalteten Prionenproteinaggregate und unter einem Mikroskop betrachtet.

Nachweis abnormaler Prionenproteine im Hirngewebe mittels Immunhistochemie

Ein kurzes klinisches Untersuchungsprotokoll wird vorgelegt, um den Nachweis klassischer und atypischer Scrapie bei Schafen und Ziegen zu unterstützen.

Klinisches Prüfungsprotokoll zur Erkennung atypischer und klassischer Scrapie bei Schafen

Die Messung der Barriere für die Übertragung von Prionenkrankheiten zwischen den Spezies ist eine Herausforderung und beinhaltet typischerweise tierische Herausforderungen oder biochemische Assays. Hier präsentieren wir einen in vitro Prionenprotein-Umwandlungsassay mit der Fähigkeit, Speziesbarrieren vorherzusagen.

Die Beurteilung Transmissible Spongiforme Enzephalopathie Artgrenzen mit ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Prion Protein-Umwandlungsassay

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um eine einfache, schnelle und effiziente Prion-Verstärkung-Technik, die Echtzeit-Beben-induzierte (RT-QuIC) Konvertierungsmethode beschreiben.

Echtzeit-Beben-induzierte Umwandlung Test zur Erkennung von CWD Prionen in Fäkalien

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um chirurgisch "Darm aufgespaltenen Loops" Huhn Dünndarm schaffen. Dieses Verfahren ermöglicht den Vergleich von mehreren Clostridium Perfringens Stämmen Virulenz in Situ in einem einzelnen Host. Diese Methode verringert deutlich die Anzahl der Hühner in der Regel für ähnliche in Vivo Experimente notwendig.

Ein Modell der aufgespaltenen Dünndarmschlinge in Kostenlose Hühner narkotisierten spezifischen Erreger Clostridium Perfringens Virulenz zu studieren

Die Immunmarkierung abnormaler Prionproteine unter Verwendung immunhistochemischer Protokolle erfordert spezifische Methoden zur Herstellung von Proben- und Anti-PrP-Antikörpern. Das vorliegende Protokoll beschreibt die wichtigsten Schritte bei der Epitop-Demaskierung, um eine korrekte PrP-Immunmarkierung sicherzustellen und die unspezifische Hintergrundfärbung zu minimieren. Dieser Ansatz berücksichtigt auch Biosicherheitsmaßnahmen bei der Durchführung immunhistochemischer Studien mit den...

Nachweis von abnormalem Prionprotein durch Immunhistochemie

Es fehlt eine Methode, um häufig genutzte Bereiche in Laborumgebungen auf Prionenkontamination und eine effektive Dekontamination zu untersuchen. Das hier beschriebene Protokoll bietet wichtige Grundlagen für die Implementierung eines Prionen-Sicherheits-Wischtests im Labor, der leicht an die individuellen Bedürfnisse bestimmter Labore angepasst werden kann.

Prion Safety Laboratory Wischtest

Erfahren Sie, wie infektiöse Prionen nach Passage durch das Verdauungssystem von Amerikanischen Krähen identifiziert werden. Diese Methode nutzt Mäuse-Bioassays und Western Blot zur Bestätigung der Infektiosität.

Verfahren zur Identifizierung von Infektions Prionen Nach Passage durch das Verdauungssystem von eine Vogelart

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