Artículo de método

Split-ubiquitina levadura membrana base de dos híbridos (MITO) del sistema: Una poderosa herramienta para identificar interacciones proteína-proteína

DOI:

10.3791/1698

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1 de febrero de 2010

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1Department of Biochemistry, University of Toronto, 2Department of Molecular Genetics, University of Toronto, 3Terrence Donnelly Centre for Cellular and Biomolecular Research (CCBR), University of Toronto

En este artículo

Resumen

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MITO permite la detección sensible de las interacciones transitoria y estable entre las proteínas que se expresan en el organismo modelo Saccharomyces cerevisiae. Se ha aplicado con éxito para estudiar las proteínas integrales de membrana exógenos y la levadura con el fin de identificar a sus socios que interactúan de un modo de alto rendimiento.

Resumen

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La importancia biológica fundamental y clínica de las proteínas integrales de membrana impulsado el desarrollo de un sistema a base de levadura para la identificación de alto rendimiento de las interacciones proteína-proteína (PPI) para las proteínas transmembrana de larga duración. Con este fin, nuestro laboratorio desarrolló la levadura split-ubiquitina membrana base de dos híbridos (MITO) del sistema. Esta tecnología permite la detección sensible de las interacciones proteína transitoria y estable con

Protocolo

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1. Antecedentes

Interacciones proteína-proteína (IBP) son los pilares fundamentales que participan en el gobierno de todos los procesos celulares. En consecuencia, es esencial que todas las interacciones son estrictamente regulados con el fin de mantener la homeostasis celular, como un cambio en este equilibrio biológico común juega un papel en la enfermedad y la transformación de las células cancerosas. Membrana de proteínas asociadas se encuentran entre la clase de mayor importancia biológica de las proteínas, ya que puede iniciar complejas cascadas de señalización, y mediar en la importación y exportación de diversas moléculas, como las ....

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Discusión

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Mito es el primer sistema de alto rendimiento que permite la identificación de las interacciones entre las proteínas de membrana de larga duración y citosólica o socios de la membrana. Se ha utilizado para estudiar la proteína de la membrana de una serie de organismos [3-7]. Hay, sin embargo, los detalles específicos que deben ser examinados para asegurar que la proteína de interés puede ser objeto de estudio con el mito.

Muchas proteínas de membrana se dirigen a la membrana plasmática a tra.......

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Divulgaciones

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Igor Stagljar es co-fundador de DualSystems Biotech, Suiza.

Agradecimientos

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Nos gustaría dar las gracias a Edmonds amanecer para una lectura crítica de este manuscrito. El laboratorio Stagljar es apoyado por fondos de la Fundación Canadiense para la Innovación (CFI), el Instituto Canadiense de Investigación en Salud (CIHR), la Fundación Heart and Stroke, de la Sociedad Canadiense del Cáncer y Novartis.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Polietilenglicol (PEG3350)BioShop CanadaPEG335
Acetato de litio dihidratadoBioShop CanadaLIA001
X-Gal (5-Bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido)BioShop CanadaXGA001
N,N-dimetilformamidaBioShop CanadaDMF 451
3-amino-1,2,4-triazol (3-AT)BioShop CanadaATT124
Fosfato disódicoBioShop CanadaSPD307
Fosfato monosódicoFisher ScientificBP329-500
ADN de esperma de salmónVWR internationalCA80601-120
D-GlucosaBioShop CanadaGLU501
Caldo LB LENOXBioShop CanadaLBL405
Base de nitrógeno para levaduraBioShop CanadaYNB406
Extracto de levaduraBioShop CanadaYEX401
PeptonaBD Biosciences211677
Bio-TriptonaBioShop CanadaTRP402
Sulfato de adeninaBioShop CanadaADS201
L-UraciloBioShop CanadaURA241
L-TreoninaBioShop CanadaTHR002
L-HistidinaBioShop CanadaHIS200
L-MetioninaBioShop CanadaMET222
L-ValinaBioShop CanadaVAL201
L-FenilalaninaBioShop CanadaPHA302
L-IsoleucinaBioShop CanadaISO910
L-TirosinaBioShop CanadaTYR333
L-LeucinaBioShop CanadaLEU222
L-ArgininaBioShop CanadaARG006
L-TriptófanoFisher ScientificBP395-100
L-LisinaBioShop CanadaLYS101
L-AlaninaFisher ScientificBP369-100
AgarBioShop CanadaAGR001
Perlas de vidrio sodadoBiospec Products11079105
Cloruro de sodioBioShop CanadaSLD002

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stagljar, I., Fields, S. Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies. Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).
  2. Iyer, K. Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid s....

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Etiquetas

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