Para cultivar las células troncales de la cresta neural (NCSC) in vitro, un medio especial (NCSCM) es necesario. Parte esencial de NCSCM es el extracto de embrión de pollo (CEE). Se describen las técnicas precisas para producir una cantidad al máximo de calidad en estado puro y de alta CEE, incluyendo detalles como el aislamiento, la maceración, la centrifugación, y los procesos de filtración.
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Artículo de método
La producción de extracto de embrión de pollo para el Cultivo de murino crestas de células neurales madre
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Resumen
Resumen
La cresta neural nace de la neuro-ectodermo durante la embriogénesis y persiste sólo temporalmente. Los primeros experimentos ya prueba de las células progenitoras pluripotentes a ser una parte integral de la cresta neural 1. Fenotípicamente, las células troncales de la cresta neural (NCSC) se definen por la vez que expresa p75 (bajo afín crecimiento de los nervios del receptor del factor, LNGFR) y SOX10 durante su migración desde la cresta neural, 2,3,4,5. Estas células progenitoras pueden diferenciarse en células musculares lisas, células cromafines, neuronas y células gliales, así como los melanocitos, cartílago y hueso 6,7,8,9. Para cultivar NCSC in vitro, un especial de madre de la cresta neural medio celular (NCSCM) se requiere 10. La parte más compleja de la NCSCM es la preparación del extracto de embrión de pollo (CEE), que representan una fuente esencial de los factores de crecimiento para el NCSC, así como para otros tipos de explantes neural. Otros ingredientes NCSCM lado CEE están disponibles comercialmente. La producción de CCE de laboratorio con equipamiento de serie es de gran importancia para conocer los detalles difíciles como el aislamiento, la maceración, la centrifugación, y los procesos de filtración. En este protocolo se describen las técnicas precisas para producir una cantidad al máximo de calidad en estado puro y de alta CEE.
Protocolo
Los autores afirman que los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las Comunidades Europeas la Directiva del Consejo (86/609/CEE), siguiendo las directrices de los NIH sobre el cuidado y uso de animales en los procedimientos experimentales y los reglamentos establecidos por el Comité Institucional la atención y el empleo Comisión (IACUC) de la Universidad de Duisburg-Essen (Alemania).
Parte 1: Configuración (no se muestra en el vídeo)
La elaboración de materiales y soluciones (antes de tomar los huevos de la incubadora)
- Los huevos que se incuban en una incubadora humidificada durante....
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Discusión
Este protocolo se basa en modificaciones de los procedimientos que se han descrito en el pasado 10,11. Además de las publicaciones anteriores que aquí muestran los distintos pasos diferentes del proceso de ampliación más. Esto apoya el experimentador con detalles importantes asegurando los procedimientos correctos y los resultados fiables. Además, como el proceso de disección es una parte esencial de la extracción de Europa central y oriental se describe el procedimiento de toma de los embriones fuera del sac.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
El apoyo y asesoramiento de Markus Pajtler Bohrer y Robert fueron de gran valor para la visualización de este protocolo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Huevos de pollo incubados durante 11 días | Sorries-Trockels Vermehrungszucht GmbH | ||
| Espray desinfectante alcohólico | Schülke Mayr GmbH | ||
| DMEMGlutamax | GIBCO, by Life Technologies | ||
| Jeringa estéril (60 ml) | BD Biosciences | ||
| Tubos estériles (50; 15 ml) | Greiner Bio-One | ||
| Puntas de pipeta estériles | Starlab GmbH | ||
| Hialuronidasa tipo IV-S | Sigma-Aldrich | ||
| Milipore stericups estériles (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific | ||
| Pipetas estériles (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One | ||
| Centrífuga L5-50 | Tipo de rotor Ti-45 |
Referencias
- Bronner-Fraser, M., Fraser, S. E. Cell lineage analysis reveals multipotency of some avian neural crest cells. Nature. 335, 161-164 (1988).
- Stemple, D. L., Anderson, D. J. Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest. Cell. 7....
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Reimpresiones y permisos
