Overview
וידאו זה מתאר טכניקת הזרקה תוך-אדוקטיבית שבה אנו מספקים תערובת הזרקה לתוך צינורות של בלוטות החלב של העכבר.
Protocol
1. הזרקה תוך-ורידית
- השתמש בטכניקות אספטיות לאורך כל ההליך הכירורגי.
- ליצור אתר חתך על העור באורך של ~ 1 ס"מ בין שני MGs מפשעתי הרביעי (איור 1). בזהירות להפריד את דש העור (עם MG) מן הצפק הקודקודי כדי לדמיין את עץ צינור החלב.
- החזק בזהירות את הפטמה עם מלקחיים של Watchmaker ולהסיר את הפטמה החיצונית מבלי לחתוך את כל העור הסמוך, באמצעות מספריים מיקרו-ניתוח.
- טען ~ 3-5 μL של תערובת הזרקת Ad-Cre לתוך מזרק המילטון 25 μL עם מחט רכזת מתכת 33 G מודבק. להעריך את נפח תערובת ההזרקה במזרק בהתבסס על הצבע הכחול הכלול בתערובת.
שים לב: השתמש בנפח קטן יותר (למשל, 3 μL) בעת הזרקת לתוך MGs של נקבות בנות 3-4 שבועות ונפח גדול יותר (למשל, 10 μL) בעת הזרקת לתוך MGs של נקבות מניקות. - החזיקו בעדינות את קצה דש העור בפינצטה מעוגלת עדינה והזריקו לאט לאט את תערובת הזרקת ה-Ad-Cre לתוך הפטמה, תוך ניטור התפשטות הצבע הכחול לתוך עץ צינורי המימי. לשמור על קצב ההזרקה נמוך ככל האפשר כדי למנוע נזק לומן צינורית.
שים לב: נוזל מוזרק (כפי שמודגם על ידי צבע כחול ברומופנול כלול) מתפשט על פני כל עץ צינורי מבלי לדלוף לתוך התא stromal מציין זריקה תוך אדוקטיבית מוצלחת. - בעדינות למשוך את המחט מן הפטמה, כדי למנוע דליפה של הנוזל מוזרק.
- בדוק את הצד הדיסטלי (כלומר, הרחק מהפטמה) של MG או את האזור שמסביב לפטמה המוזרקת. שים לב כי נפיחות צבע כחול (כלומר, צבע מתפזר לתוך סטרומה הסמוכה) מציין הזרקת כרית שומן mammary ולא זריקה תוך אדוקטלית מוצלחת.
- סגור את הפצעים הכירורגיים (מ 1.2) בעור עם קליפים פצע.
2. טיפול לאחר הניתוח
- מוציאים את העכבר מההרדמה ומניחים אותו על כרית חימום בתוך כלוב נקי להחלמה.
- לנהל meloxicam תת עורית ב 5 מ"ג / קילוגרם שוב, 24 שעות לאחר הניתוח.
- לפקח על התנאים הכלליים של החיה ולחפש סימנים של זיהום באתר החתך במשך 5 ימים.
- קליפים פצע מוסרים ~ 7-10 ימים לאחר הניתוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 1: דיאגרמה סכמטית של הזריקה התוך-אדוקטיבית של וירוס Ad-Cre לתוך MG. (A) אתר חתך בקו האמצע בין שני MGs הרביעי. (B) הזרקה תוך-אדוקטלית של Ad-Cre עם צבע כחול (להדמיה טובה יותר) לתוך אחד MGs הרביעי. (C) סגירת החתך בעור על ידי קליפים פצע
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 3 blunt |
| 7mm Reflex Clip | Braintree Scientific | RF7 CS | |
| Adenovirus, Ad-K5-Cre | University of Iowa Viral Vector Core | Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547) | |
| Adenovirus, Ad-K8-Cre | University of Iowa Viral Vector Core | Ad5mK8-nlsCre | |
| Bromophenol Blue | Sigma-Aldrich | B0126-25G | |
| Hamilton syringe | Hamilton | 7636-01 | 0.025 mL |
| Micro-dissecting scissors | Pentair | 9M | Watchmaker's Forceps |
| Micro-dissecting tweezers | Dumont | M5 |
