Summary
هناك حاجة ملحوظة لتحسين المعلومات عن السائقين الجزيئية من المريء باريت. تلوين مناعي هو تقنية مفيدة لفهم آثار إشارة الخلية على مورفولوجيا الخلايا. نقدم بروتوكول بسيطة وفعالة لاستخدام مناعي تلطيخ لتقييم العلاجية في خلايا المريء باريت.
Abstract
غدية المريء (EAC) لديه معدل البقاء على قيد الحياة عموما أقل من 17٪ وارتفع معدل الإصابة EAC بشكل كبير خلال العقدين الماضيين. واحد من عوامل الخطر الرئيسية للEAC هو المريء باريت (BE)، وهو تغيير حؤولي من المريء الحرشفية العادي ردا على حرقة مزمنة. على الرغم من اتصال راسخة بين EAC وأن تكون والاستجواب من الأحداث الجزيئية، وخاصة مسارات الإشارات التي تنطوي على تغير تطور هو EAC، ولا يزال الغموض يكتنف. الكثير من هذا يعود لعدم وجود مناسبة في نماذج المختبر متاح لدراسة هذه الأمراض. في الآونة الأخيرة، أصبحت خطوط BE خلية خلد المتاحة تجاريا يسمح لفي المختبر دراسات BE. هنا، نقدم طريقة لتلوين مناعي من خطوط الخلايا خلد BE، مما يسمح في توصيف المختبر من إشارات الخلية والهيكل بعد التعرض للمركبات العلاجية. وتطبيق هذه التقنيات هيلع تطوير التبصر في الآليات التي تشارك في BE لEAC التقدم وتوفير السبل المحتملة للعلاج والوقاية من EAC.
Introduction
المريء باريت (BE) هو تغيير حؤولي في ظهارة الحرشفية العادي من المريء ونتيجة التعرض المزمن لمحتويات المعدة الناتجة عن مرض الجزر المعدي المريئي (GERD) 1. BE ويعتقد أن تكون آلية وقائية في التصدي لارتجاع المريء، ولكن وجود BE يضفي على زيادة خطر غدية المريء (EAC)، وهو المرض الذي يحمل الفقراء بشكل كبير البقاء على قيد الحياة 1. وتشير التقديرات الحالية إلى أن ما يصل إلى 5.6٪ من سكان أمريكا قد تكون، ولكن كما هو في كثير من الأحيان أعراض BE، ويعتقد أن غالبية BE لا تزال غير مشخصة 2. كما شهدت معدلات وقوع كل من ارتجاع المريء وEAC استمرار النمو 3، فقد أصبح من المهم لفهم الآليات الجزيئية المشاركة في تطور BE لEAC، وخصوصا هذه المعلومات يمكن أن يوفر النهج العلاجية من أجل منع تطور BE لEAC.
وقد أسفرت نتائج الدراسات> المريض الموجهة في النموذج الحالي من BE-EAC المرضية 1. الالتهابات المزمنة، والإصابات، والأضرار السمية الناتجة عن التعرض لفترات طويلة لمحتويات المعدة ممارسة ضغوط انتقائية على BE الآفة تعزيز تطور الأورام لمجموعة شرق افريقيا. وقد تم تحديد عدد من التعديلات الوراثية خلال BE لتطور EAC. ومع ذلك، على الرغم من هذا هناك نقص واضح في الفهم عن التغييرات الدقيقة في إشارة الخلية والآثار اللاحقة على بنية الخلية ووظيفتها.
خلدت في خطوط الخلايا في المختبر هي أدوات مفيدة لدراسة آثار إشارة الخلية، ولا سيما في التحقيق في الآثار المترتبة على المركبات العلاجية المستهدفة. توافر التجارية مؤخرا مخلد BE خطوط الخلايا يسمح لمثل هذه الدراسات. على الرغم من أن فحوصات عالية الإنتاجية، مثل فحوصات الجدوى المستعملة على نطاق واسع، ويمكن أن تكون ذات قيمة في تقييم آثار العلاجات المستهدفة على تكاثر الخلايا وسوrvival 4-6، وهذه المقايسات ليست مفيدة لاستجواب آثار إشارة الخلية على مورفولوجيا الخلايا. تلطيخ مناعي (IF) هو تقنية مفيدة للتحقيق في آثار العلاجات المستهدفة على الخصائص المورفولوجية، والنمو، والبقاء على قيد الحياة من الخلايا والبروتينات التي ينطوي عليها. مختبرنا تكيفت هذه الطرق نحو خطوط BE خلية خلد، وذلك باستخدام IF لتقييم آثار المخدرات المتوفرة سريريا على خطوط الخلايا BE أملا في ترسيم ممكن علاج chemopreventative والعلامات البيولوجية لعلاج المخدرات 7. وبالمثل، وتطبيق هذه التقنيات في مجموعة شرق افريقيا، وتكون خطوط الخلايا خلد المريء وقد حددت نتائج حاسمة بشأن BE لEAC تطور 8-10. نجد IF تحليل الخلايا BE تعامل مع العلاجات المستهدفة لها قيمة، مما يسمح لتوصيف التغيرات في بنية الخلية والترجمة البروتين. هنا، نقدم طرقنا لIF من الخلايا BE مخلد إلى جharacterize العلاج من تعاطي المخدرات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. صيانة الخط الخليوي
- BE الإنسان خلد خلل التنسج عالية الجودة (CP-B، CP-C، CP-D) وحؤولي (CP-A) من قبل خطوط الخلايا ترنسفكأيشن مستقرة من تيلوميراز الإنسان الناسخ (TERT) بروتين 11 عكس.
- الحفاظ BE خطوط الخلايا القرنية في وسائل الإعلام تستكمل مع استخراج الغدة النخامية البقري (BPE)، عامل نمو البشرة (صندوق تعديل العولمة الأوروبي)، و 5٪ مصل بقري جنيني (FBS)، والأحماض الأمينية غير الأساسية (NEAA)، البنسلين الستربتوميسين، النيوميسين (PSN)، ومعيار شروط زراعة الأنسجة (37 درجة مئوية، 5٪ CO 2، 98٪ الرطوبة).
2. BE الخليوي تصفيح
- إعداد 12 جيدا لوحة / coverslips. وضع 18 ملم coverslips في كوب طبق بتري والأوتوكلاف. نقل تعقيمها 18 coverslips الزجاج ملم إلى 12 طبق جيدا زراعة الأنسجة باستخدام ماصة زجاجية معقمة تعلق على أنبوب فراغ. غسل ساترة مع برنامج تلفزيوني العقيمة وسائل الإعلام.
- يعرض للتريبسين عد الخلايا وBE خلد. عد الخلايا باليودنانوغرام عداد الخلايا الآلي أو عدادة الكريات. تمييع الخلايا في وسائل الإعلام والثقافة إلى تركيز 20،000-40،000 خلية / مل.
- وضع 1 مل من الخلايا في كل بئر يحتوي على ساترة لعدد خلايا مجموعه 20،000-40،000 خلايا / جيد.
- استخدام غيض ماصة معقمة لدفع بلطف ساترة إلى قاع البئر لضمان أن الخلايا نعلق على ساترة.
3. معالجة المخدرات من خلايا BE
- تمييع المخدرات مختارة في الحارة (37 درجة مئوية) وسائل الإعلام إلى التركيز المطلوب وتخلط جيدا بواسطة قلب الأنبوب بشكل متكرر أو باستخدام خلاط دوامة. تركيزات المخدرات تحدد تجريبيا. بدء العلاج 24 ساعة بعد البذر الأولي للخلايا BE للسماح للخلايا المرفقات إلى ساترة
- للمقارنة والسيطرة، وعلاج ساترة إضافية للخلايا يكون مع السيارة 0.1٪ (ثنائي ميثيل سلفوكسيد [دمس]] أو وكيل تستخدم لذوبان مركب) المخفف في وسائل الإعلام والثقافة. لوحة التسمية مع قلم المختبر لتحديد المخدرات وهاءhicle تعامل العينات. وضع الخلايا في خلية ثقافة حاضنة تعيين إلى 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2، 98٪ الرطوبة واحتضان للحصول على نقاط الوقت المطلوب.
4. مناعي تلطيخ
- تثبيت
- بعد فترة حضانة المطلوب من العلاج من تعاطي المخدرات، ونضح وسائل الإعلام وغسل coverslips بسرعة مع الفوسفات مخزنة المالحة 1X (PBS) في درجة حرارة الغرفة (RT، 25 ° C).
- نضح في برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 4٪ PFA [4٪ PFA / PBS] إلى كل بئر واحتضان على RT لمدة 30 دقيقة.
- نضح PFA 4٪ / برنامج تلفزيوني وغسل coverslips 3X، 5 دقائق مع كل برنامج تلفزيوني في RT. متجر coverslips لمدة أسبوع واحد في PBS/0.1٪ PFA في 4 درجات مئوية اذا شئت.
- Permeabilization / الحظر
Permeabilize الخلايا PFA الثابتة للسماح للالضد للوصول إلى أهداف داخل الخلايا. لخارج الخلية ظهرت البروتينات، تنفيذ جميع الخطوات اللاحقة دون SAPONIN تضاف إلى الحل BSA 1X PBS/0.5٪.- خفض الخلفية التي يحتضنها مع 50 ملي NH 4 الكلورين المخفف في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في RT ويغسل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني RT لمدة 5 دقائق.
- احتضان BE الخلايا لمدة 30 دقيقة في 100-300 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.1٪ و 0.5٪ سابونين ألبومين المصل البقري (BSA). تمييع سابونين من المخزون فلتر تعقيم 10٪، أعدت في المياه وتخزينها في 4 درجات مئوية.
- إعداد غرفة الإنسان
- إعداد طبق الأحيائي مربع بحلول طبقات الجزء السفلي من الغرفة مع مناشف ورقية مبللة ووضع طبقة من parafilm على القمة.
- نقل بلطف لل coverslips، والخلايا التي تواجه التصاعدي، على Parafilm باستخدام ملقط وإبرة الحقنة.
- بمناسبة Parafilm بالقلم المختبر لتحديد coverslips.
- الأجسام المضادة الأولية الحضانة
- تمييع الأجسام المضادة الأولية في برنامج تلفزيوني تحتوي على كل BSA 0.5٪ و 0.1٪ سابونين.
- وصمة عار بلطف من عرقلة الحل باستخدام الأنسجة المختبرات وإضافة 100 ميكرولتر من الحل الأجسام المضادة الأولية. احتضان الأجسام المضادة الأولية على خلايا BE بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
- الأجسام المضادة الثانوية الحضانة
- تغسل الشرائح 3x أخرى مع PBS/0.5٪ BSA/0.1٪ سابونين لمدة 5 دقائق كل في RT.
- تمييع الضد الثانوية مترافق مع علامة فلوري في PBS/0.5٪ BSA/0.1٪ سابونين أن الأجسام المضادة الثانوية يعترف الأنواع التي تم رفع الأجسام المضادة الأولية.
- إضافة 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة المخفف إلى كل ساترة. احتضان الضد الثانوية لمدة 2 ساعة على RT.
- الغسيل وتركيب Coverslips
- غسل coverslips 3X، 5 دقائق في كل من PBS/0.5٪ BSA/0.1٪ سابونين. إزالة غسل العازلة وإضافة 100-300 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني للل coverslips.
ملاحظة: للحصول على ضعف المضادةتلطيخ الجسم، كرر الخطوات من 4،4-4،5 مع الأجسام المضادة الأولية والثانوية إضافية المطلوب وفقا للمعلومات الواردة في المناقشة. - باستخدام ملقط، ترفع بلطف صعودا ساترة وصمة عار قبالة PBS باستخدام الأنسجة المختبر أو منشفة ورقية.
- إضافة 15 ميكرولتر من وسائل الاعلام مكافحة تتلاشى تصاعد مناسبة تحتوي على 4 '،6-diamidino-2-phenylindole (دابي) إلى ساترة وعكس ساترة، وخلايا أسفل، على شريحة المجهر والزجاج.
- وضع الشرائح في مجلد واحتضان الشريحة بعيدا عن الضوء المباشر بين عشية وضحاها في RT للسماح للتعيين من الصعب مكافحة تتلاشى المتوسطة لعلاج، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. مرة واحدة وقد وضعت وسيلة مكافحة تتلاشى، والشرائح يمكن تخزينها إما في 4 درجة مئوية أو -20 درجة مئوية حتى التصور المجهرية.
- غسل coverslips 3X، 5 دقائق في كل من PBS/0.5٪ BSA/0.1٪ سابونين. إزالة غسل العازلة وإضافة 100-300 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني للل coverslips.
5. التصور المجهري Coverslips
الخلايا الملون يمكن تصويرها إما عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر أو IF microscop تستقيم قادرةه. على الرغم من أن الفحص المجهري متحد البؤر توفر صورا عالية الدقة في أعماق منفصلة، وهي مجهرية تستقيم قادر على انتاج الصور مفيدة بشكل أسرع. للإيجاز، طريقة التصوير الملون BE الخلايا باستخدام المجهر القياسية يرد. بشكل عام، لصورة فلوريسئين ثيوسيانات (FITC) أو fluorophores مماثلة (أي بروتين الفلورية الخضراء)، تكساس الأحمر ودابي، يتطلب المجهر مع مرشحات قادرة على تمييز هذه fluorophores. تحقق المجهر قبل البدء بروتوكول لتحديد fluorophores متوافق.
- التصوير على IF مجهر قياسي
- إزالة تخزين الشرائح / coverslips من -20 درجة مئوية أو 4 درجات مئوية، والسماح لهم لتسخين إلى درجة حرارة الغرفة. الطاقة على المجهر ومصباح قوس الزئبق.
- وضع شريحة المجهر مع ساترة تواجه نحو الهدف على المسرح المجهر. لاستخدام هدفا الغمر النفط، إضافة قطرة من زيت الغمر على ساترة.
- حدد مرشح دابي وفتح مصراع. التركيز على الهدف في حين يبحث من خلال العدسات حتى تظهر الصورة. لأن جميع الخلايا وصمة عار مع دابي، ينبغي أن يكون نواة يمكن ملاحظتها بسهولة.
- جمع الصور باستخدام برامج معالجة الصور منها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويتضح مثال للنتائج التي تم الحصول عليها من تطبيق الإجراءات الموضحة في أرقام 1A-D. وعولج Coverslips مع CP-D وCP-C BE الخلايا لمدة 24 ساعة مع 1 ميكرومتر من SRC المانع الأسرة، SKI-606، أو مركبة (DMSO) والملون باستخدام الإجراءات المذكورة أعلاه لالملتصقة مفرق وإشارات Wnt البروتين، β -catenin. وقد تحقق التصور β-catenin قبل وضع العلامات مع مفتش المضادة للأرنب جانب إلى fluorophore الخضراء، في حين تم انجازه وسم نواة الخلية من خلال وضع العلامات مع دابي (الأزرق). وقد شنت Coverslips إلى المجهر الشرائح باستخدام مجموعة من الصعب التركيب و تم تصوير الخلايا باستخدام المجهر متحد البؤر المسح الضوئي ليزر باستخدام الهدف خطة لامزيغ 63X/1.4N. كان متحمس fluorophore الخضراء اختار في 488 نانومتر، وتصور باستخدام عامل تصفية الانبعاثات في 505-525 نانومتر. وبالمثل، كان متحمس دابي في 405 نانومتر، والانبعاثات التي تم جمعها باستخدام فلتر في 410-460 نانومتر. نشاط كيناز التيروزين، SRC طزيادة ثانية في BE، خاصة في ارتفاع درجة النمو الشاذ 12. في التوافق مع الملاحظات في القولون والمستقيم والبروستاتا الخلايا السرطانية 13-15، وتثبيط SRC النتائج في إعادة المركزية من β-catenin من السيتوبلازم / نواة (الأسهم، أرقام 1A، 1C، و1E) إلى غشاء الخلية (النصال، أرقام 1B، 1D، و1F). باستخدام هذه التقنيات، ونحن وآخرون أظهرت في وقت سابق ان تثبيط SRC أيضا يغير التعبير وتوطين القامع الورم، P27 kip1 7،16 وتستخدم حاليا هذه الأساليب داخل مختبرنا.
μ
الشكل 1. IF الخلايا سيخلد بعد العلاج مع مثبط لكيناز SRC. CP-C (م) وCP-D (E، F) عولجوا السيارة (DMSO، لوحات اليسار) أو 1 ميكرومتر من مثبطات SRC، SKI-606، لمدة 24 ساعة (لوحات اليمين). تم إصلاح الخلايا وتكون ملطخة وفقا للبروتوكول وصفها. وقد تصور β-catenin (الخضراء) باستخدام الأجسام المضادة المحددة والأجسام المضادة الثانوية إلى جانب لترتيب Fluro 488، في حين كانت ملطخة نواة مع دابي (الأزرق). لاحظ التغيير في التعريب لβ-catenin من النواة (سهام) إلى غشاء الخلية (السهام) بعد العلاج مع SKI-606. C، D) وصور مكبرة من المربعات البيضاء في ألف وباء، مزيد من تسليط الضوء على التغيرات في β- catenin التعريب. هذه الصور تمثل تلطيخ مثالية مع الحد الأدنى من الخلفية وتلطيخ متميزة للهدف الذي تم اختياره. الحانات، 7 ميكرون (A، B، D، F)، و 0.5 ميكرومتر (C، D).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد أوجزنا طريقة لتطبيق IF الخلايا BE نحو توضيح الآثار الفسيولوجية للالعلاجات المستهدفة على هذه الخلايا. في حين وصفناها استخدام هذه الإجراءات نحو الخلايا BE، وجدنا أن هذه الأساليب تنطبق أيضا على مجموعة متنوعة من أنواع مختلفة من الخلايا 13،17،18. علاوة على ذلك، يمكن تغيير هذه الإجراءات في عدة طرق لتحسين تلطيخ لأهداف محددة.
نجد معلمة واحدة يكون له أثر مباشر على IF السليم هو الخيار التثبيت. وصفناها استخدام PFA 4٪ / برنامج تلفزيوني لمدة التثبيت في الإجراءات المذكورة أعلاه ولكن مثبتات البديلة هي أيضا قابلة للتطبيق. التثبيت مع الميثانول الباردة (-20 درجة مئوية) لمدة 20 دقيقة بعد غسل مع برنامج تلفزيوني هو مناسبة لبروتينات معينة / 13 الأجسام المضادة. استخدام الميثانول البارد لتثبيت ينفي الحاجة إلى permeabilize الخلايا. ومع ذلك، فإن اختيار تثبيتي (4٪ PFA / برنامج تلفزيوني أو الميثانول الباردة) يجب أن تحدد تجريبيا. وصف الإجراءات المذكورة أعلاه التصور من بروتين واحد؛ ولكن هذه الطريقة غير قابلة للتكيف بسهولة إلى تحديد 13 هدفا إضافية. لأفضل IF من اثنين من البروتينات، الأجسام المضادة الأولية التي أثيرت في اثنين من الأنواع المختلفة (على سبيل المثال، واحدة أثيرت في أرنب واحد في الماوس)، والأجسام المضادة الثانوية الاعتراف تحديدا كل الأنواع، بالإضافة إلى fluorophores مختلفة، ضرورية. الأجسام المضادة الثانوية إلى جانب لfluorophores الأخضر والأحمر، جنبا إلى جنب مع دابي توفير تباين ممتازة بين الأهداف، بالإضافة إلى تجنب عموما تدخل من fluorophores متعددة. لIF من هدفين في الخلايا BE، نفذ الحضانة متتابعة اثنين من الأجسام المضادة الابتدائية والثانوية لكل منهما بعد التثبيت. خطوات لغسيل وتركيب الشرائح لا تزال هي نفسها.
باختصار، نحن نقدم بروتوكول بسيطة ومفيدة لIF الخلايا BE. تطبيق هذه الإجراءات يمكن أن تسفر عن المعلومات حول عمليةأيون بشأن آثار العلاج من تعاطي المخدرات، وإدخال الجينات خارج الرحم في المصالح، أو downregulation رني من الجينات في الخلايا التي تهم BE.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من شارع مؤسسة جوزيف (AJF، LJI) وجمعية الرئة الأمريكية، RG-224607-N (LJI).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CP-A (Metaplastic Cell Line) | ATCC | CRL-4027 | |
| CP-B (High-grade Dysplastic Cell Line) | ATCC | CRL-4028 | |
| CP-C (High-grade Dysplastic Cell Line) | ATCC | CRL-4029 | |
| CP-D (High-grade Dysplastic Cell Line) | ATCC | CRL-4030 | |
| Keratinocyte-SFM (1x), Liquid | Life Technologies | 17005-042 | |
| 0.25% Trypsin-EDTA (1x), Phenol Red | Life Technologies | 25200056 | |
| Fetal Bovine Serum, Qualified, HI | Life Technologies | 10438026 | |
| PSN antibiotic mixture | Life Technologies | 15640 | |
| PBS - Phosphate-Buffered Saline | Life Technologies | 10010049 | |
| Pro-long Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies | P36931 | |
| Circular Glass Coverslip 18 mm | Fisher Scientific | 15-183-86 | |
| β-catenin Primary Antibody (Rabbit) | Cell Signaling | 9562S | |
| Alexa Fluor 488 (Goat Anti-Rabbit) | Life Technologies | A11008 | |
| 10 cm TC treated PS dish, sterile | USA Scientific | CC7682-3394 | |
| 12-well TC treated PS plate, sterile | USA Scientific | 5666-5180 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | 276855 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | |
| Ammonium chloride | Sigma-Aldrich | A9434 | |
| Saponin | Sigma-Aldrich | 47036 | |
| Bovine Serum Albumin - Fraction V | Sigma-Aldrich | 85040C | |
| SKI-606 (Bosutinib) | Selleck Chemicals | S1014 | |
| Square Bioassay Dish | Thermo Scientific | 240835 | |
| Parafilm | VWR | 82024-546 | |
| Disposable Pasteur Pipettes, Flint Glass | VWR | 14672-380 | |
| Nexcelom Mini Cell Counter | Nexcelom | ||
| Cellometer Counting Chambers | Nexcelom | CHT4-SD100-014 | |
| Zeiss Apotome microscope | Zeiss |
References
- Reid, B. J., Li, X., Galipeau, P. C., Vaughan, T. L. Barrett's oesophagus and oesophageal adenocarcinoma: time for a new synthesis. Nat. Rev. Cancer. 10, 87-101 (2010).
- Hayeck, T. J., Kong, C. Y., Spechler, S. J., Gazelle, G. S., Hur, C. The prevalence of Barrett's esophagus in the US: estimates from a simulation model confirmed by SEER data. Dis. Esophagus. 23, 451-457 (2010).
- Brown, L. M., Devesa, S. S., Chow, W. H. Incidence of adenocarcinoma of the esophagus among white Americans by sex, stage, and age. J. Natl. Cancer Inst. 100, 1184-1187 (2008).
- Konturek, P. C., Burnat, G., Hahn, E. G. Inhibition of Barret's adenocarcinoma cell growth by simvastatin: involvement of COX-2 and apoptosis-related proteins. J. Physiol. Pharmacol. 58 Suppl 3, 141-148 (2007).
- Peng, D., et al. Glutathione peroxidase 7 protects against oxidative DNA damage in oesophageal cells. Gut. 61, 1250-1260 (2012).
- Vona-Davis, L., et al. MAPK and PI3K inhibition reduces proliferation of Barrett's adenocarcinoma in vitro. Surg. Res. 127, 53-58 (2005).
- Inge, L. J., et al. a small molecule inhibitor of the Src kinase, reduces the growth and activates apoptosis in pre-neoplastic Barrett's esophagus cell lines: evidence for a noninvasive treatment of high-grade dysplasia. Thoracic Cardiovasc. Surg. 145, 531-538 (2013).
- Jovov, B., et al. Ion transport and barrier function in a telomerase-immortalized human nondysplastic, Barrett's cell line (BAR-T). Dis. Esophagus. 22, 386-395 (2009).
- Merlo, L. M., Kosoff, R. E., Gardiner, K. L., Maley, C. C. An in vitro co-culture model of esophageal cells identifies ascorbic acid as a modulator of cell competition. BMC Cancer. 11, 461 (2011).
- Zhang, H. Y., Hormi-Carver, K., Zhang, X., Spechler, S. J., Souza, R. F. In benign Barrett's epithelial cells, acid exposure generates reactive oxygen species that cause DNA double-strand breaks. Cancer Res. 69, 9083-9089 (2009).
- Palanca-Wessels, M. C. A., et al. Extended lifespan of Barrett's esophagus epithelium transduced with the human telomerase catalytic subunit: a useful in vitro model. Carcinogenesis. 24, 1183-1190 (2003).
- Kumble, S., Omary, M. B., Cartwright, C. A., Triadafilopoulos, G. Src activation in malignant and premalignant epithelia of Barrett's esophagus. Gastroenterology. 112, 348-356 (1997).
- Inge, L. J., et al. alpha-Catenin overrides Src-dependent activation of beta-catenin oncogenic signaling. Mol. Cancer Ther. 7, 1386-1397 (2008).
- Coluccia, A. M. L., et al. SKI-606 Decreases Growth and Motility of Colorectal Cancer Cells by Preventing pp60(c-Src)-Dependent Tyrosine Phosphorylation of β-Catenin and Its Nuclear Signaling. Cancer Res. 66, 2279-2286 (2006).
- Nam, J. -S., Ino, Y., Sakamoto, M., Hirohashi, S. Src Family Kinase Inhibitor PP2 Restores the E-Cadherin/Catenin Cell Adhesion System in Human Cancer Cells and Reduces Cancer Metastasis. Clin. Cancer Res. 8, 2430-2436 (2002).
- Chu, I., et al. p27 phosphorylation by Src regulates inhibition of cyclin E-Cdk2. Cell. 128, 281-294 (2007).
- Inge, L. J., et al. Soluble E-cadherin promotes cell survival by activating epidermal growth factor receptor. Exp. Res. 317, 838-848 (2011).
- Gan, Y., et al. Differential roles of ERK and Akt pathways in regulation of EGFR-mediated signaling and motility in prostate cancer cells. Oncogene. 29, 4947-4958 (2010).
