Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Modelo murino de Curación de Heridas

68.3K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/50265

⸱

28 de mayo de 2013

 ,  ,  ,  ,  , 

En este artículo

Resumen

Un modelo murino de cicatrización de heridas cutáneas que se puede utilizar para evaluar los compuestos terapéuticos en los entornos fisiológicos y fisiopatológicos.

Resumen

La curación y la reparación de heridas son los procesos biológicos más complejos que se producen en la vida humana. Después de la lesión, múltiples vías biológicas se activan. Cicatrización de las heridas, que se produce en los pacientes diabéticos, por ejemplo, puede conducir a resultados desfavorables graves como la amputación. No es, por lo tanto, un impulso creciente para desarrollar nuevos agentes que promueven la reparación de la herida. Las pruebas de estos se ha limitado a modelos animales grandes tales como cerdos, que son a menudo poco práctico. Los ratones representan el modelo preclínico ideal, ya que son económicos y susceptibles de manipulación genética, que posibilite la investigación mecanicista. Sin embargo, la curación de heridas en un ratón es fundamentalmente diferente a la de los seres humanos, ya que se produce principalmente a través de la contracción. Nuestro modelo murino supera este mediante la incorporación de una férula alrededor de la herida. Por entablillado la herida, el proceso de reparación es entonces dependiente epitelización, proliferación celular y la angiogénesis, que reflejan de cerca laprocesos biológicos de cicatrización de la herida humana. Mientras que requieren consistencia y la atención, este modelo murino no implica técnicas quirúrgicas complicadas y permite la prueba robusta de agentes prometedores que pueden, por ejemplo, promover la angiogénesis o inhibir la inflamación. Además, cada ratón actúa como su propio control como se preparan dos heridas, lo que permite la aplicación tanto del compuesto de ensayo y el control del vehículo en el mismo animal. En conclusión, se demuestra un modelo práctico, fácil de aprender, y robusto de cicatrización de la herida, que es comparable a la de los humanos.

Introducción

Cicatrización de las heridas es responsable de la morbilidad y mortalidad en todo el mundo significativo, lo que es particularmente cierto para los que sufren de diabetes mellitus 1,2. En los seres humanos, la cicatrización de heridas es un proceso continuo de procesos, en la que no es significativa superposición 3. Inmediatamente se inició a raíz de los procesos inflamatorios, heridas. Las células inflamatorias liberan factores que estimulan los procesos de proliferación celular, la migración y la angiogénesis. Después de re-epitelización y formación de nuevo tejido hay una fase de remodelación que implica tanto la apoptosis y de re-organizació....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

1. Preparación de férulas y vendajes oclusivos

  1. Esquema 10 círculos mm en 0,5 mm de espesor y láminas de silicona con unas tijeras o un punzón de biopsia para crear discos de silicona.
  2. Centro de un punzón de biopsia de 5 mm en el centro del círculo de 10 mm y presione firmemente para crear un agujero para formar una "rosquilla"-como disco que se utilizará como una férula.
  3. Esquema 10 mm círculos sobre un apósito oclusivo transparente como Opsite y tijeras utilizar para crear vendajes circulares.

2. Animales de experimentación

  1. Obtener la aprobación del Comité de Ética Animal de todos los experi....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

Una curva de cierre de la herida se determina calculando el diámetro medio de la herida y expresando los resultados como un porcentaje, es decir, 100 - (Día 0 / diámetro X Día). En este experimento se aplicó un compuesto terapéutico (o vehículo de control) al día a la herida. El compuesto terapéutico de cierre acelerado en gran medida la herida (Figura 3). Es importante señalar que las férulas deben mantenerse durante la duración del experimento, como la eliminación de las férulas dará lugar a .......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Este es un modelo experimental murino de cicatrización de heridas cutáneas. Una característica importante de este modelo es el uso de férulas de silicona para prevenir la contracción de la herida por lo que pueden producirse de re-epitelización y formación de nuevo tejido, por lo que es similar al proceso que se produce en los seres humanos. Este modelo es muy versátil y se puede utilizar para evaluar la cicatrización de heridas en la configuración tanto fisiológicos y fisiopatológicos (por ejemplo, diabetes me.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer el apoyo financiero del Consejo Nacional de Salud y Consejo de Investigación Médica (NHMRC) de Australia (Proyecto de Donación ID: 632512). Louise Dunn fue apoyado por una beca de Carrera Temprana NHMRC y Christina Bursill por una beca de la Fundación Nacional de Desarrollo de la Carrera del Corazón.

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Lámina de silicona a presión para sellar de 0,5 mm de espesorInvitrogenP18178Cortado en "rosquillas" con un diámetro externo de 1 cm, un diámetro interno de 0,5 cm
Punzón de biopsia de 5 mmSteifelBC-B1-0500Para delinear el área de la herida a extirpar
Tijeras Vannas curvo de 8,5 cmWorld Precision Instruments 501232Para incisión y escisión de heridas
Dumonte #7b pinzas, 11 cmWorld Precision Instruments501302Para agarrar la piel al crear incisiones y extirpar la piel
Pinzas de Graefe, dentadas de 10 cmWorld Precision Instruments14142Para ayudar a fijar la férula de silicona a la piel
Portaagujas, mandíbulas lisas, curvadas, 12,5 cmWorld Precision Instruments14132
Pinzas Malis, lisas, rectas, 12 cmCodman and Shurtleff, Inc (J& amperio; J)80-1500Para suturar los anillos de silicona a la piel
Regla, gradación de 0,5 mmn/a
Pinzas Gradación de 0,25 mmDuckworth y Kent9-653Para medir el área de la herida
Opsite FlexiFix película adhesiva transparente. 10 cm x 1 mSmith & Sobrino66030570
Rimadyl (Carprofeno)Pfizer462986

Referencias

  1. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair. 17, 763-771 (2009).
  2. Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).
  3. ....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Explorar más artículos

Herida entablilladaEpitelizaciónAngiogénesisPunzón de biopsiaApósito oclusivoDoppler láserAnálisis inmunohistoquímicoCierre de la herida