Artículo de método

Intra-ilíaca Arteria inyección de Modelamiento eficiente y selectiva de microscópico metástasis en los huesos

DOI:

10.3791/53982

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26 de septiembre de 2016

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1Lester and Sue Smith Breast Center, Baylor College of Medicine, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine, 3Graduate Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine, 4Department of Molecular and Human Genetics, Baylor College of Medicine, 5McNair Medical Institute, Baylor College of Medicine, 6Dan L. Duncan Cancer Center, Baylor College of Medicine

En este artículo

Resumen

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Este manuscrito proporciona el procedimiento detallado de la inyección de la arteria ilíaca (IIA), una técnica para administrar células cancerosas específicamente a los tejidos de las extremidades posteriores, incluidos los huesos, para establecer metástasis óseas experimentales. Aunque inicialmente se estableció con modelos de tumores de mama, este protocolo puede extenderse fácilmente a otros tipos de cáncer.

Resumen

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La inyección intra-ilíaca (AII) es un enfoque eficiente para introducir lesiones metastásicas de diversas células cancerosas en animales. En comparación con las inyecciones intracardíacas e intratibiales ampliamente utilizadas, la inyección de IIA aporta varias ventajas. En primer lugar, puede administrar una gran cantidad de células cancerosas específicamente a los huesos de las extremidades traseras, proporcionando así eventos de colonización en etapa temprana sincronizados espacio-temporalmente y permitiendo una cuantificación robusta y una detección rápida de las células tumorales diseminadas. En segundo lugar, inyecta células cancerosas en la circulación sin dañar los tejidos locales, evitando así los procesos inflamatorios y de cicatrización de heridas que confunden el proceso de colonización ósea. En tercer lugar, la inyección de IIA causa muy poco crecimiento metastásico en los órganos no óseos, lo que evita que los animales sucumban a otras metástasis vitales y permite la monitorización continua de las lesiones óseas indolentes. Estas ventajas son especialmente útiles para la inspección de la progresión de células cancerosas individuales a micrometástasis multicelulares, que ha sido en gran medida difícil de alcanzar en el pasado. Cuando se combina con enfoques de vanguardia de imágenes biológicas e histología ósea, la inyección de IIA se puede aplicar a diversos fines de investigación relacionados con las metástasis óseas.

Introducción

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Metástasis representan más del 90% de las muertes causadas por tumores sólidos. El hueso es el órgano más frecuentemente afectado por la metástasis de varios tipos de cáncer, especialmente de mama y de próstata. Cuando se diagnostica en la clínica, las metástasis óseas por lo general ya han entrado en etapas avanzadas, ya sea con o osteolíticas osteoblásticas alteraciones en el hueso, a menudo acompañadas con síntomas neurológicos.

Los estudios anteriores se centraron principalmente en las metástasis óseas osteolíticas abiertas 1-3, sin embargo, actualmente hemos comprensión de micrometástasis en los huesos limitado antes de la....

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Protocolo

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Todo el trabajo de los animales se realizó de acuerdo a las directrices del cuidado de animales de la Facultad de Medicina Baylor.

1. Preparación de la célula

Nota: Las diferentes líneas celulares de cáncer se pueden utilizar para la inyección IIA dependiendo de los propósitos de investigación. Hemos utilizado líneas celulares de cáncer de mama MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 y línea celular de cáncer de próstata C4-2 en nuestra investigación. Utilizamos típicamente tanto las buenas prácticas agrarias y las células de cáncer de luciferasa de luciérnaga marcado para nuestro estudio y mostramos....

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Resultados

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La Figura 1 ilustra la localización anatómica y la relación de la arteria ilíaca común (rojo) y la vena (azul).

La figura 2 muestra la posición relativa de los vasos ilíacos y nervios en el microscopio de disección. Como se representa en la figura 2A, los vasos y los nervios están justo debajo de la pared peritoneal y pueden ser reveladas después de la incisión de la piel se h.......

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Discusión

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Aunque sólo la arteria ilíaca es el objetivo de la inyección de las células cancerosas, se recomienda la separación de ambos vena iliaca y la arteria de los tejidos circundantes, y para levantarlos juntos como un paquete. Esto se debe a la vena y la arteria ampliamente contacto entre sí, y la pared del vaso venoso es delgada y es fácil de romper. Por lo tanto, para que una inyección de éxito, que ahorra tiempo y esfuerzo para sostener los dos vasos juntos, aunque se inyectan células cancerosas sólo a la arteria. Una sut.......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

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La investigación en el laboratorio de Zhang fue apoyada por X. H.-F. Z. NCI CA151293, CA183878, Fundación para la Investigación del Cáncer de Mama, Departamento de Defensa de los Estados Unidos DAMD W81XWH-13-1-0195, un Premio Piloto de CA149196-04, Instituto Médico McNair y por el Departamento de Defensa de los Estados Unidos de H.W. DAMD W81XWH-13-1-0296.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Materials
DMEMHyCloneSH30022.01
FBSGibco16000
Pen/Estreptococo Anvatirina BLonza Biowhittaker17-745E
PBSLonza Biowhittaker17-516F
Solución de tripsina/EDTAHyCloneSH30042.01
45 y mu; Filtro de células MVWR International Laboratory195-2545
MediGel CPF con carprofeno Artículo controlado de la atención veterinaria en BCMPara el manejo del dolor
Buprenorfina  Artículo controlado de la atención veterinaria en BCMPara el manejo del dolor
Pellet de estradiolInvestigación innovadora de AméricaSE-121
Ketamina y xilacinaArtículo controlado de la atención veterinaria en BCM
Ungüento veterinarioArtículo controlado de la atención veterinaria en BCMEvite la sequedad de los ojos
AfeitadoraOster78005-050Para ratones peludos
etanol isopropílicoACROS67-63-0
Betadine exfoliante quirúrgicoArtículo controlado de atención veterinaria en hojas de
#10Ted Pella, Inc549-3CS-10Mango
múltiple n.º 3Ted Pella, Inc541-31Necesita ser esterilizado en autoclave
Paño quirúrgico estérilde infusiónSaiPSS-SD1
Pinzas rectas Instrumento quirúrgico RobozRS-5132Necesita ser esterilizado en autoclave
Pinzas finas rectasFine Science Tools11253-20Necesita ser esterilizado en autoclave
Pinzas finas con bordesFine Science Tools11253-25Necesita ser esterilizado en autoclave
4-0 Sutura de seda VicrylJohnson & Johnson Health CareJ214H
31 G jeringas de insulinaBD328418Hisopos múltiples
algodón con hisopos (estériles)VWR International Laboratory89031-272
Pegamento para la pielHenry Schein Animal Health31477Para el cierre de la piel en el lugar de la cirugía
Aplicador de crotalesFine Science Tools24220-00
CrotalesFine Science Tools24220-50
D-luciferinaGold BiotechnologyLUCKEvite la luz y ponga en hielo
Jeringas de insulina de 28 gBD329410Para inyección intraorbital
ParaformadehídoAlfa Aesar30525-89-4Para la fijación de tejidos
EDTAOmniPur4050Para la decalcificación de tejido óseo
< strong>NameCompanyNúmero de catálogoComentarios
Equipo
Dissection MicroscopioLeica Leica S6E estéreo
IVIS Lumina IIVisión
Molecular AvanzadaNameCompanyNúmero de catálogoComentarios
>Anticuerpos
Anticuerpos anti-GFP (JL-8)Clontech632381
Anticuerpos anti-ALPAbcamab108337
Anti-Osterix anticuerposAbcamab22552
bisturí BCM Tecnología de Sistema de imagen

Referencias

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  1. Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
  2. Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometa....

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