Introduction
Metastaser står för mer än 90% av dödsfall orsakade av solida tumörer. Ben är den vanligaste organet påverkas av metastaser av olika cancertyper, i synnerhet bröst- och prostatacancer. När diagnosen på kliniken, benmetastaser vanligtvis har redan skrivit ett långt framskridet skede med antingen osteolytiska eller osteoblastiska förändringar i ben, ofta tillsammans med neurologiska symtom.
Tidigare studier främst fokuserat på uppenbara osteolytiska benmetastaser 1-3, men vi för närvarande har begränsad förståelse för mikrometastaser i ben innan starten av osteolytiska processen. Detta beror åtminstone delvis på grund av brist på lämpliga experimentella modeller och metoder. Genetiskt modifierade musmodeller av bröstcancer metastaserar ofta lungorna, men mycket mindre effektivt ben 4. På samma sätt ortotopiskt transplanterade tumörer sällan utvecklar spontana benmetastaser, med några ben tropiska 4T1 bröst carcinomen sub-kloner och MSP uttryckt pymt transgen musmodell som undantag 5-7. Intra-skenbens borrning kan leverera cancerceller till benet 8-10, men det medför också skador och inflammation lokala vävnader. För närvarande Intrakardiella injektion av bröstcancercellinjer har varit den viktigaste metod för att undersöka ben kolonisering 11-13. Emellertid, efter cancerceller införs i vänster kammare endast en begränsad del kommer slutligen nå ben och benmärg, vilket gör det svårt att spåra mikroskopiska metastaser i en kvantifierbar mode.
I denna studie har vi etablera en teknik, nämligen intra-höftartär (IIA) injektion 14, för att selektivt leverera cancerceller in i bakbensvävnad, vilket berikar cancerceller i ben och benmärg utan att orsaka skada på lokala vävnader. På grund av benet specificitet, detta tillvägagångssätt gör också tillräckligt med tid för indolenta cancerceller för att så småningom kolonisera innan enDJUR vika för primära tumörer eller metastaser i andra vitala organ. I kombination med en mängd andra tekniker, såsom mareld avbildning, immunofluorescensfärgning och benhistomorfometri, är potentiellt användbara för ett brett spektrum av forskningsändamål i samband med skelettmetastaser IIA injektion, särskilt för att spåra utvecklingen från enstaka cancerceller till multi-cell mikrometastaser. I synnerhet, visade vi att IIA injektion gör att vi kan visualisera samspelet mellan cancerceller och olika typer av omgivande celler i benet mikromiljö.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur arbete gjordes i enlighet med riktlinjerna för djurskötsel i Baylor College of Medicine.
1. Cellberedning
Obs: Olika cancercellinjer kan användas för IIA injektion beroende på forskningsändamål. Vi har använt bröstcancercellinjer MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 och prostatacancer-cellinjen C4-2 i vår forskning. Vi använder vanligtvis både GFP- och eldflugeluciferas-märkta cancerceller för vår studie och visar vissa uppgifter här från GFP-luciferas-märkt MCF7 cellinje.
- Upprätthålla celler i DMEM innehållande 10% FBS och 0,1 mg / ml penicillin-streptomycin vid 37 ° C i 5% CO2.
- Innan IIA injektion trypsinize celler vid 80-90% sammanflödet med 0,25% trypsin / EDTA-lösning. Använda kall PBS för att tvätta cellerna två gånger, och återsuspendera celler i 10 ml PBS för cellräkning. För att ta bort PBS, centrifugera celler vid 800 xg under 5 min.
- Återsuspendera cellervid en koncentration av 5 x 10 6 celler / ml i iskall PBS.
- Använd 100 pl GFP- och eldflugeluciferas-märkta cancerceller för IIA injektion av en mus.
Notera:. Därför är 5 x 10 5 antalet celler som tas emot av varje djur kan Detta nummer behöva ändras baserat på aggressiviteten hos cellinjer. - Håll cellsuspensioner på is.
Note: Vibrationer kan behövas för att förhindra cellaggregation varje några minuter tills den är färdig för injektion. För vissa cellinjer (såsom MDA-MB-231), kan strängare förfaranden (t.ex., som passerar genom 45 | im cellfilter) att krävas för att förhindra aggregation. Observera att täppa fartyg kan orsaka vävnadsnekros, och därför confounding experimenten.
2. Animal Förberedelse
- För djur smärtlindring, ge 5 mg / kg / dag karprofen (eller annan smärtstillande medel) med kosttillskott till mössen inte mindre än 24 timmar före operation. Administreraen dos av 0,1 mg / ml buprenorfin subkutant 60 minuter före det kirurgiska ingreppet. Obs: ett frivilligt förfarande är att implantera östradiol pallen på baksidan av djur för att ge extra estradiol. Detta kommer att påskynda växa av ER + cancerceller (t.ex. MCF-7-celler) 9.
- Söva en 4-6 veckor gamla mus (approximativt 20 g) med ketamin (80 till 100 mg / kg) och xylazin (10 -12,5 mg / ml) genom intraperitoneal injektion.
- Bekräfta lämplig nivå av sedering av en 20 g mus av tå nypa och observation av en minskning av andningsfrekvensen 50% och rosa slemhinnor (t.ex. mus öra hud och tass hud). Fortsätta att övervaka dessa vitala varje 15 min under operationen. Notera: Ingen rörelse av djuret anger att djuret är tillräckligt bedövad och redo för operation.
- Använd veterinär salva på ögonen för att förhindra torrhet.
- Raka musen på nedre delen av buken, särskilt höger ljumske område där kirurgi och injektionäga rum.
Obs: Detta är inte nödvändigt om atymiska nakna möss används. - Placera musen på rygg, sprider benen i deras naturliga positioner och hålla tårna till mobil dissektion kartong med tejp.
- Torka höger ljumske område med 70% isopropyl etanol indränkt sterila bomullspinnar, följt med Betadine kirurgiska skrubba flera gånger.
3. Den gemensamma höftvenen och Artery Plats och Separation
- Gör en hud snitt av 1,0 - 1,2 cm lång mellan den 4: e och 5: e bröstvårtor i nedre högra delen av buken med hjälp av sterila, # 10 kolstål skalpellblad som hålls i ett handtag nr 3. Använd sedan en steril kirurgisk duk för att täcka djurkroppen utom snittstället.
- Flytta djuret till standard bänk dissektionsmikroskop. Använd en förstoring av 4X för injektion.
- Under 4X förstoring av dissektion mikroskop, sätta trubbiga separations pincett mellan fettvävnad och peritoneum, och tryck vävnaderna utåt på båda sidor för att exponera höft kärl och nerver (se figur 1).
Anmärkning: artären mellan aorta från mittlinjen och den nedre delen av artären grenar kallas gemensamma höftartären. Det är där injektionen äger rum. - Använd ett par raka fin pincett för att bryta igenom den bindväv (som ett membran) mellan fartyg och nerven, närmare fartygen.
- Byta raka fin pincett till vänster. Ta ett par vinklade fin pincett med hjälp av höger hand. Sätt i högra tången i samma position där bindväv har brutits. Och sedan hålla den högra pincett genom, under kärlen.
- Samtidigt sätter de vänstra pincett in i bindväv på vänster sida av fartygen för att styra de högra tången går igenom.
- När högra tången blir under kärlen, försök att separera fartyg från den omgivande tissue lite mer, och sedan hålla dem ovanpå högra pincett.
- Använd vänster pincett för att leverera spetsen av en 4-0 silke sutur till höger pincett, och dra sedan suturen försiktigt och långsamt genom under kärlen. Obs: Nu både vanliga ven och artär fartyg lyfts upp av suturen (se figur 2).
4. Injektion och efter injektion Care
- Förbered celler för injektion i en insulinspruta 31 G. Använd 100 pl cellsuspension i PBS per injektion. Se till att pipetteringen upp och ned flera gånger för att separera cellerna och undvika aggregering, så att de injicerade cellerna inte kommer att täppa och blockera blodflödet.
- Med vinklade pincett i vänster hand, sätta pincett under kärlen längs ledning av suturen, och sedan öppna två grenar tången, har kärlen hölls försiktigt på tången.
Obs: Intervallet mellan de två grenarna av tången kommer att vara injection webbplats. - Håll 31 G nål med 100 ul cellsuspensioner i höger hand, med avfasning av nålen uppåt, redo för injektion.
- Stick in nålen i artären lumen (blod kommer in i nålspetsen). Tryck sedan cellsuspensionen långsamt att injicera cellerna. Cellsuspensionen kommer att driva bort det röda blodet i kärlet. Försök att inte bryta fartyg eller läcka cellsuspensionen ut.
- När injektionen är klar, försiktigt dra tillbaka nålen och fortsätter att hålla kärlen upp på vänster pincett för att stoppa blödning. Dra sedan bort suturen.
- Dra bort den vänstra pincett och snabbt använda en bomullspinne för att trycka på artären snitt området för att stoppa blödning.
Notera: vanligtvis 5 - 10 min kontinuerligt tryck är tillräckligt för att stoppa blödning. - När blödning slutar använda hud lim för att stänga kanterna av kirurgi hudområde. Gör ett öronmärke, och kontrollera om bioluminiscens signalerar att undersöka fördelningen av injicerade celler. <br /> Obs: En lyckad injektion kommer att resultera i en bild som liknar figur 3.
- Kontrollera bioluminiscens signalering genom injektion av 100 | il 15 mg / ml luciferin i PBS vid 75 mg / kg mus koncentration via intra-orbitala sinus.
- För intra-orbital injektion, sätta fingrarna på båda sidor av musen ögat, använder tryck för att göra ögongloben något hoppar ut från ögat ramen sätter 28 g insulinspruta nålar mellan ögongloben och näsa, och sedan långsamt tryck spruta för att injicera luciferin .
Obs! Vid den korrekta positionen, bör nålen kunna nå ett djup av 2 - 3 mm före slå hård vävnad (ben). - Placera musen i bildsystem för in vivo hela djuret avbildning för 10-60 sekunder inom 5 minuter (se figur 3).
Obs: Ett valfritt förfarande är att implantera östradiol pellets på baksidan av djur för att ge extra estradiol. Detta kommer att påskynda tillväxten av ER + cancerceller (t.ex. MCF-7celler) 15.
- För intra-orbital injektion, sätta fingrarna på båda sidor av musen ögat, använder tryck för att göra ögongloben något hoppar ut från ögat ramen sätter 28 g insulinspruta nålar mellan ögongloben och näsa, och sedan långsamt tryck spruta för att injicera luciferin .
- Kontrollera bioluminiscens signalering genom injektion av 100 | il 15 mg / ml luciferin i PBS vid 75 mg / kg mus koncentration via intra-orbitala sinus.
- Låt muspekaren över en värmedyna tills den vaknar. Övervaka blödning, svullnad, tecken på sårruptur och smärta under postoperativa perioden. Sätt mössen tillbaka till buren med smärtstillande täckning (carprofin kosttillskott föreslog) ges för smärtlindring tills inga tecken på smärta. Var uppmärksam och omsorg för djuren under 7 dagar efter operation.
5. Övervakning Metastatisk tillväxt
- histomorfometri:
- Harvest tumörbärande benvävnad, fixa benen i 4% paraformaldehyd under 24 timmar, sedan kalka dem i pH 7,0 14% EDTA-lösning under 3 - 5 dagar, och utsätta dem för paraffininbäddning som tidigare beskrivits 14.
- § de paraffin bädda benvävnad på tjockleken 3 um och utföra standard histologiska metod för Hematoxylin / eosin färgning som tidigare beskrivits 14.
- ImmunohistochemisProva:
- Angående paraffininbäddade tumörbärande ben glider att immunohistokemi färgning för olika ändamål som tidigare beskrivits 14. I korthet immunostain MCF7 cancerceller genom anti-GFP antikroppar och immunostain osteogena celler (pre-osteoblaster och osteoblaster) av anti-Osterix antikroppar och anti-alkaliskt fosfatas (ALP) antikroppar, respektive.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 illustrerar den anatomiska läge och förhållandet av gemensamma höftartären (röd) och ven (blå).
Figur 2 visar relativ position höftkärlen och nerverna under dissektion mikroskopi. Såsom visas i figur 2A, de kärl och nerver är precis under den peritoneala väggen och kan avslöjas efter hudsnittet görs och peritoneum trycks bort. Den gemensamma höft venen är till vänster, och är större och mörkare jämfört med artären. Artären i mitten, och ser rosa. Det är tunnare än venen men har tjockare muskelvägg. Venen och artären är parallella och nära samband med varandra. Längre till höger är den vita lumbosakrala nerv. Figur 2B visar gemensamma höft fartyg separerade från omgivande bindväv, muskler och nerver, och lyfts upp av en 4-0 silkessutur. Den gemensamma höft ven, artär, och lumbosakrala nerv indikeras också.
Figur 3 visar representativa in vivo och ex vivo bioluminescence bilder av djur efter intra-iliacaartären injektion. Fem x 10 5 GFP-luciferin-märkt MCF7-celler i 100 pl administrerades till höger bakben på musen genom intra-iliaca injektion. D-luciferin därefter administreras av intra-bana sinus injektion, följt av in vivo hela djuret mareld avbildning. De injicerade MCF7-celler anrikades på den högra bakbenet på musen såsom indikeras av de mareld signaler (figur 3a). De in vivo mareld signaler av hela djuret spårades varje 3 dagar eller varje vecka, och sedan de mus benvävnader skördades vid dag 14 efter injektion när hela djuret bioluminescens signalen nått en viss tröskel (Fotonflöde> 10 4). Efter D-luciferin administration ades benvävnad från intra-höftartären injicerade musen snabbt skördas och nedsänkt i PBS för ex vivo imaging. Den starka bioluminescens signalen från intra-höftartären injicerade högra bakre ben men inte från den vänstra styr ben visade specifik lokalisering av injicerade celler (figur 3B).
Figur 4 visar representativa bilder av histologiska och immunfluorescensfärgning. När tumörbärande benen skördades, utsattes de för paraformaldehyd fixering, EDTA urkalkning och sedan paraffin inbäddning. Tre pm ben glider framställdes och standard H & E-färgning utfördes. De kompakta kullerstensliknande celler med större kärnor var mikroskopiska MCF7 metastatiska lesioner i benvävnaden 14 dagar efter intra-iliaca injektion, såsom indikeras av de röda pilarna. Benmärg (BM) Och de stora rosa platta trabekulära ben (TB) med glesa kärnor är så märkta (Figur 4A). Figur 4B visar GFP-märkta MCF7-celler (grön), ALP-märkta osteoblaster (röd i den vänstra bilden), och Osterix-märkt pre-osteoblaster (röd i den högra bilden) efter immunofluorescerande färgning. Blue DAPI färgning indikerar kärnan.
Figur 1:. Anatomy of gemensamma höftartären (röd) och ven (blå) i mus Bukaorta, gemensamma höftartären, yttre höftartären och lårbensartären visas såsom indikeras. Injektion utförs vid gemensamma bäckenartär från aorta mot lårbensartären riktning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2:. Höft kärl och nerver enligt standard dissektionsmikroskop med 4X förstoring (a) Bild av intakta kärl och nerver. (B) Bild av lyfte fartyg. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: representant in vivo och ex vivo mareld bilder av mus efter intra-iliaca injektion. (A) In vivo bioluminescence signalen för hela djuret direkt efter injektion. (B) ex vivo bioluminescens signalav vänster styr ben och höger injicerade benet från injicerade djur som skördades 14 dagar senare. Alla mareld signaler mättes genom att följa tillverkarens rekommenderade procedur och inställningar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Representant bilder av histologiska och immunofluorescerande färgning. (A) representant H & E-färgning bild av MCF7 tumörbärande benvävnad efter intra-iliaca injektion. Skalstreck = 25 | im. Notera: HE-färgning är inte det effektivaste sättet för att detektera tumörer. I lägre förstoring, är han färgning inte tillräckligt känslig för att urskilja tumörer. I högre förstoring, är det inte effektivt att skanna alla areas. (B) immunofluorescerande färgning bilder av MCF7 tumörbärande benvävnad. Grön: GFP-märkta MCF7-celler, röd i den vänstra bilden: ALP-märkta osteoblaster, röd i den högra bilden: Osterix-märkt pre-osteoblaster. Blue DAPI färgning indikerar kärnan. Skala bar = 25 pm. Klicka god här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Även om endast höftartären är målet för injektionen för cancerceller, rekommenderar vi separationen av både höft ven och artär från omgivande vävnader, och att lyfta dem tillsammans som ett paket. Detta beror på venen och artären utför kontakt med varandra, och den venösa kärlväggen är tunn och är lätt att bryta. Därför, för en lyckad injektion, det sparar tid och ansträngning att hålla upp de två kärlen tillsammans, även cancerceller injiceras enbart till artären. En 4-0 silkessutur används för att hjälpa denna process såsom visas i figur 2. Suturen kan också hjälpa stoppa blödning om den uppstår.
De flesta stegen i IIA injektion behöver utföras under dissektion mikroskop. Musens fartyg är mjuka och små, vilket gör förfarandena utmanande. Men efter tillräcklig erfarenhet, kan framgång når 90-100% i vår erfarenhet.
Med denna teknik kan forskare vara enble att etablera ben kolonisering modeller av sina favoritcancercellmodeller, inklusive de traditionellt tänkte "icke-metastaserande". MCF-7-celler representerar ett sådant exempel. Faktum är att när man kommer i benet mikro, MCF-7-celler genomgå en kort dvala innan tar fart för att kolonisera. Mycket få spontana skelettmetastaser har upptäckts hos djur som bär orthotopic MCF-7 xenotransplantat. Emellertid kan inte väl bero på kvarvarande mängd sprids tumörceller, den långsamma inledningen av kolonisering, och mer aggressiv tillväxt av orthotopic tumörer (som dödar djur innan benskador kan fastställa). Således kan bristande upptäckt inte tas som bevis mot MCF-7-celler förmåga att metastasera. I själva verket kan indolenta eller vilande ben mikrometastaser vara vanligare hos bröstcancerpatienter mänskliga, som föreslagits av år till årtionden dvala som ofta ses i kliniken.
IIA injektion kan tillämpas inte bara på luminalen eller basalbröstcancerceller, men också till andra cancertyper såsom prostatacancer. I kombination med olika val av tekniker övervakning bensjukdom, kan intra-iliaca injektion ge ett betydande bidrag till många forskningsändamål. Vi använder ofta bioluminescens signalering att spåra skelettmetastaser progression efter intra-iliaca injektion och sedan skörda tumörbärande ben för fluorescerande immunohistokemi färgning för att definiera samverkan mellan cancerceller och omgivande ben mikronischer. Benhistomorfometri 16-17 och μCT 18-20 kan användas för att utvärdera benstomme ombyggnader och andra anatomiska detaljer ben som orsakas av ympning av cancerceller. Korrekt överväganden och kombinationer bör bestämmas av varje grupp för deras specifika forskningssyfte.
I likhet med inom skenbens 8-10 och Intrakardiella ympning 11-13, en varning av intra-iliac artär injektion är att det inte rekapitulera tidiga stegen i metastaserande process före emboli och inträde av tumörceller i cirkulationen. Helst skulle en spontan metastas process som utgår från orthotopic tumörer behövas för att helt sammanfatta den metastas kaskaden. Dock är denna process mycket ineffektiv i de flesta modeller, med endast ett fåtal undantag såsom vissa ben tropiska 4T1 subkloner 5-6 och MSP överuttryckta pymt transgen musmodell 7. Vi hoppas att IIA injektion kommer att ge nya insikter i benet kolonisering process, vilket i sin tur kan underlätta utformningen och utvecklingen av verkligt effektiva spontana benmetastaser modeller för prekliniska studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Pen/Strep Amphatericin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Trypsin/EDTA solution | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μM cell strainer | VWR International Laboratory | 195-2545 | |
| MediGel CPF with carprofen | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Buprenorphine | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Estradiol pellet | Innovative Research of America | SE-121 | |
| Ketamine and xylazine | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| Vet ointment | Controlled item from veterinary care in BCM | Avoid eye dryness | |
| Shaver | Oster | 78005-050 | For furred mice |
| Isopropyl ethanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine surgical scrub | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| #10 scalpel blades | Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Multiple |
| No. 3 handle | Ted Pella, Inc | 541-31 | Need to be autoclaved |
| Sterile surgical drape | Sai Infusion Technology | PSS-SD1 | |
| Straight forceps | Roboz Surgical Instrument | RS-5132 | Need to be autoclaved |
| Straight fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | Need to be autoclaved |
| Edged fine forceps | Fine Science Tools | 11253-25 | Need to be autoclaved |
| 4-0 Vicryl silk suture | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insuline syringes | BD | 328418 | Multiple |
| Q-tips cotton swabs (Sterile) | VWR International Laboratory | 89031-272 | |
| Skin glue | Henry Schein Animal Health | 31477 | For surgery site skin closure |
| Ear Tag Applicator | Fine Science Tools | 24220-00 | |
| Ear tags | Fine Science Tools | 24220-50 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology | LUCK | Avoid light and put on ice |
| 28 G insulin syringes | BD | 329410 | For intra-orbital injection |
| Paraformadehyde | Alfa Aesar | 30525-89-4 | For tissue fixation |
| EDTA | OmniPur | 4050 | For bone tissue decalficication |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissection microscope | Leica | Leica S6E stereo | |
| IVIS Lumina II imaging system | Advanced Molecular Vision | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies | |||
| Anti-GFP antibodies (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antibodies | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antibodies | Abcam | ab22552 |
References
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).
- Ell, B., Kang, Y.
- Kretschmann, K. L., Welm, A. L. Mouse models of breast cancer metastasis to bone. Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).
- Lelekakis, M., et al. A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone. Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).
- Rose, A. A., et al. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).
- Welm, A. L., et al. The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).
- Li, X., et al. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions. Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).
- Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice. PLoS ON. 8 (9), e68103 (2013).
- Waning, D. L., et al. Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice. Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).
- Simmons, J. K., et al.
- Werbeck, J. L., et al. Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo. Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).
- Xiang, J., et al. CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).
- Wang, H., et al. The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells. Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).
- Hoffmann, J., et al. Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer. J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).
- Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice. Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).
- Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J.
- Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease. Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).
- Simmons, J. K., et al. Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo. Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).
- Amend, S. R., et al. Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts. J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).
