Summary
Afin de comprendre la physiopathologie de la course, il est important d'utiliser des modèles fiables. Ce document décrira l'un des modèles de course les plus fréquemment utilisés chez la souris, appelé le modèle milieu occlusion de l'artère cérébrale (MCAo) (également appelé le filament intraluminal ou d'un modèle de suture) avec reperfusion.
Abstract
L'AVC est une cause majeure de décès dans le monde et continue d'être l'une des principales causes des handicaps adultes à long terme. Environ 87% des AVC sont d'origine ischémique et se produisent sur le territoire de l'artère cérébrale moyenne (MCA). Actuellement, le seul médicament Food and Drug Administration (FDA) a approuvé pour le traitement de cette maladie dévastatrice est l'activateur tissulaire du plasminogène (tPA). Cependant, le tPA a une petite fenêtre thérapeutique pour l'administration (3-6 h), et est seulement efficace dans 4% des patients qui ont effectivement le reçoivent. La recherche actuelle se concentre sur la compréhension de la physiopathologie de la course afin de trouver des cibles thérapeutiques potentielles. Ainsi, des modèles fiables sont cruciaux, et le modèle (MCAo) MCA d'occlusion (également appelés le filament ou suture modèle intraluminal) est réputé être le modèle le plus cliniquement pertinente chirurgicale d'accident vasculaire cérébral ischémique, et est assez non invasive et facilement reproductible. En général, le modèle MCAo est utilisé avec des rongeurs, en particulier avec des souris duesà toutes les variations génétiques disponibles pour cette espèce. Nous décrivons ici (et présent dans la vidéo) comment effectuer avec succès le modèle MCAo (avec reperfusion) chez la souris pour générer des données fiables et reproductibles.
Introduction
L'AVC est la cinquième cause de décès dans le monde, avec une personne mourir de la maladie toutes les 4 minutes. Plus de 800.000 Américains souffrent d'un AVC chaque année, ce qui est non seulement dévastateur pour le patient, mais aussi pour leurs familles. L' AVC est la principale cause de handicap chez les adultes et les dépenses annuelles est estimée à l'ordre de 36,5 milliards de $ 1 en dépit de très peu d' options de traitement soient disponibles.
activateur tissulaire du plasminogène (tPA) est le seul Food and Drug Administration (FDA) autorisé médicament pour accident vasculaire cérébral ischémique. Cependant, il est seulement efficace si administré à des patients dans les 3-6 heures à partir du début de la course, et dans ces cas , il ne profite qu'à 4% des patients 2. Par conséquent, il est impératif que les modèles animaux reproductibles, cliniquement pertinentes de course sont utilisés pour aider à l'élaboration de stratégies et de traitements thérapeutiques potentiels pour cette maladie. Il est important de noter que , in vitro , in vivo sont essentiels.
Le type le plus commun de l'AVC est d'origine ischémique, qui représente 87% des accidents vasculaires cérébraux totaux. D'autres traits sont une hémorragie intracérébrale (9%) et d'hémorragie sous-arachnoïdienne (4%) et sont dues le plus souvent par un emboles à l'artère cérébrale moyenne (MCA). Cela est dû à la courbe saillant à la racine du MCA, ce qui provoque le flux sanguin laminaire pénétrer dans le cerveau pour devenir perturbé. Le MCA naît de l'artère carotide interne (ICA) et les routes le long du sillon latéral, où elle se ramifie et des projets à des noyaux gris centraux et les surfaces latérales du frontal, pariétal et le lobe temporal, y compris le moteur primaire et le cortex sensoriel. Le Cercle de Willis est créé par les artères cérébrales postérieures étantrelié aux artères cérébrales et les postérieures artères communicantes.
Le filament ou suture modèle intraluminal de MCAo est l'un des plus largement utilisé dans la recherche sur l'AVC. Cependant, il y a un couple de différentes variantes de ce modèle, et ceux - ci sont basés sur si le microfilaments est inséré dans l'artère carotide externe (ECA, appelée la méthode Longa) 3, ou si elle est insérée dans l'ICA (dite Koizumi méthode) 4. Dans la méthode de Koizumi, l'artère carotide commune (CCA) du côté de la chirurgie doit être liée de façon permanente si le filament est retiré pour prévenir les saignements de l'incision dans le CCA, alors que dans la méthode de Longa est la CEA qui doit être attaché de façon permanente 5 . Voici la méthode Longa sera utilisée comme nous estimons que c'est un bien supérieur et un modèle plus cliniquement pertinente chirurgicale d'accident vasculaire cérébral ischémique. En outre, l'utilisation d'un mono-filament de silicium à bout, en particulier avec le procédé Longa, produit trèsMCAo reproductible , contrairement aux monofilaments de flamme émoussé, qui produisent souvent une occlusion incomplète et / ou une hémorragie méningée 6.
Le procédé de filament intraluminal peut être utilisé comme modèle de 4,6 occlusion permanente ou transitoire. Pour effectuer le modèle transitoire, le filament est retiré après une période d'ischémie (par exemple, 30 min, 60 min, 2 h), et la reperfusion est autorisé à se produire. Ce modèle, dans une certaine mesure, simule le rétablissement du débit sanguin après une intervention spontanée ou thérapeutique (par exemple, l' administration tPA) pour lyser un caillot de thromboemboliques chez l' homme. Pour le modèle permanent, le filament est tout simplement laissé en place pendant une période de temps (par exemple, 24 heures), donc pas de reperfusion se produit. Un autre avantage du procédé de filament intraluminale est le fait qu'un craniotomie n'a pas besoin d'être effectuée, ce qui permet le crâne d'être laissé intact et d'éviter toute modification de la pression et de la température intra-crânienne.
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Protocol
Ce protocole et les expériences rapportées dans la vidéo ont été approuvés par le Comité LSUHSC-S institutionnel soin et l'utilisation des animaux et sont en conformité avec les directives du NIH.
NOTE: Homme C57BL / 6 souris pesant 25-29 g ont été utilisés dans cette étude. Les souris ont été maintenues sur un régime standard chow à granulés avec un accès libre à l'eau, sous 12 h cycle lumière / obscurité dans des cages individuellement ventilées. La procédure sera effectuée dans des conditions stériles en utilisant des techniques stériles (par exemple, des gants stériles, des instruments stériles).
Préparation 1. Pré-chirurgicales
- Induire une anesthésie en utilisant une combinaison de kétamine (150 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg) injecté par voie intraperitoneale (ip). Surveiller la profondeur de l'anesthésie à pied pincée d'abord tous les 3 - 5 min et toutes les 10 minutes lorsque l'anesthésie est atteint. Alors que l'animal est sous anesthésie, administrer une pommade stérile oculaire pour prévenir la sécheresse. La dose initiale de kétamine / xylazine dure habituellement abà 30-40 minutes. Une dose supplémentaire peut être administrée, si nécessaire, qui est contrôlée par la réponse de l'animal à un pincement des pieds.
- Placez la souris dans une position couchée sur un tapis de chaleur à température régulée et maintenir la température du corps à 36,5 ± 0,1 ° C, qui est vérifiée à l'aide d'une sonde rectale.
- Raser le cou et désinfecter la peau avec de l'alcool éthylique à 70%.
2. L'occlusion de la MCA (Figure 1)
- Faire une incision au cou de la ligne médiane en utilisant Iris Ciseaux droits et se rétracter (en utilisant écarteurs) les tissus mous pour exposer les vaisseaux.
- Disséquer le CCA et la CEA à partir des tissus environnants en utilisant une pince Dumont sans endommager le nerf vague.
- Faire une suture temporaire en faisant un nœud lâche autour de la CCA en utilisant soie 6-0.
- Faire une suture permanente autour de la CEA et les petits vaisseaux s'étendant de lui en ligaturant étroitement les vaisseaux (distales à la bifurcation de la CCA).
- Faire un aro de sutureund proximal ECA à la bifurcation CCA.
- Placez un clip microvaisseaux autour de l'artère carotide interne (ICA) et l'artère ptérygopalatin (PPA).
- Faire une petite incision dans la CEA à l'aide de micro dissection ciseaux à ressort et insérez un monofilament de silicium à pointe 180 um. Faire la coupe aussi près de la suture permanente que possible pour faciliter la manipulation du filament.
- Serrer la suture temporaire autour de la CEA avec le filament inséré et retirer le clip de microvaisseaux.
- Couper la CEA entre la suture distale permanente et le point du filament utilisant des micro dissection ciseaux à ressort d'entrée.
- Guide du filament à travers l'ICA jusqu'à sentir une résistance (env. 9 - 10 pm au-delà de la bifurcation de la CCA) dans le MCA.
NOTE: Dans le cas où une trop grande résistance se fait sentir alors que la majorité du filament est encore visible, le filament peut avoir pénétré dans le PPA. Si cela se produit, retirez le filament retour à la bifurcation, doucement push vers l'avant dans les pinces à l'aide de Dumont ICA, et de faire avancer le filament jusqu'à ce qu'il puisse être visualisé dans l'ICA.
3. reperfusion
- Après une période d'occlusion de 30 min, retirez le filament en le tirant doucement en arrière en utilisant une pince Dumont et fixer la suture autour de l'extrémité ouverte de la CEA.
- Retirer la suture temporaire autour de la CCA en desserrant soigneusement la ligature en utilisant Dumont pince et le débit sanguin est repris par le CCA.
- Fermer l'incision avec une suture chirurgicale continue. Fermeture de la peau peut être réalisée soit par des sutures continues ou interrompues. agrafes de la peau sont également une méthode acceptable.
- Injecter souris avec 1 ml de solution saline sous-cutanée que le volume de réapprovisionnement et avec les carprofène analgésiques (5 mg / kg, sc) pour le soulagement de la douleur et de l'inconfort de la procédure chirurgicale, des signes qui indiquent le soulagement de la douleur supplémentaire est nécessaire comprennent dos voûté, manteau non damées, diminution de l'activité, anormaleposture, et une diminution de l'appétit.
- Observer les souris à travers la récupération de l'anesthésie dans une chauffée C cage 30 ° à l'aide d'une lampe de chaleur régulée en utilisant un régulateur de température et placez-chow purée dans une boîte de Pétri sur le plancher de la cage pour l'encourager à manger. Les souris seront logés par une cage pendant la période de reperfusion.
4. Chirurgie Sham
- souris soumises à la même procédure sans l'insertion de monofilament.
Scores neurologiques 5. post-opératoires (tableau 1; Figure 2)
- évaluer Neurologiquement souris après la période de reperfusion appropriée à l'aide d'un système de notation de 18 points l'évaluation du général; Moteur; Sensoriel; Proprioception. Un score neurologique plus élevé correspond à une diminution de la fonction neurologique.
NOTE: Les souris qui sont jugées insensibles et incapables de marcher seront euthanasiés. D'autres critères d'euthanasie comprendront une perte de poids supérieure à 20%, di respiratoirele stress et l'infection autour de la zone chirurgicale. Une chambre de CO 2 sera utilisé pour l' euthanasie et la méthode physique pour confirmer la mort sera dislocation cervicale ou thoracotomie.
6. Mesure de l'infarctus cérébral Volume (Figure 3)
- Provoquer l'anesthésie en utilisant une combinaison de kétamine (150 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg) injecté ip moniteur profondeur de l'anesthésie à pied pincée d'abord tous les 3 - 5 min et toutes les 10 minutes lorsque l'anesthésie est atteint.
- Placez la souris dans une position couchée et couper la peau de l'abdomen au cou suivie par le péritoine en utilisant l'iris ciseaux droits.
- Soulevez le sternum en utilisant une pince Dumont et couper les côtes pour exposer le cœur.
- Ouvrez la gauche et le côté droit de la poitrine à l'aide de deux paires de pinces hémostatiques, exposer le cœur.
- Insérez une aiguille 26 G attachée à une seringue de 5 ml dans le ventricule gauche et couper l'oreillette droite. Perfuser à température ambiante une solution saline normale ou phosphate saline tamponnée (PBS) jusqu'à ce que le liquide devient clair (habituellement de 3 - 5 min).
- Retirez le crâne soigneusement loin du cerveau en utilisant l'iris ciseaux droits et pince Dumont.
- Couper les bulbes olfactifs et le cervelet en utilisant une lame de rasoir de sorte que le cerveau va tenir dans la matrice. Utilisez cette matrice pour découper le cerveau en même segments. Réfrigérer la matrice avant de l'utiliser pour garder le tissu frais. Placez le cerveau dans la matrice et le mettre sur la glace.
- Trancher le cerveau en 2 mm segments coronales en utilisant deux lames de rasoir. Faire la première coupe à l'aide d'une lame de rasoir à partir de 2 mm de haut et de laisser cette lame de rasoir en place. Faire encore 2 mm coupé derrière la première. Retirer la première lame de rasoir avec le tissu attaché. Répétez ce processus jusqu'à ce que tous les tissus a été tranché.
NOTE: Il devrait y avoir 4 - 5 segments lorsque vous avez terminé. - Placez les segments en plaque de 24 puits contenant du chlorure de 2% 2,3,5-triphenyltetrazalium (TTC), qui est ensuite placé dans un bain d'eau peu profonde at 37 ° C pendant 20 min. Placer chaque segment dans un puits individuel contribue à les maintenir dans l'ordre dans lequel ils ont été coupés. Assurez-vous que la solution TTC recouvre complètement les segments de tissu. Au bout de 10 min tourner toutes les tranches sur.
- Placer une petite quantité de formol à 10% dans les puits d'une nouvelle plaque de 24 puits et transférer les segments de cette plaque, dans l'ordre dans lequel elles ont été coupées.
- Numériser les segments dans l'ordinateur et analyser la taille de l' infarctus en pourcentage de toute la tranche de cerveau 6 en utilisant un logiciel d'analyse ImageJ (NIH Image 1.57 Software) 6.
- Décrire la zone infarcie pour générer une mesure de surface. mesurer ensuite l'ensemble de l'hémisphère controlatéral pour déterminer la zone. Diviser la zone de l'infarctus par la surface de l'hémisphère controlatéral et multiplier par 100 pour déterminer le volume de l'infarctus.
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Representative Results
Souris ont été soumises à 30 minutes d' ischémie cérébrale induite par MCAo (figure 1) , suivie d'une période de reperfusion (24 h et 1 semaine sont présentées ici, mais la durée de la reperfusion peut être modifié). La mortalité a été minimale au cours de MCAo (environ 2%). ischémie Post, le taux de mortalité (moins les 24 premières heures) était d'environ 26%.
Laser Doppler a été utilisé pour confirmer l' écoulement perfusion de sang sur le territoire MCA avant et après MCAo / reperfusion. La figure 4 montre clairement que , lorsque le lien temporaire CCA est libéré après 30 min d'ischémie pour l' élimination du filament et la reperfusion de se produire, il y a une forte augmentation en perfusion, qui a atteint <100% de la perfusion de base (c. -à- avant la chirurgie) 5 min en reperfusion.
24 h après l'apparition de l'AVC (avant la mesure du volume de l'infarctus) neurolscores ogi relatifs au général, sensoriel, moteur et les déficits proprioceptives ont été évalués (tableau 1). Ce système de notation est destiné à fournir des informations objectives ( «oui ou non») des critères d'évaluation. La figure 2 montre que le score pour les souris (n = 27) à 24 h était 12,56 ± 0,7, et sont restés high 1 semaine plus tard (11,50 ± 1,5 ). Un score neurologique plus élevé correspond à une diminution de la fonction neurologique.
Volumes d' infarctus reflètent des tendances similaires au score neurologique à 24 h, soit plus que les animaux sham. 24 h après MCAo, les souris avaient de grands volumes d'infarctus (Figure 3: 15,9 ± 2,6%), qui ont été rehaussé 1 semaine après la course (28,5 ± 1,9%).
Figure 1: Schéma montrant l'emplacement de l' artère cérébrale Occlusion Moyen(MCAo) Chirurgie et Grand-navire vascularisation de la circulation cérébrale. A. chirurgicale MCAo est obtenue via l' insertion d'un filament dans l'artère carotide externe, puis dans l'artère carotide proximale moyenne. BG. Étapes pour induire MCAo. artère de communication antérieure (ACA); artère cérébrale moyenne (MCA); postérieure artère de communication (PcomA); artère cérébrale postérieure (PCA); artère basilaire (BA); artère carotide interne (ACI); artère carotide externe (ECA); ptérygopalatin artère (PPA); artère carotide interne (ICA). (Modifié avec la permission de Smith et al., Référence n ° 5.) S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2:. Le score de l' AVC 18-point Ce comprehensive pointage de course évalue les améliorations fonctionnelles en général et sensorielles, motrices et aspects proprioceptives du comportement de la souris après un AVC. Les données sont la moyenne ± SEM. * P <0,05. n = 3 souris / groupe. Les données ont été analysées en utilisant ANOVA plus un test de Bonferroni post hoc. (Modifié avec la permission de Smith et al., Référence n ° 5.) S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 3: Les volumes d' infarctus. Des souris C57BL / 6 24 heures après la MCAO Les souris ont été soumises à 30 minutes MCAo et 24 h ou 1 semaine de reperfusion A) Les cerveaux ont été enlevés, sectionnés et colorés avec 2% 2,3,5. chlorure de triphényltétrazolium (TTC). Dans les tissus vivants, déshydrogénases réduire enzymatiquement TTC à 1,3,5-voyagehenylformazaon (TPF), qui est une couleur rouge, mais dans un tissu ischémique , l'enzyme est non fonctionnelle, de sorte que le tissu reste blanche. B) Le graphique montre une augmentation du volume d'infarctus chez les souris ayant eu un accident vasculaire cérébral. Les données sont la moyenne ± SEM. ** P <0,002, **** P <0,0001 par rapport imposture; n = 4 souris / groupe. Les données ont été analysées en utilisant ANOVA plus un test de Bonferroni post hoc. Barre d' échelle = 1 cm (Modifié avec la permission de Smith et al., Référence n ° 5.) S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 4:. Perfusion du MCA Territoire Tout au long de MCAo et reperfusion Les souris ont été soumises à 30 min MCAo, et <5 min reperfusion. Les lignes de base ont été normalisés à 100%. Comme expeDECCT, la perfusion de 5 minutes dans la période de reperfusion était supérieure à celle MCAo, soit en l' absence de la perfusion du tissu est produit. Les données sont la moyenne ± SEM. * P <0,05. n = 3 souris / groupe. Les données ont été analysées en utilisant ANOVA plus un test de Bonferroni post hoc. (Modifié avec la permission de Smith et al., Référence n ° 5.) S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Tableau 1: Système de notation neurologique Un point donné pour une réponse affirmative à chacun des tests.. Marques sur 18 7,8.
| Tester | Brève description | Que faut - il tester pour? | Les références |
| Labyrinthe aquatique de Morris | Un champ ouvert procédure eau labyrinthe où les rongeurs apprennent à échapper à l'eau sur une plate-forme cachée | Mémoire spatiale, contrôle des mouvements, et la cartographie cognitive | 19 |
| Rotarod | Une tige de rotation horizontale où les rongeurs doivent marcher en avant afin de ne pas tomber | La coordination motrice, l'équilibre et la force de préhension | 20 |
| Pôle | Rongeurs placés sur un poteau et observées pour glisser ou de tomber comme ils font leur chemin vers le bas dans une cage | Les troubles du mouvement causés par corticale | 21, 22 |
| analyse de la marche | Comme les rongeurs traversent une plaque de verre leurs empreintes de pattes sont capturés pour examiner leurs mouvements | modèles de marche (pression de la patte, longueur de la foulée, la largeur et la fréquence, l'orteil propagation, angle démarche, et la rotation du corps)et la coordination motrice | 23, 24 |
| Test de l' étiquette collante | Des bandes de ruban adhésif appliqué à la partie glabre de forepaw des rongeurs pour enregistrer le temps de communiquer avec chaque patte, afin de contact, le temps de l'enlèvement, et l'ordre d'enlèvement | sensibilité forepaw et sensori déficits | 25, 26 |
| Coin | Rongeurs placés entre deux planches formant un angle de 30 °; en entrant profondément dans le coin des deux côtés de l'vibrisses sont stimulés et les arrières de rongeurs et se retourne pour faire face à l'extrémité ouverte | troubles neurodéveloppementaux et des comportements répétitifs (surveillance tourne dans un sens par rapport à la direction opposée) | 27, 28 |
| Cylindre | Les rongeurs sont placés dans un cylindre en verre avec l'activité d'élevage contre la patte avant tout de la paroi est enregistrée | Locomotrice asymétrie et évaluer Poststrl'utilisation du membre oke | 28 |
| Escalier | Rongeurs placés sur une plate-forme dans une boîte avec un escalier à double appâtés; les rongeurs sont des aliments limités à promouvoir le mouvement dans les escaliers pour recueillir l'appât | Atteindre les capacités pour chaque forelimb nécessitant indépendamment des capacités sensorielles, la dextérité et la coordination motrice | 25, 29 |
| Échelle | Rongeurs à pied à travers une échelle horizontale pour atteindre leur cage; pied glisse tout en marchant à travers l'échelle sont enregistrées | fautes de pied lors de la locomotion; forelimb et la fonction hindlimb et la coordination | 30 |
Tableau 2: Exemples de tests comportementaux murins.
| Suggestion pour GLP est le suivant: |
| - Les détails spécifiques de quel modèle d'accident vasculaire cérébral a été choisi (par exemple, Longa vs. Koizumi), et la souche, l' âge, le sexe, le poids rapporté clairement. |
| - Des études réalisées en double insu. |
| - L'analyse de puissance rapporté. |
| - Critères d'inclusion et d'exclusion dans l'étude ont décidé avant l'étude, et rapportés. |
| - Les animaux surveillés quotidiennement (apparence de base, le poids corporel et le comportement) pour tous les signes de détresse, la douleur ou la maladie. |
| - Déclaration des animaux exclus de l'étude. |
| - Randomisation des animaux en groupes. |
| - & #160; Compte rendu des résultats négatifs et positifs. |
| - Rapport de la durée de la chirurgie, l'anesthésie, la température corporelle et les gaz du sang. |
| - Rapports d'enrichissement de l'environnement utilisé, le cas échéant. |
Tableau 3: Suggestions concernant les bonnes pratiques de laboratoire.
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Discussion
Depuis sa conception il y a 20 ans, le modèle MCAo pour la course humaine impliquant l'insertion d'un filament a été utilisé dans un grand nombre d'études. Ceci est principalement dû au fait qu'il imite ce qui se passe sur le plan clinique dans la forme la plus courante d'AVC (ie, accident vasculaire cérébral ischémique). Le striatum est plus sensible à l'ischémie que le cortex cérébral, et en tant que telle, la durée de la période d'ischémie se traduira à la fois si le striatum et le cortex dorso seront affectées, ou tout simplement le striatum. Les deux infarctus et de reperfusion fois peuvent varier en conséquence, ce qui offre au chercheur la possibilité d'être en mesure d'étudier les effets pathologiques associés à des attaques ischémiques transitoires (AIT) à beaucoup plus d'infarctus.
Au fil des ans des modifications et le dépannage de la méthode de MCAo du filament a montré l'importance de la procédure en cours d' exécution dans des conditions stériles afin d' éviter le risque d'infection 9. Les résultats peuvent varierentre les espèces de rongeurs, la souche (anatomique variations ont été représentées) 10,11, le poids, et les anesthésiques utilisés, mais les tendances dans les résultats présentés ici sont susceptibles de se traduire par d' autres laboratoires où MCAo est effectué. D'autres étapes critiques à prendre en compte sont la température du corps, la pression artérielle et les gaz du sang. Il est bien établi que la température du corps affecte des lésions neurologiques, des petites lésions associées à l' hypothermie et des déficits 12 plus sévères présentés dans 13 l' hyperthermie. En tant que telle, la température doit être mesurée et contrôlée, par exemple, par l'utilisation de régulateurs de température des animaux avec un tampon thermique, de manière à maintenir la température du corps à 36,5 ° C. reconstitution du volume et l'encouragement de manger en plaçant chow ramollir au fond de la cage sont également des facteurs supplémentaires à observer. La pression artérielle et les gaz du sang 6,14 peuvent tous deux être facilement mesurés et surveillés à l' aide des équipements facilement disponibles à partir de commercfournisseurs ial.
Limites de la technique MCAo comprennent disséquer correctement le nerf vague des artères sans dommage et d'éviter l'avancement du filament dans le PPA, ce qui peut affecter non seulement la capacité d'induire la course efficace, mais aussi le taux de la souris de survie. La signification la plus importante par rapport aux alternatives aux méthodes MCAO in vivo est le taux de survie lors de l' utilisation de la méthode Longa décrit ici. Nous avons également constaté que cela correspond à une augmentation des interactions leucocytaires-endothélial cellulaires et les volumes d'infarctus a augmenté, ce qui rend ce modèle, une fois maîtrisé, un excellent outil pour l'étude de cibles thérapeutiques potentielles pour le traitement de l'accident vasculaire cérébral.
Bien que nous ayons signalé aucun ici, un certain nombre de tests de comportement peut également être effectuée, comme labyrinthe aquatique de Morris, Rotarod, test du poteau, analyse de la marche, le test de l' étiquette collante, test de coin, test du cylindre, test de l' escalier, et le test de l' échelle (voir le tableau2 pour les détails et les références). animaux Sham ont aucun problème avec la réalisation de ces tests comportementaux; cependant, les animaux d'AVC effectuent ces tests beaucoup moins de succès. Suite à cela, une zone de débat est de savoir si l' enrichissement environnemental affecte non seulement la reproductibilité du modèle MCAo, mais aussi si elle aura une incidence sur les résultats des tests comportementaux 15. Ceci est clair, mais il est intéressant de standardiser cela dans le laboratoire, et tout au long de l'étude.
Il y a une pléthore de différents tests disponibles pour la mesure de la course résultat. Nous avons présenté l'emploi de doppler laser pour les mesures de flux sanguin, un 18 point pointage en profondeur évaluation neurologique, et l'infarctus également des mesures de volume. Cependant, d'autres options sont également utiles, telles que l'imagerie. Nous employons régulièrement l'utilisation de la microscopie à fluorescence intravitale pour étudier les interactions cellulaires (caractéristique d'une réponse inflammatoire) 6 dans le ceremicrocirculation Bral en temps réel, chez les animaux anesthésiés 5,6,16. MCAo et reperfusion produit une réponse inflammatoire cérébrale accrue contre les animaux sham 5,6,16. D' autres modalités d'imagerie telles que l' imagerie par résonance magnétique 17 et la tomographie par émission de positons 18 peuvent également être utilisées, car elles offrent la possibilité d'études longitudinales qui sont cliniquement pertinente.
L'analyse histologique des tissus du cerveau, des échantillons de plasma et de sérum doivent être effectués régulièrement, car ils permettent une caractérisation plus poussée des réponses physiopathologiques à l'AVC et les mécanismes impliqués, mais aussi, et peut-être plus important encore, ils permettent aux chercheurs d'étudier les effets des composés sur le résultat d'accident vasculaire cérébral, fournissant ainsi des données importantes pour cibles thérapeutiques potentielles pour cette maladie débilitante et dévastatrice. Enfin, nous croyons qu'il est fortement recommandé pour les chercheurs à considérer non seulement ba du modèle de course les plus appropriéssed sur les exigences relatives à leur étude, mais aussi que le GLP ( «pratique de laboratoire Good") est obligatoire. Voir le tableau 3 pour les suggestions de BPL.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Male C57BL/6 mice | Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | #000664 | |
| Ketamine Hydrochloride | Morris & Dickson, Shreveport, LA | 67457-108-10 | |
| Xylazine | Akorn, Inc, Lake Forest, IL | NADA# 139-236 | |
| DC temperature control system | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-8D | |
| Mini rectal thermistor probe | FHC, Bowdoin, ME | 40-80-5D-02 | |
| Heating pad | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-2-06 | |
| Clippers | Amazon, Bellevue, WA | #64800 | |
| 70% ethanol | Worldwide Medical Products, Bristol, PA | #51011023 | |
| Dissecting microscope | Olympus, Center Valley, PA | SZ40 | |
| Iris scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11251-20 | |
| Dumont forceps (45° bent tip) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11297-00 | |
| Micro vessel clip | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18055-05 | |
| Micro dissecting spring scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 14088-10 | |
| Retractors (blunt) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18200-11 (Helen used 17022-13) | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific, Waltham, MA | 23-400-100 | |
| Gauze sponges | Covidien, Mansfield, MA | #9023 | |
| 7-0 silk braided surgical suture | Braintree Scientific, Braintree, MA | SUT-S103 | |
| 0.9% sodium chloride | Morris & Dickson, Lake Forest, IL | 0409-4888-20 | |
| 6-0 medium MCAO suture (silicon rubber coated monofilament) | Doccol Corporation, Sharon, MA | 6023PKRe | |
| Sofsilk 6-0 silicone coated braided silk | Covidien, Mansfield, MA | SUT-14-1 | |
| Carprofen | Pfizer, New York, NY | NADA# 141-199 | |
| Puralube | Dechra, Norwich, UK | NDC 17033-211-38 | |
| Physitemp temperature controller | Harvard Apparatus, Holliston, MA | TCAT-2AC | |
| Heat lamp | Harvard Apparatus, Holliston, MA | HL-1 | |
| Laser doppler probe | AD Instruments, Colorado Springs, CO | MSP100XP | |
| 24-well plates | Fisher Scientific, Waltham, MA | #353226 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Life Technologies, Carlsbad, CA | 20012-050 | |
| Single edge razor blades | Fisher Scientific, Waltham, MA | 12-640 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC) | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | T8877-50G | |
| Mouse brain matrix slicer | Braintree Scientific, Braintree, MA | BS-A 5000C | |
| Water bath | VWR, Radnor, PA | #182 | |
| 10% formalin | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | HT501128-4L | |
| ImageJ analysis software | NIH, Bethesda, MD | free download | |
| Retractor | Medical Device Purchase, Newcastle, CA | MP-740 |
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