Las larvas de pez cebra están adaptadas para alimentarse de zooplancton. Es posible capitalizar esta característica natural en el laboratorio cultivando peces que se alimentan primero juntos en el mismo sistema con rotíferos vivos de agua salada. Esta estrategia de "policultivo" promueve un alto crecimiento y supervivencia con un mínimo de trabajo y perturbación para las larvas.
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Artículo de método
La completa y actualizada "rotífero policultivo Método" para la educación de primer pez cebra Alimentación
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Resumen
Resumen
El pez cebra (Danio rerio) es un organismo modelo de creciente importancia en muchos campos de la ciencia. Uno de los aspectos técnicos más exigentes del cultivo de esta especie en el laboratorio es la cría de larvas de primera alimentación hasta la etapa juvenil con altas tasas de crecimiento y supervivencia. El desafío central de la gestión de este período de desarrollo gira en torno a la entrega de alimentos altamente nutritivos a los peces de manera casi continua sin comprometer la calidad del agua. Debido a que las larvas de pez cebra están bien adaptadas para alimentarse de pequeño zooplancton en la columna de agua, las presas vivas como los rotíferos braquiónidos, Artemia y Paramecium son ampliamente reconocidas como los alimentos de elección, al menos hasta que los peces alcanzan la etapa juvenil y pueden alimentarse de manera eficiente con dietas procesadas. Este protocolo describe un método mediante el cual las larvas de pez cebra recién eclosionadas se cultivan junto con rotíferos vivos de agua salada (Brachionus plicatilis) en el mismo sistema. Este enfoque de policultivo proporciona a los peces una fuente de alimento vivo rico en nutrientes "a demanda" sin producir desechos químicos a niveles que de otro modo limitarían el rendimiento. Es importante destacar que, debido a que el sistema aprovecha tanto la alta productividad natural de los rotíferos como las preferencias de comportamiento de los peces, la mano de obra involucrada con el mantenimiento es baja. El siguiente protocolo detalla un procedimiento actualizado, paso a paso, que incorpora la producción de rotíferos (escalable a cualquier nivel deseado) para su uso en un policultivo de larvas de pez cebra y rotíferos que promueve el rendimiento máximo durante los primeros 5 días de alimentación exógena.
Introducción
El pez cebra (Danio rerio) es un animal de laboratorio por excelencia utilizado en un número cada vez mayor de las disciplinas científicas, incluyendo pero no limitado a la genética del desarrollo, la toxicología, la conducta, la acuicultura, biología regenerativa, y el modelado de muchos trastornos humanos 1 - 5. Aunque la especie es relativamente fácil de mantener en el laboratorio, hay una serie de retos de gestión asociados con su cultura 6. El más destacado de ellos es la cría de larvas, particularmente cuando primero los peces comienzan a alimentarse con posterioridad a la inflación de la vejiga de gas 7....
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Protocolo
1. rotífero Cultura
- Componentes básicos de un sistema de cultivo utilizando un recipiente de 100 L de Cultura
- Reúna todos los componentes para la configuración de cultivo de rotíferos. La configuración de cultivo de rotíferos consiste en un recipiente de cultivo (CV) para crecer los rotíferos; un recipiente similar a mantener rotíferos feedout (recipiente de cultivo feedout, FCV); un frasco de fondo redondo de eclosión (RSS Embalse, FR) para el almacenamiento de la mezcla de alimentación algas (AFM); un suministro de aire (AS) para airear el CV, FCV y el FR; una bomba peristáltica con un temporizador de medición (PMT) para control....
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Resultados
El sistema de cultivo de rotíferos continuo descrito aquí es dinámica, y es normal que los números de rotíferos que fluctúan en una pequeña parte con el tiempo si hay variaciones en las tasas de alimentación y cosecha diarias. La población de los rotíferos en uno de los cultivos activos en las instalaciones de acuicultura en el Hospital de Niños de Boston, mantiene en la forma descrita anteriormente, fue monitoreado por 30 días (Figura 3). La densidad de cultivo media du.......
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Discusión
La implementación exitosa del método de policultivo de rotíferos para la alimentación temprana larvas de pez cebra requiere protocolos efectivos para dos tareas: la creación y mantenimiento de un sistema de cultivo de rotíferos continua para alimentar a los peces y el cultivo de primera alimentación de larvas de pez cebra junto con rotíferos en el mismo tanque.
La configuración de un sistema de producción de rotíferos agua salada continua para los laboratorios de pez cebra primero descritos .......
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Divulgaciones
CE Henry es empleado por Reed Maricultura, Inc., una empresa que ofrece rotíferos, concentrados de algas, y otros suministros a los mercados de aficionados de la acuicultura y de peces.
Agradecimientos
El cuidado y la utilización de peces generados para obtener resultados representativos descritos en este protocolo se realizó en plena conformidad con las directrices establecidas por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional del Hospital Infantil de Boston, el protocolo # 14-05-2673R.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Rotifer Culture Infrastructure | |||
| 100 L Recipiente | Aquaneering | Recipiente | cultivo de policarbonato personalizado, de fondo cónico, con válvula de drenaje |
| Kit de cubo de cultivo de 5 galones Maricultura | caña | Kit de inicio CCS Recipiente de | cultivo de pequeño volumen para instalaciones pequeñas |
| Tubo transparente rígido de 1/2" de diámetro exterior, 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Tubo rígido transparente para el suministro de aire |
| Tubo de malla | Pentair Aquatic Ecosystems | RT444X | Soporte de tubo de malla para filtro de hilo dental |
| Rotifer Floss | Reed Mariculture | Rotifer hilo dental 12" x 42" | Trampa de residuos de partículas |
| Bomba temporizadora dosificadora peristáltica, 5 GPD | Grainger | 38M003 | Bomba dosificadora con temporizador para dosificar el alimento a los rotíferos |
| Bomba dosificadora peristáltica, 1-100 mL/h (para cultivo a menor escala) | Coral Vue | SKU: IC-LQD-DSR | Bomba dosificadora con temporizador para dosificar alimento a rotíferos |
| Tubo de silicona | Tubo Cole Parmer | para la entrega de algas al recipiente rotífero | |
| Tubo transparente rígido "O.D.", 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Tubo transparente rígido para el suministro de aire a la pasta de algas |
| Tubo transparente rígido D.O., 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Tubo rígido transparente para la entrega de algas |
| Rotifers | |||
| Live Rotifers Brachionus plicatilis Tipo L | Maricultura de caña | Tipo L 5 millones | de Rotifer Crop para la puesta en marcha |
| del sistemaRotifer Feed | |||
| Hidroximetilsulfonato de sodio | Maricultura de caña | ClorAm-X® tarrina de 1 libra | Reductor de amoníaco para mezcla de alimento para algas |
| Bicarbonato de sodio | Fisher Scientific | S25533B | tampón de pH para mezcla de alimento para algas |
| Concentrado de microalgas | Reed Mariculture | Rotigrow Plus® bolsa de 1 litro | Alimento para rotíferos nutricionalmente optimizado |
| RG | Complete Reed Mariculture | RG Complete Botella de 6 oz | Alimento todo en uno a base de microalgas para cultivos a pequeña escala |
| Water Preparación | |||
| Cristales de arrecife Sal de arrecife | que colocan los peces | 198210 | Sal para hacer agua de cultivo (NOTA: este artículo es solo un ejemplo; se puede usar cualquier formulación de sal libre de contaminantes). |
| Refractómetro | Pentair Aquatic Ecosystems | SR6 | que mide la salinidad |
| Rotifer Culture Equipment | |||
| Plancton Colectores de 12" de diámetro, 53 micras | Pentair Aquatic Ecosystems | BBPC20 | Criba de malla para la recogida de rotíferos |
| Almohadillas de fregado | Pentair Aquatic Ecosystems | SCR-58 | Almohadilla para fregar para limpiar el interior de los recipientes de cultivo |
| Cepillo | |||
| Cubo | Grainger Supply | 43Y530 | Cubo graduado para mezclar agua |
| de cultivo Jarra de incubación | Pentair Aquatic Ecosystems | J30 | Almacenamiento de mezcla de alimento para algas |
| Lugol' s Solución, Diluido | Fisher Scientific | S99481 | Agente utilizado para inmovilizar rotíferos vivos para el conteo |
| de plancton Sedgewick-Rafter portaobjetos de conteo con rejilla | Pentair Aquatic Eco-Systems | M415 | Recuento de rotíferos |
| Misceláneo | |||
| 971972 | Se utiliza para recolectar embriones de pez cebra después del desove |
Referencias
- Ribas, L., Piferrer, F. The zebrafish (Danio rerio) as a model organism, with emphasis on applications for finfish aquaculture research. Reviews in Aquaculture. 6, 209-240 (2014).
- Poss, K. D. Advanc....
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Reimpresiones y permisos
